神黄豆茎叶中酚性成分研究

王闪闪，黄文忠，曾广智，李干鹏，朱 鸿，张 再，高雪梅

(1. 云南民族大学 民族药资源化学国家民族事务委员会-教育部重点实验室，云南 昆明 650500；2. 昆明学院 化学科学与技术系，云南 昆明 650500)

神黄豆 (CassiaagnesBrenan) 系豆科 (Leguminosae) 决明属乔木植物，生山地林中，原产云南、广西等地并分布于中南半岛.果有类似兴奋剂的作用，种子入药，可治胃痛、感冒、疟疾、麻疹、水痘、便秘等[1].黄波、和东阳等[2-3]对神黄豆的化学成分进行过研究，但对神黄豆药理活性研究的文献鲜有报道，为充分利用我国丰富的资源，进一步寻找新的活性天然产物，文中对神黄豆茎叶部分的化学成分进行研究，从中分离得到10个单体化合物(见图1)，其中1～9为黄酮类化合物，化合物1～6、8和10为首次从该植物中分离得到.

1 实验部分

1.1 仪器与材料

Bruker AM-400 超导核磁共振仪(德国 Bruker 公司)；VG Antospec-3000质谱仪(国 VG公司)；旋光仪Jasco DIP-1000(日本 Spectroscopic 公司)；Perkin Elmer spectrum 100 FT-IR 红外光谱仪(美国 Perkin Elmer 公司)；Agilent 1100高效液相色谱仪，色谱柱为Zorbax SB-C18柱(21.2 mm×25 cm).100～200、200～300 目硅胶和 GF254硅胶板，青岛海洋化工厂产品；二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、石油醚、丙酮(工业级)，云南祥瑞化玻教仪研发有限公司；甲醇(分析纯)，天津市瑞金特化学品有限公司； 薄层色谱法显色，显色剂为 5% H2SO4乙醇显色剂，喷洒后适当加热即可；纯净水，娃哈哈饮用纯净水.

实验用决明属植物粉花山扁豆2014年5月采于云南省西双版纳州，经中科院西双版纳植物园马宏鉴定为豆科苏木亚科决明属植物神黄豆(CassiaagnesBrenan)的茎叶.

1.2 提取与分离

取晒干的神黄豆茎叶15 kg，粉碎过0.441 mm筛，然后用体积分数为90%乙醇溶液室温下提取 3 次，每次用量为 20 L，室温浸泡、超声 3 次(每次 30 min)，过滤，减压浓缩，得到浸膏 2.2 kg，经硅胶柱柱色谱粗分，用不同比例的V(二氯甲烷)∶V(甲醇)流动相进行梯度洗脱，经TLC指导合并相同组分，得到 8 个极性段 A～H (1∶ 0、20∶ 1、9∶ 1、8∶ 2、7∶ 3、6∶ 4、1∶ 1、0∶ 1)，C部分(V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=9∶ 1,90 g)经200～300目硅胶柱色谱，V(二氯甲烷)∶V(乙酸乙酯)=(1∶ 0、20∶ 1、9∶ 1、8∶ 2、7∶ 3、6∶ 4、1∶ 1、1∶ 0)梯度洗脱，分成8个部分，C1～C8，其中组分C3～C7分别经硅胶柱层析得亚组分，再经硅胶柱色谱，凝胶色谱，高效液相色谱等方法，分离纯化得到10个单体化合物，分别为化合物1～10.

2 结构鉴定

化合物1黄色粉末，溶于甲醇.ESI-MS (m/z) 433.1 [M+H]+;1H NMR (400 MHz, CDOD3)δ:7.73 (2H, ss, 2′-H, 6′-H), 6.91 (2H,ss, 3′-H, 5′-H), 6.33 (1H,d,J=1.55 Hz, 6-H),6.16(1H,d,J=1.55 Hz,8-H),5.35 (1H,s,1″-H),4.21(1H,s,2″-H),3.70 (1H,m,3″-H),3.29(2H,m,4″-H,5″-H),0.90 (3H,d,J=4.9 Hz, 6″-H);13C NMR(100 MHz, CDOD3)δ:179.7 (C-4),165.9 (C-2),163.2(C-4′),161.6 (C-9), 159.4(C-7),158.6(C-5),136.3(C-6),132.0(C-2′,C-6′),122.8(C-1′),116.7(C-3′,C-5′),106.1(C-10),103.6(C-1″),99.9(C-8),94.9(C-3),73.2(C-,5″),72.2(C-4″),72.2(C-3″),72.0(C-2″),17.8(C-6″), 以上数据与文献[4]报道基本一致，因此鉴定该化合物为山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷.

化合物2棕色固体，溶于甲醇.ESI-MS (m/z) 449.1[M+H]+;1H NMR (400 MHz, CDOD3)δ:7.25 (1H, s, 3′-H), 7.22 (1H, d,J= 8.4 Hz, 5′-H), 6.83 (1H, d,J= 8.1 Hz, 6′-H), 6.29 (1H, s, 8-H, 6.12 (1H, s, 6-H), 5.26 (1H, s, 1″-H), 4.60 (1H, s, 2″-H), 4.14 (1H, s, 3″-H), 3.67 (1H, d,J= 7.8 Hz, 4″-H), 3.33 (1H, dd,J= 9.4,15.4 Hz, 5″-H), 0.86 (3H, d,J= 5.9 Hz, 6″-H);13C NMR(100 MHz, CDOD3)δ:179.4 (C-4), 166.1 (C-7), 163.2 (C-5), 158.5 (C-2), 157.9 (C-9), 150.8 (C-4′), 147.5 (C-2′), 136.3 (C-3), 122.5 (C-1′), 122.4 (C-6′), 117.4 (C-3′), 116.8 (C-5′), 105.7 (C-10), 104.3 (C-1″), 100.0 (C-6), 94.8 (C-8), 73.6 (C-3″), 72.8 (C-2″), 72.4 (C-4″), 72.3 (C-5″), 18.7 (C-6″), 以上数据与文献[5]报道基本一致，因此鉴定该化合物为桑色素-3-O-α-鼠李糖苷.

化合物3黄色粉末，溶于甲醇.ESI-MS (m/z) 287.1[M+H]+;1H NMR (400 MHz, CDOD3)δ:8.07 (2H, ss, 2′-H, 6′-H), 6.89 (2H, ss, 3′-H, 5′-H), 6.38 (1H, s, 6-H), 6.17 (1H, s, 8-H);13C NMR(100 MHz, CDOD3)δ:177.5 (C-4), 165.7 (C-7), 162.6 (C-5), 160.7 (C-4′), 158.4 (C-9), 148.2 (C-2), 137.3 (C-3), 130.8 (C-2′, 6′), 123.9 (C-1′), 116.5 (C-3′, 5′), 104.6 (C-10), 99.4 (C-6), 94.6 (C-8), 以上数据与文献[6]报道基本一致，因此鉴定该化合物为山奈酚.

化合物4黄色粉末，溶于甲醇.ESI-MS (m/z) 287.1[M+H]+;1H NMR (400 MHz, CDOD3)δ: 7.36 (1H, s, 8-H), 7.35 (1H, s, 6-H), 6.87 (1H, d,J= 8.5 Hz, 2′-H), 6.51 (1H, s, 6′-H), 6.41 (1H, d,J= 1.6 Hz, 3-H), 6.18 (1H, d,J= 1.5Hz, 5′-H);13C NMR (100 MHz, CDOD3)δ:184.3 (C-4), 166.5 (C-7), 166.2 (C-2), 163.4 (C-9), 159.6 (C-5), 151.2 (C-4′), 147.2 (C-3′), 123.8 (C-1′), 120.1 (C-6′), 116.9 (C-5′), 114.3 (C-2′), 105.2 (C-10), 104.0 (C-3), 100.3 (C-6), 95.2 (C-8), 以上数据与文献[7]报道基本一致，因此鉴定该化合物为5, 7, 3′, 4′-四羟基黄酮.

化合物5黄色晶体, 溶于甲醇.ESI-MS (m/z) 317.1 [M+H]+;1H NMR (400 MHz, CDOD3)δ:3.75 (3H, s, H-11), 6.17 (1H, s, 6-H), 6.37 (1H, s, 8-H), 6.87 (1H, d,J= 8.4 Hz, 5′-H), 7.50 (1H, d,J= 8.4 Hz, 6′-H), 7.60 (1H, s, 2′-H);13C NMR (100 MHz, CDOD3)δ:180.4 (C-4), 166.1 (C-7), 163.2 (C-5), 158.6 (C-9), 158.1 (C-2), 150.1 (C-4′), 146.6 (C-3′), 139.7 (C-3), 123.1 (C-1′), 122.5(C-6′), 116.6 (C-5′), 116.5 (C-2′), 106.0 (C-10), 99.9 (C-6), 94.9 (C-8), 60.7 (C-11), 以上数据与文献[8]报道基本一致，因此鉴定该化合物为3-甲氧基槲皮素.

化合物6黄色粉末，溶于甲醇.ESI-MS (m/z) 303.0 [M+H]+;1H NMR (400 MHz, CDOD3)δ:6.16 (1H, d,J= 2.0 Hz, 8-H), 6.38 (1H, d,J= 2.0 Hz, 6-H), 6.89 (1H, d,J= 3.4 Hz, 5′-H), 8.06 (1H, dd,J= 8.4, 2.4 Hz, 6′-H), 8.08 (1H, d,J= 2.2 Hz, 2′-H);13C NMR (100 MHz, CDOD3)δ:177.5 (C-4), 165.7 (C-7), 162.6 (C-5), 158.4 (C-9), 148.2 (C-3′), 147.2 (C-2), 137.3 (C-3), 123.8 (C-6′), 116.5 (C-2′, C-5′), 105.1 (C-10), 99.4 (C-6), 94.6 (C-8), 以上数据与文献[9]报道基本一致，因此鉴定该化合物为3, 5, 7, 3′, 4′-五羟基黄酮.

化合物7白色针状, 溶于甲醇.ESI-MS (m/z)274.2 [M+H]+;1H NMR (400 MHz, CDOD3)δ:7.28 (2H, d,J= 8.4Hz, 2′, 6′-H), 6.76 (2H, d,J= 8.5 Hz, 3′, 5′-H), 5.93 (1H, s, 6-H), 5.90 (1H, s, 8-H), 4.83 ((1H, s, 2-H), 4.14 (1H, s, 3-H), 2.85 (1H, dd,J=4.5, 16.8 Hz, 4-H), 2.71 (1H, dd,J= 16.8, 4.5 Hz, 4-H);13C NMR (100 MHz, CDOD3)δ:158.1 (C-4′), 157.9 (C-10), 157.7 (C-7), 157.5 (C-5), 131.7 (C-1′), 129.3 (C-2′,6′), 115.9 (C-3′,5′), 100.2 (C-9), 96.6 (C-6), 96.1 (C-8), 80.0 (C-2), 67.5 (C-3), 29.5 (C-4), 以上数据与文献[10]报道基本一致，因此鉴定该化合物为表阿夫儿茶精.

化合物8棕色固体, 溶于甲醇.ESI-MS (m/z)291.1 [M+H]+;1H NMR (400 MHz, CDOD3)δ:6.92 (1H, s, 2′-H), 6.74 (1H, d,J= 8.4 Hz, 5′-H), 6.70 (1H,d,J= 8.1, 6′-H), 5.89 (1H, s, 8-H), 5.87 (1H, s, 6-H), 4.75 (1H, s, 2-H), 4.11 (1H, s, 3-H), 2.81 (1H, dd,J= 16.8, 4.5 Hz, 4-H), 2.68(1H, dd,J=16.8, 2.1 Hz, 4-H);13C NMR (100 MHz, CDOD3)δ:158.1 (C-5), 157.7 (C-7), 157.4 (C-9), 146.0 (C-3′), 145.8 (C-4′), 132.3 (C-1′), 119.5 (C-6′), 116.0 (C-2′), 115.4 (C-5′), 100.2 (C-10), 96.5 (C-6), 96.0 (C-8), 79.9 (C-2), 67.5 (C-3), 29.3 (C-4), 以上数据与文献[11]报道基本一致，因此鉴定该化合物为表儿茶素.

化合物9棕色胶状物, 溶于甲醇.ESI-MS (m/z)579.1 [M+H]+;1H NMR (400 MHz, CDOD3)δ:7.36 (2H, d,J= 8.4 Hz, 16-H, 16′-H), 6.81 (2H, d,J= 8.4 Hz, 13-H, 13′-H), 6.75 (2H, d,J=7.6 Hz, 15-H, 15′-H), 6.09 (3H, m, 6, 6′, 8-H), 5.05 (1H, s, 2-H), 4.87 (1H, s, 2′-H), 4.67 (1H, s, 4-H), 4.31 (1H, s, 3-H, 5″-H), 3.96 (1H, s, 3′-H), 2.82 (2H, m, 4′-H);13C NMR (100 MHz, CDOD3)δ:158.5 (C-7, 7′), 157.6 (C-5, 5′), 156.2 (C-9, 9′), 155.6 (C-14, 14′), 131.8 (C-11, 11′), 129.2 (C-12, 12′, 16, 16′), 115.9 (C-13, 13′, 15, 15′), 100.6 (C-10, C-10′), 96.7 (C-6, 6′), 96.0 (C-8, C-8′), 79.9 (C-2′), 77.1 (C-2), 72.8 (C-3), 67.2 (C-3′), 36.9 (C-4), 29.4 (C-4′), 以上数据与文献[3]报道基本一致，因此鉴定该化合物为Epicatechin-(4β→8′)-表儿茶素.

化合物10棕色晶体, 溶于甲醇.ESI-MS (m/z) 155.0 [M+H]+;1H NMR (400 MHz, CDOD3)δ:7.32 (1H, s, 2-H), 7.30 (1H, d,J= 8.0 Hz, 6-H), 6.68 (1H, d,J= 8.0 Hz, 5-H);13C NMR (100 MHz, CDOD3)δ:170.5 (C=O), 51.6 (C-4), 146.2 (C-3), 124.0 (C-6), 123.3 (C-1), 117.9 (C-5), 115.9 (C-2), 以上数据与文献[12]报道基本一致，因此鉴定该化合物为原儿茶酸.

3 结语

对神黄豆茎叶体积分数为90%乙醇提取物进行了化学成分研究，分离得到10个单体化合物，根据化合物的理化性质、波谱数据及查阅相关文献，分别将其鉴定为山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷 (1),桑色素-3-O-α-鼠李糖苷 (2), 山奈酚 (3), 5, 7, 3′, 4′-四羟基黄酮 (4), 3-甲氧基槲皮素 (5), 3, 5, 7, 3′, 4′-五羟基黄酮 (6), 表阿夫儿茶精 (7), 表儿茶素 (8),表儿茶素-(4β→8′)-表儿茶素 (9), 原儿茶酸(10).其中，1～6、8和10为首次从该植物中分离得到.