高效液相色谱法测定林可霉素利多卡因凝胶中盐酸利多卡因含量

欧阳晓玫,牟建平,滕宝霞,贺晓文

(甘肃省药品检验研究院，甘肃 兰州 730050)

林可霉素利多卡因凝胶是由盐酸林可霉素、盐酸利多卡因组成的复方制剂，曾用名绿药膏，主要用于外科烧伤及蚊虫叮咬引起的各种皮肤感染，在我国广泛使用. 2002年收载于《化学药品地标升国标第2册》，国外药典无收载，现行质量标准中未对盐酸利多卡因的含量进行控制[1]，因此，该制剂的质量和疗效无法得到有效保证. 本文参照相关文献[2-5],采用高效液相色谱法测定凝胶中盐酸利多卡因的含量，建立的方法操作简单易行，符合《中国药典》2015年版检测要求，排除了样品中凝胶基质和其他杂质干扰，并考察了全国10家生产企业214批次样品中盐酸利多卡因的含量.

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪(日立Chromaster5430型，带DAD检测器)；酸度计(梅特勒，型号：FE28)；电子天平(梅特勒精密电子天平，型号：DU205). 利多卡因对照品(来源：中国食品药品检定研究院，批号：100342-201304，质量分数：99.8%)；甲醇(LiChrosolv，色谱纯)；乙腈(LiChrosolv，色谱纯)；四硼酸钠(国药集团，优级纯)；磷酸(科密欧，分析纯). 林可霉素利多卡因凝胶为国家评价性抽检样品.

1.2 色谱条件

色谱柱：Agilent 5 Tc-C18(2)柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：0.05 mol/L硼砂溶液(用磷酸调节pH值至6.0)-甲醇-乙腈(体积比为68∶19∶13)；流速：1.0 mL/min；检测波长：214 nm；柱温：30 ℃；进样量：20 μL.

1.3 对照品溶液的配制

准确称取利多卡因对照品0.016 0 mg置100 mL容量瓶中，用0.05 mol/L硼砂溶液溶解并稀释至刻度，摇匀备用.

准确称取利多卡因对照品0.024 06 g置100 mL量瓶中，用0.05 mol/L硼砂溶液溶解稀释至刻度，摇匀，作为对照储备液，该溶液质量浓度为240.6 μg/mL. 取20 μL进样，所得色谱图如图1(a)所示.

1.4 供试品溶液的配制

称取样品4 g置于烧杯中，加入少量0.05 mol/L硼砂溶液，用玻璃棒充分搅拌使其分散均匀并溶解后，转移至100 mL容量瓶中，加0.05 mol/L硼砂溶液稀释至刻度，摇匀备用. 该溶液过滤后取20 μL进样测定，所得色谱图如图1(b)所示.

图1 利多卡因液相色谱图Fig. 1 Chromatogram of lidocaine liquid

2 结果与讨论

2.1 流动相的选择

林可霉素利多卡因凝胶是水性凝胶剂，水性凝胶基质大多在水中溶胀成水性凝胶而不溶解. 选用磷酸盐缓冲液溶解样品，结果林可霉素利多卡因凝胶样品分散不均一、溶解较差. 选取0.05 mol/L硼砂溶液溶解样品，结果林可霉素利多卡因凝胶样品中凝胶基质干扰小，样品溶解性较好.

2.2 系统适用性试验

色谱柱的理论板数、分离度、重复性符合“高效液相色谱法”(中国药典2015年版四部通则0512)项下的要求. 理论板数按利多卡因峰计算不低于2 000，待测峰与其它峰的分离度应不小于1.5.

2.3 重复性

分别精密吸取利多卡因对照品溶液20 μL，按上述色谱条件测定，各进样6次，测定峰面积积分值，利多卡因对照品溶液的RSD为0.60%.

2.4 线性关系

分别量取对照储备液适量，用0.05 mol/L硼砂溶液稀释成质量浓度为40.1、80.2、120.3、160.4、200.5、240.6 μg/mL的系列浓度标准溶液，按“1.2”节色谱条件进样测定，以质量浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果如图2所示. 曲线方程：y=62 964x+69 467，r=0.999 4. 结果表明，在40.1 ～240.6 μg/mL之间与峰面积呈良好线性关系.

图2 利多卡因标准曲线Fig. 2 Standard curve of lidocaine

2.5 精密度试验

取质量浓度为160.4 μg/mL的对照溶液，按“1.2”节色谱条件连续进样6次，结果其峰面积的RSD为0.5%，表明本文所建立的方法具有较好的精密度.

2.6 回收率试验

准确吸取1.00 mL样品各3份，分别置于50 mL量瓶中，加入质量浓度为160.4 μg/mL的利多卡因对照储备液0.4、0.5、0.6 mL，用0.05 mol/L硼砂溶液稀释至刻度，摇匀，按“1.2”节色谱条件进样测定，计算回收率，结果如表1所列. 由表1可见，平均回收率为97.6%，表明加样回收率良好.

2.7 盐酸利多卡因含量测定

根据建立的含量测定方法，对我院承担的国家评价性抽检品种林可霉素利多卡因凝胶的214批次样品中盐酸利多卡因含量进行测定，结果214批次样品中盐酸利多卡因含量分布在84.0%～101.5%之间，平均值93.9%(n=214)，结果如图3所示. 制剂中盐酸利多卡因的含量基本呈正态分布，部分批次的含量较低，说明部分生产企业对盐酸利多卡因投料及工艺控制不理想.

图3 214批次样品盐酸利多卡因含量的频数分布图Fig. 3 Frequency distribution of 214 batches of lidocaine hydrochloride

3 结论

本文采用高效液相色谱法测定林可霉素利多卡因凝胶中盐酸利多卡因的含量，建立了盐酸利多卡因的含量测定方法. 通过建立的方法对国家评价性抽检的10家生产企业的214批次林可霉素利多卡因凝胶中盐酸利多卡因的含量进行测定，结果发现部分企业生产的制剂中盐酸利多卡因的含量较低，制剂的质量和疗效未得到有效保证.