重组禽流感病毒H5+H7二价灭活疫苗免疫效果评估

李剑锋 龙凤 黄丽非

摘要：对崇左市2017年10月至2018年9月家禽实施免疫重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1亚型 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）的免疫效果进行了评估，旨在为崇左市家禽禽流感防控决策提供参考。结果表明，H5亚型禽流感免疫抗体合格率为90.35%，H7亚型禽流感免疫抗体合格率为84.94%，禽流感病毒核酸均为阴性。H5+H7免疫抗体水平较高，抗体合格的血清中，H5平均效价为8.33log2，H7平均效价为7.41log2，疫苗安全稳定，可有效抵抗当前禽流感流行毒株的侵袭。

关键词：重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗；免疫；抗体效价；效果评估

中图分类号：S851.35 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2019）02-0010-02

禽流感（Avian influenza，AI）是由A型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起禽类的一种从呼吸系统到严重全身败血症等多种症状的传染性疾病。禽流感病毒属于RNA病毒的正黏病毒科流感病毒属，其最显著的生物学特性是亚型众多，变异频繁[1]。2017年2月起，全国多地有发生人感染H7N9流感的病例，严重危害了公共卫生安全和养禽业的健康发展。为进一步做好高致病性禽流感防控工作，保障养殖业生产安全和公共卫生安全，农业部决定从2017年秋季开始，在家禽免疫H5亚型禽流感的基础上，对全国家禽全面开展H7N9免疫[2]。本试验对崇左市2017年10月至2018年9月家禽实施免疫重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1亚型 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）的免疫效果进行了评估，旨在为崇左市家禽禽流感防控决策提供参考。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及仪器

禽流感病毒H5、H7亚型抗原和阳性血清为哈尔滨维科生物技术开发公司产品，所用试剂严格按照规定保存，试剂均在有效期内；0.01 mol/L pH7.2的PBS液；1% SPF鸡红血球悬液；微量移液器；梯度PCR仪；电泳仪；凝胶成像系统。

1.2 方法

参照GB/T 18936-2003高致病性禽流感诊断技术-血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验；NY/T 772-2013禽流感病毒RT-PCR检测技术。

1.3 样品采集

样品均采集自重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗免疫后21 d以上的家禽养殖场（户），从2017年10月至2018年9月，在崇左市7个县（市、区）的家家禽养殖场（户）随机采集鸡血清共计1 202份，用于检测禽流感H5、H7亚型抗体，另外采集相对应的家禽咽喉/泄殖腔棉拭子，用于检测禽流感病毒。

1.4 判定标准

按照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T 18936-2003），实施重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗免疫的家禽，HI抗体效价≥4 log2为免疫合格。按照NY/T 772-2013禽流感病毒RT-PCR检测技术，电泳结果出现相应扩展条带判为亚型禽流感病毒核酸阳性，否则判为亚型禽流感病毒核酸阴性。

2 结果与分析

2.1 家禽血清、病原检测结果

共调查采集38个商品化规模场和52户散养户，家禽存栏共464 540羽，其中：商品化规模场存栏460 294羽，散养户存栏4 246羽；样品涵盖崇左市7个县（市、区）重点家禽养殖区域及边境区域。共采集家禽血清及相对应的咽喉/泄殖腔棉拭子各1 202份，结果见表1。由表1可见，禽流感病原学共检测1 202份咽喉/泄殖腔棉拭子样品，检测结果全为禽流感病毒核酸阴性；检测家禽血清共1 202份，H5亚型抗体合格数1 086份，免疫抗体合格率为90.35%；H7亚型抗体合格数1 021份，免疫抗体合格率为84.94%。

2.2 不同群体家禽H5+H7免疫抗体检测结果

本次调查共采集38个商品化规模禽场和52户散养户，家禽血清分别为817份、385份。H5免疫抗体检测结果：商品化规模场合格血清696份，合格率为85.19%，群体合格率为89.47%（34/38）；散养户合格血清384份，合格率为99.74%，群体合格率为98.08%（51/52）。H7免疫抗体检测结果：商品场合格血清640份，合格率为78.34%，群体合格率为84.21%（32/38）；散养户合格血清381份，合格率为98.96%，群体合格率为98.08%（51/52）（表2）。结果表明，抽检家禽血清抗体合格率均达农业农村部要求（70%），其中H5亚型免疫效果较H7亚型要好。

2.3 血清抗体效价情况

分别统计商品化规模場和散养户的家禽血清HI效价 ，计算HI效价≥4 log2的血清样品效价平均值，结果显示，商品场H5抗体平均效价为8.24 log2，H7抗体平均效价为7.25 log2，H5抗体平均效价比H7抗体平均效价高近1 log2。散养户H5抗体平均效价为8.64 log2，H7抗体平均效价为7.68 log2，H5抗体平均效价比H7抗体平均效价高0.96 log2（表3）。结果表明，重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗产生的免疫应答较好，商品化规模场和散养户家禽血清抗体平均滴度均高于7 log2，具有较好防御当前流行禽流感H5、H7亚型毒株的能力。

3 小结与建议

崇左市2017年10月至2018年9月实施免疫重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1亚型 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）的免疫效果抽查结果表明，所检家禽没有受到高致病性禽流感野毒感染，重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗使用安全稳定，抗体水平较高，免疫应答效果较好，家禽的抗体平均效价高，说明崇左市内家禽具有很好的抵御当前禽流感流行毒株感染的能力。建议防疫部门继续抓好禽流感疫苗免疫工作，同时做好抗体和禽流感病原监测工作，及时了解家禽抗体基本情况和病原流行情况。

抽查发现有个别规模养殖场家禽血清抗体抽检不合格，有个别养殖场抗体合格数为0，说明商品化规模场家禽禽流感免疫工作存在不规范的问题，工作存在漏打、假打现象，免疫责任落实不到位等。建议各地动物疫病防控机构定期开展动物防疫人员学习培训，提高技能，树立责任意识，认真做好动物免疫工作，尤其是每年的春、秋两季重大动物疫病免疫工作，同时要不定期开展免疫抗体监测以及病原学监测工作，查漏补缺，确切地使动物防疫工作不留死角。

参考文献：

[1] SAIF Y M.禽病学（第十二版）[M].苏敬良，高 福，索 勋译.北京：中国农业出版社，2012.

[2] 农业部.农业部关于切实做好全国高致病性禽流感秋季免疫工作的通知（农医发[2017]24号）[EB/OL].http：//www.moa.gov.cn/govpublic/SYJ/201707/t20170711_5744436.htm，2017-07-07.