莪术油对宫颈癌血管生成相关因子的研究

周俊

【摘要】目的：莪术挥发油对人宫颈癌裸鼠移植瘤的治疗作用。方法：建立人宫颈癌Hela细胞荷瘤裸鼠模型，采用免疫组织化学技术检测HIF-1α、IFN-γ的蛋白表达。结果：莪术油高、中、低剂量组HIF-1α的表达较模型组降低显著，莪术油高、中剂量组IFN-γ的表达较模型组升高。结论： 莪术油可降低HIF-1α，上调IFN-γ的表达，产生抗宫颈癌血管生成的作用。

【关键词】莪术油 ;血管生成HIF-1α IFN-γ

【中图分类号】R197.3【文献标志码】A【文章编号】1005-0019（2019）04-015-01

宫颈癌中的新生血管的形成对肿瘤的生长和转移具有重要意义。肿瘤新生血管的形成是一个连续的过程，肿瘤细胞必须具有血管生成表型后才能启动血管生成，因此诱导血管生成因子过多的产生是血管生成的首要环节[1]。莪术油在抗肿瘤、抗血栓方面成效显著 [2]。 本研究利用天然药物化学的提取技术获得莪术挥发油，通过人宫颈癌裸鼠移植瘤模型治疗实验，初步探讨莪术油有效提取物的动物体内抗宫颈癌的治疗作用。

1材料与方法

1.1实验材料 人宫颈癌Hela细胞株，购自武汉大学保藏中心。Balb/c-nu品系裸鼠，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司， 温莪术药材购于四川双流县温郁金基地，经鉴定为姜科植物温郁金（Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling）的干燥根茎。采取压榨粗油经水蒸汽精制法制备莪术挥发油。HIF-1α兔抗人多克隆抗体，购于北京中杉金桥，IFN-γ兔抗人单克隆抗体，购于博士德生物公司。

1.2实验方法

将Hela单细胞悬液接种于裸鼠皮下。对裸鼠随机分为莪术油高、中、低、模型组、阳性对照组在和阴性对照组 6个实验组。 取肿瘤组织标本，采用PV二步法免疫组化技术检测HIF-1α、IFN-γ的阳性表达均定位于宫颈癌细胞的胞浆，并呈棕黄色颗粒，根据平均透光度进行测评。

1.3数据统计

采用SPSS17.0软件系统对相关数据资料进行分析，计量资料用x±s表示，各组间两两比较采用独立样本T检验，多组间比较采用单因素方差分析，P<0.05时认为有统计学意义。

2结果

2.1HIF-1α的表达结果

莪术油高、中、低剂量组HIF-1α平均透光度的结果与模型组比较显著降低，差异有统计学意义。（见表1）。

2.2IFN-γ的表达结果

莪术油高剂量组IFN-γ平均透光度的结果与模型组比较显著增加;莪术油中剂量组IFN-γ平均透光度的結果与模型组比较明显增加，差异具有统计学意义;莪术油低剂量组IFN-γ平均透光度的结果与模型组比较略有增加，差异无有统计学意义。（见表2）。

3讨论

缺氧诱导因子-1（HIF-1）广泛存在于各种肿瘤组织中，对维持肿瘤细胞的能量代谢、肿瘤血管生成、促进肿瘤细胞增殖和转移起着重要作用。在低氧条件下药物干预后，HeLa 细胞VEGF 的mRNA 和HIF-1α 的mRNA蛋白的表达较常氧状态下明显增加，这与下调宫颈癌HeLa 细胞HIF-1α 的合成与表达有关[3-4]。干扰素-γ（IFN-γ）的表达可使肿瘤血管生成活性受到抑制。采用的不同药物浓度的IFN-γ均能抑制宫颈癌细胞Hela 的生长 [5]。本实验研究中莪术油高、中、低剂量组HIF-1α平均透光度的结果与模型组比较显著降低，差异有统计学意义;莪术油高、中剂量组IFN-γ的表达较模型组显著增加，差异具有统计学意义。提示莪术油能抑制宫颈癌hela的增殖，其机制可能是降低上游HIF-1α和上调IFN-γ的表达，从而影响下游VEGF的表达，从而产生抗宫颈癌血管生成的作用，发挥其治疗作用。调控血管生成的因子众多，就VEGF通路上的其他因子的调控还有待研究。

参考文献

[1]弓唯一，董竟成. 肿瘤细胞中血管内皮生长因子表达调控的研究进展[J].医学综述，2011，17（4）：530-533.

[2]王奇巍，杨国红，林梦感等. 植物来源抑制血管生成的活性成分研究进展[J].中草药，2010，4（5）：3-8.

[3]张俊松，汪宏，吴立胜.CD105、CD133在人肝癌细胞株HepG-2的表达情况及生物学性状的体外研究[J].肝胆外科杂志，2013，21（2）：133-136.

[4]袁志平，牟华平，王秋等.地高辛抑制HIF-1α 下调宫颈癌HeLa 细胞VEGF 表达的研究[J].西南国防医药，2013，23（10）：1052-1054.

[5]张德太， 左曙蓉， 杨文等.siRNA沉默转酮醇酶样基因1下调人宫颈癌细胞HIF一1α表达及糖酵解关键酶活性[J].中国病理生理杂志，2014，30（1）：72-76.