顶空气相色谱法测定银翘解毒合剂中3种成分

白钢钢， 张 莉， 陈骁鹏， 仇雅静

（1.泰州市食品药品检验所，江苏泰州225300；2.江苏省食品药品监督检验研究院，江苏南京210008）

银翘解毒合剂为辛凉解表的临床常用中成药，对扁桃体炎、上呼吸道感染具有较好疗效［1-2］，由9味药组成，君药连翘、金银花，臣药薄荷、牛蒡子、荆芥、淡豆豉，而淡竹叶、桔梗、甘草则为佐使之药［3-4］，虽然该制剂具有较广泛的临床适用范围，但其质量控制标准存在不足，尤其是对薄荷和荆芥的要求较低［1］。

研究表明，薄荷中主要挥发性成分为薄荷脑［5-7］，含有量较高，而荆芥中该成分仅微量甚至检测不出，故可将其作为专属性成分；荆芥中主要挥发性成分为薄荷酮、胡薄荷酮［8-10］，其中后者为2015年版 《中国药典》［11］含有量测定指标；霍丽霞等［12］用乙酸乙酯萃取银翘解毒合剂后，直接进样测定其中薄荷酮、薄荷脑、胡薄荷酮含有量，但该方法操作复杂，供试品溶液中组分多，分离难度大，而且易污染色谱柱。本实验建立顶空气相色谱法测定银翘解毒合剂中薄荷酮、薄荷脑、胡薄荷酮含有量，简化了提取过程，可降低干扰成分影响和色谱柱污染，有助于完善现行标准中对薄荷、荆芥检测项目的不足。

1 材料

1.1 仪器 GC-2010Plus气相色谱仪，配置HS-20顶空进样器、FID氢火焰离子化检测器 （日本岛津公司）；CPA224S电子天平 （德国Sartorious公司）；UMX5电子天平 （瑞士Mettler-Toledo公司）。

1.2 试药 薄荷脑 （批号 110728-200506，含有量99.8%）、薄荷酮 （批号111705-201105，含有量99.8%）、胡薄荷酮 （批号111706-201606，含有量99.8%）对照品均购自中国食品药品检定研究院。银翘解毒合剂共23批，购自宝鸡必康嘉隆制药有限公司、陕西中医学院制药厂、通化金汇药业有限公司、广东万年青制药有限公司、北京同仁堂有限公司、江西远东药业有限公司。乙酸乙酯、甲醇均为分析纯；水为超纯水。

2 方法

2.1 色谱条件 Agilent HP-5毛细管柱 （30 m×0.25 mm，0.25 μm）；初始柱温50℃，保持1 min，以15℃／min速率升至70℃，保持10 min，以2℃／min速率升至80℃，保持10 min，以8℃／min速率升至150℃，保持2 min，以10℃／min速率升至240℃；FID检测器温度250℃；分流比20∶1；顶空进样恒温箱90℃下平衡40 min，同时轻微振荡；样品流路温度100℃；传输线温度110℃。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取薄荷酮、薄荷脑、胡薄荷酮对照品适量，加甲醇分别制成5、2、1 mg／mL贮备液，再加水分别稀释成0.9、0.25、0.1 mg／mL，即得。

2.2.2 供试品溶液 精密量取合剂5 mL，置于20 mL顶空瓶中，即得。

2.2.3 阴性样品溶液 参照剂现行标准，制成缺薄荷、荆芥的阴性样品，按 “2.2.2”项下方法制备，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验 取供试品 （样品17）、对照品、阴性样品溶液各5 mL，置于20 mL顶空瓶中，在 “2.1”项色谱条件下进样测定，结果见图1。由图可知，供试品溶液色谱图中存在与对照品相同保留时间的色谱峰，阴性无干扰，方法专属性良好。

2.3.2 线性关系考察 精密量取对照品溶液5 mL，置于20 mL顶空瓶中，在 “2.1”项色谱条件下进样测定。以溶液质量浓度为横坐标 （X），峰面积积分值为纵坐标 （Y）进行回归，以S／N为10、3时对应的质量浓度分别计算定量限、检测限，结果见表1，可知各成分在各自范围内线性关系良好。

表1 各成分线性关系

2.3.3 精密度试验 精密量取对照品溶液5 mL，置于20 mL顶空瓶中，平行6份，在 “2.1”项色谱条件下进样测定，测得薄荷脑、薄荷酮、胡薄荷酮峰面积RSD分别为0.46%、1.00%、1.13%，表明仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性试验 取合剂适量，按 “2.2.2”项下方法制备供试品溶液， 于 0、2、4、6、8、12、16、26 h在“2.1”项色谱条件下进样测定，测得薄荷脑、薄荷酮、胡薄荷酮峰面积RSD分别为0.60%、1.02%、0.93%，表明溶液在26 h内稳定性良好。

2.3.5 重复性试验 取合剂适量，按 “2.2.2”项下方法制备供试品溶液，平行6份，在 “2.1”项色谱条件下进样测定，测得薄荷酮、薄荷脑、胡薄荷酮含有量RSD分别为1.86%、1.66%、1.60%，表明该方法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验 精密量取合剂2.5 mL，精密加入对照品溶液2.5 mL，摇匀，平行6份，在 “2.1”项色谱条件下进样测定，计算回收率，结果见表2。

2.3.7 样品含有量测定 23批合剂按 “2.2.2”项下方法制备供试品溶液 （部分合剂测定结果高于线性范围，纯水稀释后再测定），在 “2.1”项色谱条件下进样测定，计算含有量，结果见表3。

3 讨论

3.1 提取方法比较 本实验比较了乙酸乙酯萃取后进样、顶空直接进样测定结果，发现两者无显著差异，但后者不需复杂的前处理，可减少检验人员工作量及实验中带来的人为操作误差，而且不使用有机溶剂，为环境友好型的检测方法。

表2 各成分加样回收率试验结果 （n＝6）

3.2 顶空条件优化 本实验考察了温度70、80、90℃对提取率的影响，发现90℃下各成分峰面积最高。再考察了提取20、40、60 min对提取率的影响，发现提取40 min时虽然各成分峰面积小于60 min时，但差异不显著，而且更快速。因此，选择样品加热温度为90℃，提取时间为40 min。

表3 各成分含有量测定结果 （mg／mL）

3.3 含有量分析 表3显示，3批银翘解毒合剂未检测出薄荷酮、薄荷脑、胡薄荷酮；1批未检测出薄荷酮、胡薄荷酮；2批未检测出胡薄荷酮，虽检出薄荷酮、薄荷脑，但前者含有量极低，在线性范围以下；1批未检测出胡薄荷酮，由此可知，生产企业可能存在挥发油提取工艺不规范、未投料或投料劣质药材的情况，而且有一些使用叶片量极少，检测不到挥发性成分的薄荷。同时，薄荷酮含有量范围 0.000 74～0.11 mg／mL，相差 148倍；薄荷脑0.001～0.56 mg／mL， 相差 560倍； 胡薄荷酮 0.000 8～0.021 mg／mL，相差26倍，均存在较大差异，也印证了上述现象。

另外，样品19、21、22中未检出胡薄荷酮，未检出或检出微量薄荷酮，但检出大量薄荷脑，而且其GC色谱图中仅发现溶剂峰和薄荷脑峰。银翘解毒合剂现行标准中采用TLC鉴别，并以薄荷脑为对照品，用于确定制剂中是否添加薄荷，但未加入薄荷或使用劣质药材后加入薄荷脑时，也会符合上述标准，故GC法更有利于鉴别该制剂中的薄荷。

4 结论

本实验建立顶空气相色谱法测定银翘解毒合剂中3种成分的含有量，该方法操作简便，准确可靠，可为控制该制剂中挥发性成分、准确评价其质量奠定基础。