高效液相色谱法测定土壤中莠去津

崔彦丽，谭头云，岑江杰，黄 慧，郑欢图，李俊杰

（浙江省化工研究院有限公司，杭州 310023）

莠去津（atrazine）是三嗪类内吸性除草剂，主要用于玉米、高粱、甘蔗、草坪、天门冬属植物等，防除稗草、马唐、豚草属等一年生禾本科杂草和阔叶杂草[1-3]。20世纪50年代莠去津由先正达公司开发上市，由于其生产成本低、除草效果好，迅速占据全球市场[4]。但由于莠去津溶解性好，残效期长且长期大量施用，在世界许多地区引起土壤和地下水的污染，引发广泛重视[5]。此外，莠去津暴露下的雄性两栖动物会发生性别逆转[6-7]，同时莠去津干扰内分泌，对人类的生殖和发育产生不利影响[8-9]。

莠去津在土壤中的吸附行为对其在环境中的分布、迁移转化有很大影响，是评价莠去津环境安全性的关键因素[10]，同时也是评价莠去津生物有效性的重要参数之一。莠去津的残留分析方法以气相色谱法（GC）为主[11]，高效液相色谱（HPLC）分析方法在莠去津土壤吸附研究中鲜有报道。本研究采用高效液相色谱建立了莠去津在土壤吸附/解吸的分析方法，以期为莠去津环境行为分析提供依据。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

UltiMate 3000高效液相色谱仪（DAD检测器），美国Thermo科技公司；XSE 205DU电子天平，METTLER TOLEDO公司。

乙腈（色谱纯），德国默克公司；莠去津原药（99.5%），Aladdin公司；娃哈哈纯净水。

1.2 液相色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：25℃；流动相：乙腈＋水（体积比70∶30）；流速：1.0 mL/min；检测波长（DAD检测器）：210 nm；进样体积：10.00 μL。

在上述液相色谱条件下，莠去津的保留时间约3.8 min，标样和试样溶液液相色谱图见图1、图2。

图1 标样溶液液相色谱图

图2 试样溶液液相色谱图

1.3 测定步骤

1.3.1 标样溶液的配制

称取莠去津标样0.1 g（精确至0.01 g），置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制备得到莠去津母液（1 000 mg/L）。将母液稀释20、200倍得到质量浓度为50、5 mg/L莠去津标样溶液。

1.3.2 莠去津添加回收试验

供试土壤采自吉林蛟河、陕西汉中、浙江绍兴、湖南耒阳、上海，土样自然风干，过0.25 mm筛。

称取每种土壤样品各10.0 g（精确至0.01 g）于250 mL具塞三角瓶中，分别加入质量浓度为50.0mg/L、5.0 mg/L莠去津标样溶液1.00 mL，使土壤样品中莠去津的添加质量分别为50.0 μg和5.0 μg，静置1 h，加入30 mL乙腈，振荡1 h，6 000 r/min离心5 min，取上清液经0.45 μm有机滤膜过滤，得到试样溶液。每个处理设5次重复，设土壤溶液为空白对照。

1.3.3 测定

待仪器基线稳定后，在上述试验条件下，连续注入莠去津标样溶液，计算各针的响应值，直至相邻2针标样溶液的响应值变化≤1.5%后，再按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.3.4 计算

将测得的2次试样溶液及试样前后2次标样溶液中莠去津的峰面积分别进行平均，试样中莠去津质量分数w（%）按下式计算：

式中：A1为标样溶液中莠去津峰面积的平均值；A2为试样溶液中莠去津峰面积的平均值；m1为莠去津标样的质量（g）；m2为莠去津试样的质量（g）；P为莠去津标样的质量分数（%）。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

将莠去津样品在190～400 nm波长扫描。其在210 nm处有良好吸收，且没有明显的干扰，故确定检测波长为210 nm。

2.2 目标峰纯度和相邻峰分离度分析

采用DAD检测器，提取出标样溶液和试样溶液目标色谱峰的起始峰高20%处、峰高50%处、峰高80%处的紫外扫描曲线。结果表明，不同峰高处3条紫外扫描曲线基本重合，说明目标峰无杂质干扰。

标样溶液目标峰与相邻峰的分离度R值分别为5.2、17.7，试样溶液中目标峰与相邻峰的分离度R值分别为5.1、18.0，以上R值均大于1.5。说明该方法具有良好的分离度。

2.3 分析方法线性相关性及最低检测浓度（LOD）

将1.3.1中莠去津母液用甲醇逐级稀释，配制成10.0、5.0、4.0、2.0、1.0、0.5 mg/L 6个不同质量浓度的标样溶液，在上述色谱条件下进样测定。以莠去津的质量浓度为横坐标x，以其相应的响应值为纵坐标y绘制标准曲线。莠去津线性方程为y=0.678 4x＋0.040 7，相关系数（R2）为1.000 0。分析方法的最低检测浓度（LOD）为8.4×10-3mg/L，如表1所示。

表1 分析方法的LOD

2.4 分析方法的系统重复性试验

在上述色谱条件下，对4 mg/L莠去津标样溶液平行测定7次。计算得到方法的相对标准偏差（RSD）为0.68%，表明试验方法系统重复性较好。

2.5 分析方法的准确度试验

方法准确度以添加回收率（%）表示，设2个水平添加浓度，每浓度5次重复。方法添加回收率试验结果见表2。结果表明：在0.5、5.0 mg/kg等2个添加水平下，莠去津在5种不同土壤中的添加回收率为92.2%～109.0%，相对标准偏差为0.04%～3.79%；方法具有良好的准确度。

表2 莠去津在5种土壤中的添加回收率及相对标准偏差（n=5）

3 结论

本研究采用高效液相色谱法，以乙腈＋水（体积比70∶30）为流动相，使用Eclipse XDB-C18液相色谱柱和DAD检测器对土壤吸附/解吸试验中莠去津进行分离和定量分析。试验结果表明，本分析方法分离效果好，且系统重复性、准确度良好，保留时间短，操作简便快速，适用于土壤吸附/解吸试验中莠去津的分析测定。