邯郸地区10 306例妇科门诊女性患者HPV基因分型及感染特征分析

王 蕾，董志玲，张利宾，王志刚，石红燕

(邯郸市中心医院检验科，河北 邯郸 056000)

人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)属乳头瘤病毒科，是一种双链小DNA病毒，有病毒蛋白外壳和核心DNA物质构成[1]，具有嗜黏膜和皮肤上皮性，广泛分布于人和动物的上皮细胞，具有高度特异性，易引发感染部位的良恶性病变。宫颈癌是目前严重威胁女性生命健康的恶性肿瘤之一，而我国又是宫颈癌高发国家之一，每年新增病例超过13万人次，从高危型HPV的持续感染到一般的宫颈癌前病变并最终发展为宫颈癌大约需要15年[2]。欧洲生殖器官感染和肿瘤研究组织提出HPV分型检测临床应用的重要性，并以提出高危型HPV检测作为宫颈癌筛查的初筛手段，目前已发现的HPV亚型有200余种，其中约40种可感染生殖道，根据其致病力大小分为高危型和低危型；每一型又包含多种HPV亚型，其中高危型HPV(HPV16、18、58、56等)主要引起外生殖器癌、宫颈癌及高度外阴、宫颈上皮内瘤变及其他部位恶性病变等；低危型HPV(HPV6、11、42等)主要诱发外生殖器和皮肤尖锐湿疣以及低度外阴、宫颈上皮内瘤及其他部位的疣类病变和低度上皮内瘤等，且其感染具有地域、民族和年龄差异[3]。本研究采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)体外扩增技术及DNA反向点杂交相结合的HPV基因分型技术对10 306例妇科门诊女性患者HPV不同基因型的检测结果进行分析研究，为邯郸地区女性宫颈癌的防治提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2016年3月至2017年11月在邯郸市中心医院妇科门诊就诊以及进行健康体检的10 306例女性患者为研究对象，进行HPV基因分型检测，年龄15～85岁,平均(40±10)岁。纳入标准：①无子宫切除手术史或宫颈手术，采样前72 h避免进行阴道冲洗和使用药物治疗。②有性生活史，并愿意在采样前24 h内避免性接触。排除标准：接受过疫苗接种、妊娠期、哺乳期。

1.2方法

1.2.1样本采集 采样在非月经期，采样前48 h无性行为，无阴道内用药。以专用宫颈脱落细胞采集器采集，医护人员以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈，用拭子将宫颈口过多的分泌物擦拭去。取出宫颈刷置于宫颈口，绕一个方向旋转4～5周以获得足量的上皮细胞样本，再将宫颈刷头部放入洗脱管中，沿刷柄折痕处将宫颈刷柄折断，并旋紧洗脱管盖，保持洗脱管直立放置。标本室温保存不超过12 h，4 ℃保存不超过7 d。

1.2.2检测方法 采用PCR体外扩增技术和DNA反向点杂交相结合的HPV基因分型检测技术。试剂盒由深圳亚能生物技术有限公司提供，采用罗氏480PCR仪进行HPV基因分型检测。检测分为HPV DNA的提取、PCR扩增、杂交、洗膜、显色几个步骤，严格按照操作规程完成。共检测23种HPV基因型，包括17种高危型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82)，6种低危型(HPV6、11、42、43、81、83)。结果判断：根据膜条上蓝色斑点的位置，读取相应位置上标注的各个基因型信息；如果仅一个基因型位点出现蓝色斑点，则可判断为相应基因型的单一感染；若多个基因型位点出现了蓝色斑点，则可判断为相应基因型的混合感染。

1.3统计学方法 采用SPSS 16.0统计软件行数据分析，计数资料以例(%)表示，各组比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1HPV感染率以及HPV基因亚型感染分布情况 10 306例女性患者中，共检出HPV阳性3 737例，感染例次为4 774例次，检出亚型23种，感染阳性率为36.26%。其中检出HPV高危3 674例次，占总感染例次的76.95%，感染的基因亚型前3位分别为HPV16、HPV52和HPV51，阳性构成比依次为12.97%、10.45%和7.12%，17种高危型均被检出；检出HPV低危1 100例次，占总感染例次的23.05%，感染的基因亚型前3位分别为HPV42、HPV81、HPV6，阳性构成比依次为5.30%、5.07%和4.80%，6种低危型也均被检出。见表1。

2.2HPV感染情况的年龄分布情况 10 306例女性患者中26～35岁和36～45岁两个年龄段进行HPV筛查的人数较为集中，各年龄段HPV感染率比较差异有统计学意义(χ2=603.500，P<0.001),见表2。

2.3单一与多重HPV感染分布规律 3 737例HPV感染阳性病例中，单一感染2 703例，占HPV阳性病例的72.33%；二重感染556例，占HPV阳性病例的14.87%；三重感染300例，占HPV阳性病例的8.03%；四重感染92例，占HPV阳性病例的2.46%；五重感染44例，占HPV阳性病例的1.18%；五重以上感染42例，占HPV阳性病例的1.12%。

2.4各年龄段HPV感染类型分布规律 各年龄段HPV单一感染率以46～55岁年龄段最高，多重感染率以15～25年龄段最高。见表3。

3 讨 论

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，在我国女性患者中发病率仅次于乳腺癌，在发达国家女性恶性肿瘤中占第7位，在发展中国家发病率居女性恶性肿瘤第2位，在我国每年宫颈癌的新发现病例为50万左右，并有近27.4万的患者死于该病[4]。宫颈癌及其癌前病变被认为是一个多因素、多步骤的疾病，生物学因素在宫颈癌发病中的作用在近年来的研究中备受重视，HPV感染已被公认为宫颈癌发病的确切病因。2017版HPV感染疾病相关问题专家共识[5]中提到，推荐HPV-DNA检查作为宫颈癌筛查的主要检查手段，尤其对于已婚女性人群结合宫颈细胞学检查可以提高宫颈癌变的诊断效果并降低漏诊率。《中国癌症筛查及早诊早治指南(试行)》[6]对于宫颈癌的筛查，根据不同地区以及经济水平高低推荐不同筛查方案：①最佳首选筛查方案，宫颈取材HPV-DNA检测结合宫颈液基细胞学检查，适用于我国目前经济发达地区及或经济条件比较好的家庭妇女宫颈癌筛查；②一般筛查方案，宫颈取材HPV-DNA检测和传统巴氏涂片相组合，适用于目前经济中等发达地区；③仅用醋酸染色后肉眼观察/联合复方碘染色后肉眼观察筛查，适用于经济不发达、贫穷落后以及卫生资源较缺乏地区[7]。目前来我院体检的人群大多采用方案①进行筛查，方案①中两者结合应用可以同时了解患者病变的程度并明确HPV感染亚型，以一步提高确诊率并预判病情。HPV感染疾病的研究正逐步从妇产科走向多学科[8]，因此随着HPV筛查的普及，了解其感染的地域、民族及年龄组之间的差别，以及HPV亚型感染的分布规律，对于宫颈癌的筛查与预防以及由HPV感染引起的其他相关疾病的研究起重要作用。

表1 HPV基因亚型感染分布

HPV：人乳头瘤病毒

表2 HPV感染阳性率与年龄分布的关系

HPV：人乳头瘤病毒

表3 各年龄段HPV感染亚型分布规律

HPV：人乳头瘤病毒

本研究结果显示，邯郸地区HPV感染阳性率为36.26%，同其他报道有所差异，如重庆地区为30.8%[9]，四川东北地区为49.12%[10]，茂名地区为26%[11]，南京地区为10.79%[12]，深圳地区为20.76%[12]，长沙地区为14.8%[1]，北京地区为23.96%[13]，新疆地区维吾尔族妇女为20.2%[14]；如上所示，HPV感染率存在地域差异，另外与研究群体是否为门诊患者或体检患者有关，四川东北地区的高感染率可能与其研究群体为泌尿系感染患者有关。有报道显示，中国女性HPV感染率为15.71%[15]，宫颈病变患者感染率为82.43%，感染率和高危型分布均存在显著地区差异，北方地区感染率高于南方地区[9]。地区性感染差异有可能源于北方气候温度差异较大，造成女性易患疾病引起抵抗力降低，同时也不能排除饮食习惯及遗传差异因素。本研究中，高危HPV感染的基因亚型前3位分别为HPV16、HPV52和HPV51，阳性构成比依次为12.97%、10.45%和7.12%。也有研究表明[11]，高位HPV感染的基因型前3位为HPV16、HPV58和HPV33，而鲍彦平[16]报道中提到HPV16、58、52亚型在亚洲(尤其是中国高发地区)人群中具有重要意义。

邯郸地区HPV感染年龄段根据本研究显示以36～45岁年龄段感染率最高，感染率为53.33%；其次为26～35年龄段，感染率为27.62%，有关HPV感染与年龄段相关性研究结果国内外文献报道存在差异，李晨等[4]调查福建医科大学附属医院5 869例女性患者，发现≤25年龄组感染率最高，感染率为32.5%；邓健康和郭晓兰[10]对四川东北地区的女性患者筛查发现≥50岁女性患者HPV感染率最高，高达为79.77%。不同地区各年龄段HPV感染率差异的原因可能与就诊患者类型以及参与筛查人数有关。本研究显示不同年龄段HPV感染以单重感染为主，其中多重感染以15～25岁年龄段最高，分析其原因可能与青春期和更年期的激素水平和免疫力变化有关。因此，在进行女性HPV的筛查时应关注这两个年龄段人群。

综上所述，邯郸地区女性HPV感染率较高，应加强和普及筛查工作，提高人群对于HPV的认识，对于预防和早期发现宫颈癌，以及疾病的防治、患者生存期延长、生命质量的改善有重要意义。HPV疫苗接种是预防宫颈癌发病、降低死亡率的有效办法。特别是在卫生资源缺乏、细胞学早期筛查不可及和筛查效果不明显的地区，HPV疫苗接种就显得更加重要[17]。然而目前在中国，除了医务工作者，普通大众对HPV和HPV疫苗的认知度较低，对HPV疫苗的接受度也不高[18]。WHO优先推荐9～13岁女孩接种HPV疫苗，因此需要以学校为单位开展HPV相关知识宣传和教育，提高青少年对HPV感染和疫苗的认知程度，以提高疫苗接种率，从而真正达到对HPV感染的预防性效果。