Biosystems BA400 全自动特定蛋白仪检测尿转铁蛋白的性能研究

曹修娥，栾 芳，刘义庆，张炳昌

（山东大学附属省立医院临床医学检验部，济南250021）

0 引言

转铁蛋白是由肝脏合成的一种结合金属的单链糖蛋白，相对分子质量为77×103，等电点为pH 5.5，电泳分类为β1-球蛋白，与微量白蛋白一样均带负电荷，由于其所带负电荷比微量白蛋白少，所以更易通过肾小球滤过膜，因此尿转铁蛋白（UTRF）可能为判断肾脏早期损害的一个更灵敏的指标[1-2]。据报道，尿微量白蛋白是心、脑、肾及血管损伤的标志，是动脉硬化的早期表现，是冠心病的独立危险因素[3]。然而，动脉粥样硬化造成病变血管变窄，导致病变器官缺血，且早期的血管病变以肾细小动脉最明显，肾实质缺血，电荷屏障首先发生改变，导致转铁蛋白首先从尿液中排出[4]。因此，UTRF 不仅是早期肾损伤的标志，同时也标志着心脑血管受损的改变。

近年来UTRF 的检测及与尿IgG、β2-微球蛋白、CysC 等联合检测在临床上应用越来越广泛，随着高性能全自动特定蛋白仪的发展，UTRF 的快速定量检测也进入了全新阶段，可为临床辅助诊断提供准确、可靠的检测结果。UTRF 一直采用尿蛋白电泳方法进行定性检测，由于该方法不能定量且检测时间长等缺点，我院自2017 年4 月引入一台西班牙Biosystems BA400 全自动特定蛋白仪（以下简称“BA400 特定蛋白仪”），专门用于UTRF 等其他尿生化项目的检测。根据ISO 15189：2012《医学实验室质量和能力认可准则》和《医学实验室质量和能力的专用要求》，在一种新的检测系统应用之前，必须对其性能进行验证，包括准确度、精密度、线性范围、参考区间等[5-6]，以满足临床和科研需求。本文参考美国临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）、卫生行业标准（WS/T 420—2013）及试剂生产厂家的要求，对其检测性能进行验证，得到了良好的结果。

1 材料与方法

1.1样本

标本来自我院2017 年6 月在健康体检中心体检的健康人20 例，其中男性10 例，年龄18～81 岁，平均年龄（47.4±20.2）岁，体质量指数（body mass index，BMI）平均为22.32 kg/m2；女性10 例，年龄19～80岁，平均年龄（47.9±20.9）岁，BMI 平均为20.45 kg/m2。均排除感染、肿瘤等其他疾病。标本均为清晨中段尿10 ml，离心后取上清于1 h 内在BA400 特定蛋白仪上检测。

1.2 仪器及试剂

BA400 特定蛋白仪。实验所需试剂均由重庆博士泰生物技术有限公司生产提供。

1.3 方法

1.3.1 精密度验证

（1）批内精密度：参考WS/T 420—2013 和CLSI EP5-A2 文件[7-8]，取UTRF 试剂盒配套高、低浓度质控品各1 支，分别连续检测20 次，计算检测结果的均值、标准差及变异系数（coefficient of variation，CV）。与说明书声称的CV≤7%进行比较。

（2）批间精密度：参考WS/T 420—2013 和CLSI EP5-A2 文件[7-8]，取UTRF 试剂盒配套高、低浓度质控品各1 支，每天检测1 次，连续检测20 d，计算检测结果均值、标准差及CV。与说明书声称的CV≤10%进行比较。

1.3.2 准确度验证

依据WS/T 420—2013[7]，检测UTRF 试剂盒配套校准品（校准品可溯源至ERM-DA470K/IFCC）10次，计算10 次连续测定结果的均值，均值与理论值的偏差应小于说明书给定的范围10%。

1.3.3 线性范围验证

依据WS/T 420—2013 和CLSI EP6-A 文件[7，9]，取接近线性范围上限的高值标本H（92.1 mg/L）和低值标本L（＜1 mg/L），将H 和L 按0∶5、1∶4、2∶3、3∶2、4∶1、5∶0 的比例混匀，每份标本测定2 次，取平均值为实测值。以实测值为Y、理论值为X拟合方程，评估UTRF 在1～85 mg/L 范围内是否呈线性。结果判断：得到回归方程Y=aX+b，若a在0.97～1.03 范围内，则可判断UTRF 检测在1～85 mg/L 范围内呈线性；若a不在0.97～1.03 范围内，应舍去高或低值组数据，另做回归统计，直至回归方程中a的判断符合要求，则该范围为线性范围。

1.3.4 临床可报告范围验证

本病主要发生于即将断奶或断奶后1～2周龄的仔猪，发病迅速，突然死亡，发病仔猪多数营养良好、体格健壮。一年四季均可发生，经春季4～5月和秋季9～10月发病较多，在气候聚变和阴雨季节更易发病。初生时患过黄（白）痢的仔猪很少发病。

用接近线性范围上限的标本，按1、1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25 的比例稀释成6 个稀释度，每个稀释浓度分别检测2 次，计算测定均值与理论测量值之间的偏离程度R。以80%≤R≤120%为可接受限，低于80%或高于120%的相应稀释度为不可接受稀释度。

1.3.5 参考区间验证

依据WS/T 420—2013 和CLSI C28-A2 文件[7，10]，选择本院体检中心健康体检者新鲜尿液标本20 例进行验证，检测结果与厂家说明书规定的参考值范围（＜2 mg/L）的符合率应大于95%。

1.3.6 携带污染率验证

取高值标本（H）和低值标本（L），连续检测3 次高值H1、H2、H3，再连续检测3 次低值L1、L2、L3，携带污染率（%）=（L1-L3）/（H3-L3）×100%[10]。

1.4 统计学处理

采用SPSS 17.0 和Graphpad Prism 5 软件对数据进行统计学分析和作图。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 精密度

精密度验证结果详见表1、2。本研究通过对BA400 特定蛋白仪检测UTRF 的实验结果进行统计分析，UTRF 高、低浓度质控品的批内精密度分别为0.7%和5.3%，小于说明书要求的7%；批间精密度分别为4.1%和5.3%，均小于说明书要求的10%。BA400 特定蛋白仪精密度良好，可满足临床对精密度的要求。

表1 Biosystems BA400 全自动特定蛋白仪测定UTRF 的批内精密度验证

表2 Biosystems BA400 全自动特定蛋白仪测定UTRF 的批间精密度验证

2.2 准确度

可溯源至ERM-DA470K/IFCC 的校准品在BA400特定蛋白分析仪上检测结果均值为10.75 mg/L，理论值为10.7 mg/L，偏差为0.47%，小于说明书给定的10%，准确度合格。

2.3 线性范围

线性范围验证结果如图1、表3 所示。以UTRF 理论值（不同稀释度）为横坐标，仪器实测均值为纵坐标，得出回归方程为Y=1.028 9X+2.013 3，a=1.028 9，r2=0.992 1，显示线性良好。

图1 Biosystems BA400 全自动特定蛋白仪测定UTRF 的线性范围验证散点图

表3 Biosystems BA400 全自动特定蛋白仪测定UTRF 的线性范围验证mg/L

2.4 临床可报告范围

临床可报告范围验证结果见表4。接近线性范围上限的标本，按1、1∶5、1∶10、1∶15、1∶20 的比例稀释时，测定均值与理论值之间的偏离程度R均在80%～120%之间，为可接受限。当按1∶25 的比例稀释时，测定均值与理论值之间的偏离程度R=122.3%＞120%，所以该稀释度为不可接受限。BA400 特定蛋白仪检测UTRF 的最大稀释度是1∶20，检验结果的最大可报告范围可扩展至1 700 mg/L。

表4 Biosystems BA400 全自动特定蛋白仪测定UTRF 的临床可报告范围验证

2.5 参考区间

参考区间验证结果见表5。20 例符合要求的健康体检者UTRF 的检测结果均＜2 mg/L，验证符合率100%，表明厂家所给参考区间与临床一致，本实验室可采用厂家的参考区间。

2.6 携带污染率

3 次低值标本的检测结果分别为-0.3、0.0、0.1 mg/L，3 次高值标本的检测结果分别为92.7、93.0、92.8 mg/L。经计算得出，携带污染率为0.43%，低于仪器的标定值10%，符合要求。

3 讨论

转铁蛋白作为尿微量蛋白的一种，正常情况下由于机械屏障和电荷屏障的双重作用，不能通过肾小球滤过膜。但是当肾脏受损时，电荷屏障发生改变，转铁蛋白会首先从尿液中排出，因此，UTRF 越来越广泛地被用于监测肾小球疾病的发生和发展[11-12]。UTRF病理性增高最多见于糖尿病肾病、高血压肾病、全身性或局部炎症反应导致的肾脏受损患者，以及服用对肾功能有影响的药物患者。因此，UTRF 可用于肾内科、内分泌科、心内科、产科等对早期肾脏疾病的筛查[13-14]。

表5 Biosystems BA400 全自动特定蛋白仪测定UTRF 的参考区间验证

BA400 特定蛋白仪具有检测速度快、分析灵敏度高、自动稀释、结果准确等优点，运用BA400 特定蛋白仪通过免疫比浊法检测UTRF 是新出现的技术。根据美国颁布的《临床实验室修正法规的最终法规》要求：实验室在引入新的检测系统，向临床报告检验结果前必须作性能指标的验证[15]，故本实验作了相

关的验证。

精密度指重复检测结果之间的一致程度，良好的精密度和准确度是保证结果准确的前提，也是进行其他性能验证实验的前提[16-17]。本文依据WS/T 420—2013 和CLSI EP5-A2 文件，结果显示UTRF 高、低浓度质控品的批内、批间精密度的CV 分别为0.7%、5.3%、4.1%、5.3%，均小于厂家说明书要求的CV；线性范围是测定值与稀释倍数呈线性关系的范围，实验结果显示该测定方法线性范围为0～92.1 mg/L，相关系数r2=0.992 1，符合试剂说明书r2≥0.990 的要求。经验证，UTRF 的最大稀释度为1∶20，检测结果的最大可报告范围可扩展至1 700 mg/L。参考区间指检查结果在正常人群中的分布范围，理论上各实验室建立适合本地人群的参考区间，而实际情况是大多数实验室验证厂家提供的参考区间。本研究显示100%的检测数据在说明书提供的参考区间内，符合要求，可直接使用该参考区间。携带污染率检测结果显示，BA400 特定蛋白仪完全能满足临床要求。

综上所述，BA400 特定蛋白仪检测UTRF 在准确度、精密度、线性范围、临床可报告范围、携带污染率和参考区间等方面的性能均符合厂家和卫生行业标准的要求，再加上具有快速简便、重复性好、携带污染率低等优点，因此适用于临床实验室常规检测，能够为临床诊断提供可靠的数据。