发酵中草药复方制剂对种公猪疫病防控中的应用研究

余刚/河南省正阳县动物卫生监督所

王艳*/河南省驻马店市动物疫病预防控制中心

以种公猪为对象，投喂添加不同水平复方中草药复方制剂，研究中草药复方制剂对种公猪血液生理生化指标、疫苗抗体水平的影响。试验共分10个小组分别为1个对照组和9个试验组，每个小组各有6头种公猪。共三个中草药组方，每个组方设置3个不同比例中草药复方制剂（分别为0.25%、0.5%、1%），分圈饲养，后抽血进行血液细胞分析、免疫抗体水平检测。本试验结果表明，在饲料中添加中草药复方制剂能改变种公猪的血液生理生化指标、提高免疫抗体水平。

目前，在畜牧业的研究中，中草药以它独特的作用方式、良好的治疗效果、无抗药性、无残留以及无污染而受到广大科研人员和生产人员的青睐。中草药具有营养性、维生素样、激素样、增强机体免疫力、抗微生物、抗应激和抗寄生虫等作用，并且不容易产生抗药性和耐药性。因此，中草药不仅可以治疗个体而且可以进行群体防治。大力开发中草药复方制剂不仅能够解决动物疫病长期困扰畜牧业发展的问题，还能够解决抗生素残留问题及满足人们对食品安全的需求，具有重要的经济效益和社会效应。

本研究主要依据中兽医理论，围绕中草药调动自身抵抗力抵御外来疾病入侵这一主要法则，针对种公猪在生产上的应用目的，优化中草药配方组合以及制作工艺所研发的一种发酵中草药复方制剂对种公猪疫病防控的研究，以充分发挥中草药扶正祛邪、标本兼顾的特色和优势，使中草药的组合效应达到最优。

一、材料和方法

1.试验动物。随机抽取15月龄左右、体重180±10 kg、身体健康、繁殖性能相近的（某品种）种公猪60头，对照组和9个试验组各6头。

2.试剂与仪器。

（1）仪器。全自动血液细胞分析仪（型号BC－5300Vet），购自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；全自动酶标仪（型号ELX800），购自美国伯腾仪器有限公司；一次性注射器；无菌离心管；微量移液器等。

（2）试剂。口蹄疫抗体检测ELISA试剂盒，购自洛阳莱普生信息科技有限公司；猪瘟、蓝耳、伪狂犬抗体检测ELISA试剂盒均购自爱德士生物科技有限公司。

3.发酵中草药复方制剂的组方与配制。发酵中草药复方制剂组方：

方一组成及比例：当归、黄芪、淫羊藿、桑椹、枸杞、甘草（1∶4∶2∶2∶2∶1）。

方二组成及比例：当归、黄芪、淫羊藿、山茱萸、枸杞、甘草（1∶4∶2∶2∶2∶1）。

方三组成及比例：当归、黄芪、淫羊藿、菟丝子、桑椹、山茱萸、枸杞、甘草（1∶4∶1∶1∶1∶1∶1∶1）。

组方中各个药材干燥粉碎后，喷洒乳酸菌，置于固态发酵装置中发酵72 h，与日粮混合后按照试验设计饲喂。

4.试验设计。本次试验在某猪场进行，其品种为某品种种公猪60头，试验共分10个小组分别为1个对照组和9个试验组，每个小组各有6头种公猪。具体试验分组见表1，试验种公猪分别饲喂基础日粮（对照组）；混合0.25%方一发酵中草药的基础日粮（试验1组）；混合0.5%方一发酵中草药的基础日粮（试验2组）；混合1%方一发酵中草药的基础日粮（试验3组）；混合0.25%方二发酵中草药的基础日粮（试验4组）；混合0.5%方二发酵中草药的基础日粮（试验5组）；混合1%方二发酵中草药的基础日粮（试验6组）；混合0.25%方三发酵中草药的基础日粮（试验7组）；混合0.5%方三发酵中草药的基础日粮（试验8组）；混合1%方三发酵中草药的基础日粮（试验9组）。10个组的基础日粮完全一致，由某公司提供。日粮组成见表2。

5.饲喂管理。为保证试验数据的准确可靠，对种公猪的饲养应保证在同一饲养水平下：每天投料2次，自由采食并保证充足饮水，每小组的试验猪在一个圈舍饲养，每日打扫圈舍2次，圈舍每周冲栏消毒2次。整个试验期间，有专人饲喂，专人管理，保持种公猪每天运动 2 h。

6.样品采集。

（1）每天有专人负责观察实验动物的健康状况，并做好详细记录。

表1 试验设计

表2 基础日粮的组成

（2）使用发酵中草药复方制剂之前通过前腔静脉（或耳缘静脉）采血，采集所有的实验组和对照组动物全血各两份，2 ml/份。

（3）使用发酵中草药复方制剂之后每间隔15 d通过前腔静脉（或耳缘静脉）采集所有的实验组和对照组动物全血各两份2 ml/份，连续采取6次。

7.样品处理与检测。

（1）采集全血样品中的其中1份4℃保存，利用全自动血液细胞分析仪进行血液白细胞、中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞等计数分析。

（2）采集全血样品中的另外1份室温静置30 ～ 50 min，以 3 000 r/min 离心 20 min，取血清待检。利用ELISA检测试剂盒检测猪瘟、蓝耳病、伪狂犬、口蹄疫的抗体水平。

表3 发酵中草药复方制剂对种公猪免疫细胞数量的影响

二、结果与分析

1.发酵中草药复方制剂对种公猪血液中免疫细胞数量的影响。见表3。

从试验组和对照组血细胞的检测分析比较，由表1得知，饲喂组方三（试验7、试验8、试验9）复方中草药制剂的种公猪所检测各项血细胞数目均处在正常范围值内，而组方一（试验1、试验2、试验3）和组方二（试验4、试验5、试验6）的各项细胞检测值普遍偏高，接近于对照组的检测值。

2.发酵中草药复方制剂对种公猪抗体水平的影响。见表4。

表4 发酵中草药复方制剂对种公猪抗体水平（平均值）的影响

由表2可见：在猪瘟、猪蓝耳、猪O型口蹄疫、猪伪狂犬抗体方面，从各试验组的ELISA检测值显示得出组方一（试验1组、试验2组、试验3组）和组方三（试验7组、试验8组、试验9组）的抗体水平均较高，而组方二（试验4组、试验5组、试验6组）的抗体水平相对低些，通过组方一和组方三的试验检测数据比较分析得知组方三的的免疫抗体水平相对较高些；在组方间的中草药投饲混合比例方面，混合1%比例组方的试验组ELISA检测值显示以上四种抗体水平均高于0.25%和0.5%的比例；而对照组的ELISA检测值均基本接近临界值，疫苗抗体一般，不具有很好的保护率。本试验最终得出饲喂组方三1%比例的复方中草药制剂其疫苗免疫抗体水平最高，具有很高的免疫效力。

三、讨论与结论

白细胞是动物机体内主要免疫活性细胞之一，在正常生理条件下，白细胞数量决定机体免疫能力的高低。在白细胞分类中，当血清与病原菌（抗原）相互作用产生趋化因子时，机体内的中性粒细胞被吸引并用于杀死细菌；单核细胞通过血液进入组织转变为巨噬细胞并吞噬各种异物，调节免疫反应、白细胞生成等；嗜酸性粒细胞具有吞噬能力，参与非特异性免疫及中和组胺保护机体；嗜碱性粒细胞的颗粒内含有组织胺、肝素及过敏性慢反应物质等，参与炎症反应和速发型的过敏反应，调节微血管张力或者血液凝固性；淋巴细胞参与机体的细胞和体液免疫，调节其反应。机体内白细胞数目往往维持在相对恒定状态，尽管在不同生理或时间白细胞分裂指数出现一定的波动，但是死亡与生成的白细胞实际处于一个动态平衡；相对于白细胞分类百分比，白细胞分类数更能反映外周血白细胞对机体防御和保护的状态。

血细胞数量及其相关成分可因家畜种类、品种和性别等因素而发生变动，其生理生化值在一定程度上反映家畜新陈代谢及生理机能状况。特定血液生理指标是品种特征之一，并且与经济性状存在一定相关性。在临床上，由于血细胞参与机体免疫反应，具有防御和保护作用，因此成为疾病诊断及其病理过程监测的主要依据之一。

本研究结果表明，饲料中添加复方中草药制剂（1%组方三）能显著改善种公猪体内部分血液生理生化指标，使种公猪长期处于健康状态；并能显著提高猪体内疫苗免疫抗体水平，使疫苗充分发挥其作用对种公猪具有很好的保护。从饲料工业的长远发展来看，通过对中草药作用机理、检测标准的进一步研究，必将促进天然中草药饲料添加剂在种公猪饲料中的广泛应用。在饲料中添加中草药对种公猪生长、免疫和消化机能的影响，有待于进一步做深层次的研究。