Toll样受体2基因Arg753Gln和CD14启动子-159C/T多态性与肺炎链球菌病易感性的Meta分析

朱满桂 冯艳 李夏西

[摘要]目的 评价Toll样受体2基因Arg753Gln和CD14启动子-159C/T多态性与肺炎链球菌病易感性的相关性。方法 检索PubMed、Cohrance、Embase、CNKI、维普、万方等数据平台，检索文献时间限定为从建库到2017年6月1日。搜寻符合纳入和排除条件的随机对照研究，RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果 纳入TLR2有关论文3篇，样本量总计为951例;纳入CD14相关研究2篇，样本量总计为674例。Meta分析未见TLR2基因Arg753Gln多态性和CD14-159C/T多态性与肺炎链球菌病易感性相关（显性等位基因vs.隐性等位基因：OR=0.76，95%CI=0.40～1.46，P=0.41;显性基因型vs.隐性基因型时，OR=0.70，95%CI=0.34～1.44，P=0.33）。结论 未见TLR2基因Arg753Gln和CD14-159C/T多态性与肺炎链球菌病易感性相关。

[关键词] TLR2 Arg753Gln;CD14-159C/T;多态性;肺炎链球菌病;Meta分析

[中图分类号] R446          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-4721（2019）1（b）-0008-04

[Abstract] Objective To investigate the association between TLR2 Arg753Gln and CD14-159C/T polymorphisms and Streptococcus pneumoniae disease. Methods Pubmed， embase， Cohrance， CNKI， VIP， Wanfang Data were searched to get related clinical controlled trials. The time limit for retrieving studies was until June 1， 2017. Meta-analysis was conducted by Revman 5.3 software. Results Three TLR2 related papers were included， with a total sample size of 951 cases. Two CD14 related studies were included， with a total sample size of 674 cases. Meta-analysis showed no correlation between Arg753Gln polymorphism of TLR2 gene and CD14-159C/T polymorphism and susceptibility to Streptococcus pneumoniae disease （dominant allele vs. recessive alleles： OR=0.76， 95%CI=0.40-1.46， P=0.41; dominant genotype vs. recessive genotype： OR=0.70， 95%CI=0.34-1.44， P=0.33）. Conclusion No significant differences between TLR2 Arg753Gln and CD14-159C/T polymorphisms and Streptococcus pneumoniae disease were found in the meta-analysis.

[Key words] TLR2 Arg753Gln; CD14-159C/T; Polymorphism; Streptococcus pneumoniae disease; Meta-analysis

Toll樣受体（TLR）家族以及CD14是两种重要的模式识别受体，在清除病原体的过程中发挥作用，其基因多态性与感染相关[1]。TLR2本质是细菌脂蛋白的受体，最初被当作介导脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）的细胞信息转导物质[2]。CD14是LPS的受体，但因CD14缺少跨膜区域，不能经过膜传递信息。在天然免疫中，CD14需要TLRs来协同发挥其功能[3]。肺炎链球菌可引起侵袭性或非侵袭性疾病[4]。研究显示每年儿童发生侵袭性肺炎球菌疾病机率为0.63‰[5]。多项TLR2和CD14基因多态性与肺炎链球菌的相关性研究结果并不一致[6-8]，为提供TLR2和CD14基因多态性与肺炎链球菌病易感性关系的证据，现搜集文献进行Meta分析，现报道如下。

1对象与方法

1.1研究对象

使用计算机检索以下电子数据库：PubMed、CNKI、万方、VIP等。检索词：Streptococcus pneumoniae、肺炎球菌、TLR、CD14。搜索的文章不需要限制语言的类型。检索文献时间限定为从建库至2017年6月1日。

1.2文献纳入和排除标准

纳入标准：①公开发布的文献全文;②文献包括独立病例对照试验设计;③对照组的基因型频率均与Hard-Weinberg平衡一致;④文献中包含完整的基因型频率数据。排除标准：①重复出版文献或者仅有摘要的会议论文;②研究不是独立的病例控制;③受试者不是肺炎链球菌肺炎;④个案报道。

1.3质量测评以及数据提取

质量评估由2名评估者根据搜索条件进行。2名评估者根据队列研究评估文件的质量。从每个研究人群中选择NOS偏倚风险评估标准。如果有争议，予咨询通讯作者讨论并确定。阅读全文后以下信息被提取：①一般信息，包括主题，摘要，作者和出版时间;②受试者的基本特征，包括各基因多态性对应的基因型频率。

1.4统计学方法

使用Review Manager 5.3软件进行Meta分析。P>0.1，I2<50%，采用固定效应模型。反之，采用随机效应模型。漏斗图用来评估潜在发表偏倚。

2结果

2.1文献检索结果

对照组全部均为健康人群，纳入论文的对照组符合Hardy-Weinberg定律。最终纳入TLR2与肺炎链球菌病相关的论文为3篇，样本量总计为951例，其中研究组298例，对照组653例。R为显性等位基因，Q为隐性等位基因，RR及RQ表示显性基因型，QQ为隐性基因型（表1）。纳入CD14与肺炎链球菌病相关的论文为2篇，样本量总计为674例，其中研究组199例，对照组475例，C为显性等位基因，T表示隐性等位基因，CC及CT表示显性基因型，TT为隐性基因型（表2）。

2.2 Meta分析结果

显性等位基因vs.隐性等位基因时，Q=24.67，P<0.0001，I2=84%，异质性高，采用随机效应模型得到OR=0.76（95%CI=0.40～1.46），Z=0.82，P=0.41，差异无统计学意义（图1），即未见TLR2 Arg753Gln+CD14-159C/T多态性与肺炎链球菌病易感性相关。

采用相同方法分析显性基因型（RR/RQ+CC/CT）vs.隐性基因型时（QQ+TT），OR=0.70，95% CI=0.34～1.44，P=0.33，差异无统计学意义（图2），未见TLR2 Arg753Gln+CD14-159C/T多态性与肺炎链球菌病易感性相关。

漏斗图评估潜在发表偏倚，结果提示，未发现显著偏倚（图3）。

3讨论

肺炎链球菌可定植于正常人鼻咽部，严重感染时可经血流播散导致脓毒症、腹膜炎、脑膜炎等肺炎链球菌疾病[10]。基于南亚国家的研究表明侵袭性细菌性疾病中约12.8%是由肺炎链球菌引起，且大部分发生于5岁以下的儿童，病死率高[11]。个体对肺炎链球菌的易感性与细菌LPS相关的免疫反应相关[12]。Tomlinson等[13]使用表面脂蛋白缺陷的肺炎球菌突变株验证得出：脂蛋白是TLR介导的肺炎链球菌免疫应答的关键决定因素。CD14及Toll样受体是两种重要的模式识别受体，在介导免疫反应并清除病原体上发挥一定作用[14]。目前研究证实，LPS介导的免疫体系激活过程中，LPS结合蛋白（LPS blinding protein，LBP）以及CD14是最重要环节。CD14是LPS以及LBP的受体，但由于CD14缺少跨膜区以及胞内结构区域，所以无法通过细胞膜进行信息传递。CD14功能需要TLRs来共同介导细胞信号转导[3]。TLR2可识别革兰阳性菌（如肺炎链球菌）的主要致病因素——细胞壁成分肽聚糖PGN与脂磷壁酸LTA[15]，从而激活细胞内信号传导机制，CD14在这过程并未发挥作用，但由于在不借助外力的情况下TLR2识别抗原效率低下，在CD14的協助下效率能增加百倍以上[16]。TLR2和CD14的协同作用不仅存在于革兰阳性菌感染，其多态性与炎症性肠病[17]、口腔肿瘤[18]和哮喘[19]等疾病的易感性亦相关。研究表明肺炎链球菌感染时，TLR2基因敲除小鼠较野生型小鼠更易发生败血症或脑膜炎[20]，提示TLR2和CD14基因态性可能与肺炎链球菌易感性相关。

Moens最早研究TLR多态性与侵袭性肺炎链球菌病相关性，发现TLR2和TLR4基因多态性与侵袭性肺炎链球菌病不相关，但该研究未将TLR信号转导通路上的多态性位点纳入，故研究有其局限性。其后Yuan[7]和Tellería-Orriols[8]的研究更深入，研究对象增加为TLR2，TLR4和CD14的多态性，但仍未发现TLR2、CD14基因多态性与肺炎链球菌病的相关性。本Meta分析纳入3篇文献，最终得到结论：不论是等位基因还是各类基因型的OR值95% CI均经过1，其P值均>0.05，表明TLR2基因Arg753Gln和CD14启动子-159C/T多态性与肺炎链球菌病易感性不相关。

本文不足之处：①纳入对象少，总样本量欠缺。②一种疾病的易感性与多种基因多态性位点相关。即使研究综合了TLR2与CD14的多态性位点，但没有考虑TLR信号转导通路上的其他位点，如TNF-a、IL-6、IL-10等基因多态性位点。③疾病的发生是由于基因和环境的共同作用，研究缺乏基因-基因和基因-环境相互作用的数量。以上缺陷导致本Meta分析的可信度受到一定影响。期待今后更多设计良好的研究得出更切实的结论。

[参考文献]

[1]Zhou J，Zhang X，Liu S，et al.Genetic association of TLR4 Asp299Gly，TLR4 Thr399Ile，and CD14 C-159T polymorphisms with the risk of severe RSV infection：a meta-analysis[J].Influenza Other Resp，2016，10（3）：224-233.

[2]Nilsen NJ，Vladimer GI，Stenvik J.A role for the adaptor proteins TRAM and TRIF in toll-like receptor 2 signaling[J].J Biol Chem，2015，290（6）：3209-3222.

[3]Du B，Luo W，Li R，et al.Lgr4/Gpr48 negatively regulates TLR2/4-associated pattern recognition and innate immunity by targeting CD14 expression[J].J Biol Chem，2013，288（21）：15 131-15 141.

[4]王红，杜娟，董亚琼.成人重症肺炎107例病原学分析[J].贵州医药，2015，39（4）：358-358.

[5]Iroh Tam PY，Thielen BK，Obaro SK，et al.Childhood pneumococcal disease in Africa-A systematic review and meta-analysis of incidence，serotype distribution，and antimicrobial susceptibility[J].Vaccine，2017，35（15）：1817-1827.

[6]Moens L，Verhaegen J，Pierik M，et al.Toll-like receptor 2 and Toll-like receptor 4 polymorphisms in invasive pneumococcal disease[J].Microbes Infect，2007，9（1）：15-20.

[7]Yuan FF，Marks K，Wong M，et al.Clinical relevance of TLR2，TLR4，CD14 and FcgammaRIIA gene polymorphisms in Streptococcus pneumoniae infection[J].Immunol Cell Biol，2008，86（3）：268-270.

[8]Tellería-Orriols JJ，García-Salido A，Varillas D，et al.TLR2-TLR4/CD14 polymorphisms and predisposition to severe invasive infections by Neisseria meningitidis and Streptococcus pneumoniae[J].Med Intensiva，2014，38（6）：356-362.

[9]Atkins D，Best D，Briss PA，et al.Grading quality of evidence and strength of recommendations[J].BMJ，2004，328（7454）：1490-1494.

[10]Corsini B，Aguinagalde L，Ruiz S，et al.Immunization with LytB protein of Streptococcus pneumoniae activates complement-mediated phagocytosis and induces protection against pneumonia and sepsis[J].Vaccine，2016，34（50）：6148-6157.

[11]Jaiswal N，Singh M，Thumburu KK，et al.Burden of invasive pneumococcal disease in children aged 1 month to 12 years living in South Asia：a systematic review[J].PLoS One，2014，9（5）：e96282.

[12]Musie E，Moore CC，Martin EN，et al.Toll-like receptor 4 stimulation before or after Streptococcus pneumoniae induced sepsis improves survival and is dependent on T-cells[J].PLoS One，2014，9（1）：e86015.

[13]Tomlinson G，Chimalapati S，Pollard T，et al.TLR-mediated inflammatory responses to Streptococcus pneumoniae are highly dependent on surface expression of bacterial lipoproteins[J].J Immunol，2014，193（7）：3736-3745.

[14]Du B，Luo W，Li R，et al.Lgr4/Gpr48 negatively regulates TLR2/4-associated pattern recognition and innate immunity by targeting CD14 expression[J].J Biol Chem，2013，288（21）：15 131-15 141.

[15]Guo T，Cai J，Peng Y，et al.Protective effect of an antibody against specific extracellular domain of TLR2 on agonists-driven inflammatory and allergic response[J].Biomed Res Int，2016，（2016）：1-8.

[16]Gao D，Li W.Structures and recognition modes of toll-like receptors[J].Proteins，2017，85（1）：3-9.

[17]王耀輝，高丽丽，刘春样，等.溃疡性结肠炎患者Toll样受体2和转化生长因子-β水平变化及意义[J].中华实用诊断与治疗杂志，2017，31（1）：51-53.

[18]Zeljic K，Supic G，Jovic N，et al.Association of TLR2，TLR3，TLR4 and CD14 genes polymorphisms with oral cancer risk and survival[J].Oral Dis，2014，20（4）：416-424.

[19]Thorburn AN，Tseng HY，Donovan C，et al.TLR2，TLR4 and MyD88 mediate allergic airway disease （AAD） and Streptococcus pneumoniae-Induced suppression of AAD[J].PLoS One，2016，11（6）：e0156402.

[20]H Zhang，L Kang，H Yao，et al.Streptococcus pneumoniae Endopeptidase O （PepO） Elicits a Strong Innate Immune Response in Mice via TLR2 and TLR4 signaling pathways[J].Front Cell Infet Mi，2016，6：23.

（收稿日期：2018-06-08  本文编辑：孟庆卿）