新疆、甘肃地区甘草质量评价研究

谢晓婷，李 霞，陈卫东，彭 灿，朱光宇

(1.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012；2.安徽省中医药科学院，安徽 合肥 230012；3.安徽中医药大学药物代谢研究所，安徽 合肥 230016；4.马鞍山市中心医院，安徽 马鞍山 243000)

甘草为豆科属植物甘草(GlycyrrhizauralensisFisch.)、胀果甘草(GlycyrrhizainflataBat.)、光果甘草(GlycyrrhizaglabraL.)的干燥的根及根茎，具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药之功效[1]。近年来，由于甘草中黄酮类成分具有抗肿瘤作用[2]，甘草酸等具有抗病毒活性[3]，引起国内外广泛关注，甘草的需求量也越来越大。

甘草是多年生草本植物，由于生长环境的限制，甘草主要生长地在我国新疆、甘肃、内蒙古、宁夏等地，其药用来源有野生和栽培之分，生长环境的差异对甘草药材的质量具有一定影响[4]。

课题组前期资源调研发现，甘肃和新疆的甘草药材以乌拉尔甘草为主，胀果甘草和光果甘草较少，且种子均来源于内蒙古。因此，为探明环境差异对甘草药材质量的影响，本课题组从不同产地收集样品，围绕甘草的性状、显微特征及指标性成分的含量开展系统研究，以期为甘草药材的质量标准研究及甘草药材的后续开发提供依据。

1 材料

TOUPCAM显微镜：浙江舜宇光学科技有限公司；LC-16C高效液相色谱仪：日本岛津；乙腈为色谱纯：美国Sigma公司。甘草药材采自新疆库尔勒、甘肃兰州，见表1；饮片购自于新疆、甘肃，见表2。原植物标本由安徽中医药大学俞年军教授鉴定为乌拉尔甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)。

表1 药材采集信息

表2 饮片信息

2 方法与结果

2.1 性状描述 取干燥的乌拉尔甘草药材和饮片，按2015版《中华人民共和国药典》所载方法对甘草药材和饮片的形状、大小、表面、质地、断面、气味等特征进行描述。结果表明，甘草药材性状与2015版《中华人民共和国药典》[1]一致。甘肃、新疆相同生长年限和采收期的甘草药材，甘肃地区药材根的直径为0.6～1.5 cm，而新疆地区药材根的直径为1.0～3.5 cm。见图1。新疆、甘肃家种饮片样品比较，甘肃饮片的形成层环较新疆饮片更加明显。见图2。

2.2 显微鉴别 取干燥的乌拉尔甘草药材和饮片，按2015版《中华人民共和国药典》的显微鉴别法，对药材粉末、切片进行显微观察。两地区甘草共有的显微结构与2015版《中华人民共和国药典》描述一致。与甘肃家种甘草药材相比，新疆家种甘草药材中淀粉粒的数量略高，且新疆甘草药材的淀粉粒平均粒径略大于甘肃半野生甘草药材，其他未见有明显差异。见图3。

图1 甘草药材图(A.甘肃甘草药材；B.新疆甘草药材)

图2 甘草饮片图(A.新疆甘草饮片；B.甘肃甘草饮片)

图3甘草药材和饮片的粉末结构显微图

两地区样品的根茎横切面显微结构见图4。结果显示，与新疆野生甘草药材相比，新疆家种甘草药材的木栓层厚，木质部所占根直径的比例大，占30%～70%，维管束间间隔较小，均有裂隙；与甘肃家种甘草药材相比，新疆家种甘草药材的导管较多，排列较紧密，维管束间间隔小，其中甘肃甘草药材木质部所占根直径的比例小，占20%～50%，裂隙少；此外，春季采收的甘草药材质地疏松，秋末采收的甘草药材质地坚实。

注：A、B为新疆野生甘草药材；C、D为新疆家种甘草药材；E、F为甘肃家种甘草药材

图4甘草药材根茎横切面显微图(10×40倍)

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件与系统适用性试验 参照2015版《中华人民共和国药典》方法，选用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm)色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸水溶液为流动相B。按照以下程序梯度洗脱：0～8 min，19% A；8～35 min，19%～50% A，35～36 min，50%～100% A；36～40 min，100%～19% A。检测波长237 nm，柱温维持30 ℃，进样容积20 μL，理论板数按甘草苷峰计算应不得低于5 000。对照品和供试品色谱图见图5。

注：S1.供试品;S2.对照品；1.甘草苷;2.甘草酸

2.3.2 供试品溶液的制备 精密称定甘草粉末0.1 g(过三号筛)，置于具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，密塞，称质量，超声30 min，放冷，再称质量，用70%乙醇补足减失质量，摇匀过滤，即得。

2.3.3 对照品溶液的制备 称取甘草苷、甘草酸适量，精密称定，加70%乙醇溶解并稀释成甘草苷、甘草酸浓度分别为200 μg/mL、1.0 mg/mL的混合对照品溶液。

2.3.4 线性关系考察 取混合对照品储备液，用70%乙醇溶液配制成不同浓度的混合对照品溶液，按“2.3.1”项下方法进行检测，分别以甘草苷、甘草酸浓度(X)为横坐标，以峰面积(Y)为纵坐标，建立回归方程分别为Y=50 157X-839.61(r=0.999 6)、Y=11 634X-1 220.9(r=0.999 9)。甘草苷、甘草酸在0.1～100 μg/mL、0.5～500 μg/mL范围内线性关系良好。

2.3.5 样品含量测定 分别精密量取各供试品、对照品溶液20 μL，注入液相色谱仪，测定结果见表3。

表3 新疆、甘肃甘草中甘草苷、甘草酸含量测定结果

3 讨论

本研究结果显示，新疆、甘肃两个地区甘草的性状和显微结构均符合2015版《中华人民共和国药典》中的描述，但是在根径粗细、淀粉粒多寡、大小，木栓层厚度，木质部比例及导管排列紧密度等方面存在差异。此外，观察不同季节采收的甘草药材发现，春初采收的药材质地疏松，秋末采收的药材质地坚实，表明甘草药材采收期可能对甘草药材性状产生影响。两地区甘草中甘草苷、甘草酸含量差异可能会影响药材中有效成分的溶出，从而影响其含量的表达，对不同产地药材的采收期、有效成分的提取部位的选择有必要展开进一步研究。

实地考察发现，新疆、甘肃两地区环境差异主要体现在温度、湿度、土壤性质、海拔等方面，新疆昼夜温差大，空气湿度较低，土壤干旱，海拔约1 000 m；甘肃昼夜温差小，土壤湿度较高，海拔约3 000 m，故推测土壤性质、温度、湿度等差异对甘草药材根径大小、显微结构和易水解成分的含量产生影响，甘草生长过程中环境变化是否会导致甘草药材中成分之间的生物转化尚有待进一步研究。