复方青黛胶囊对寻常型银屑病患者外周血Th17细胞因子及JAK3基因表达的影响

马燕 甄莉 白洁△

(1.榆林市第一医院皮肤科，陕西 榆林 719000；2.山西医科大学第一医院 皮肤科，陕西 榆林 719000)

寻常型银屑病为反复、慢性炎症性皮肤病，其发病率与患者的种族、生活环境以及生活习惯有关[1]。机体表皮角化过度伴有角化不全是该病的主要病理特点，患者真皮浅层的毛细血管明显扩张，淋巴细胞以及中性粒细胞等炎症因子清晰可见。寻常型银屑病病程长，影响患者容貌，瘙痒以及关节疼痛影响患者正常生活，严重者甚至丧失工作以及生活能力，全身代谢紊乱，严重影响患者的生活质量[2]。目前，该病是皮肤科疾病研究的重中之重[3]。有报道认为，免疫因素与寻常型银屑病的发病机制有关，但具体病因尚未完全清楚[4]。寻常型银屑病中医辨证为血热证，复方青黛胶囊是本课题研究人员在临床实践中发现的，能够有效治疗该病。因此，本研究对复方青黛胶囊对寻常型银屑病患者外周血Th17细胞因子及JAK3基因表达进行分析，进一步探讨复方青黛胶囊作用机制。报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 经医学伦理委员会批准，患者及其家属均同意参加本研究，并自愿签署知情书，选取2015年9月至2018年2月我院寻常型银屑病患者94例，按照随机数字表法分为两组(实验组、对照组)，每组各47例。实验组男32例，女15例；年龄20～64岁，平均年龄(32.62±8.47)岁；病程1～10年，平均病程(5.62±2.42)年；体质量48～72 kg，平均(65.33±4.24) kg；身体质量指数(Body Mass Index， BMI)为19.00～24.12 kg/m2；平均BMI(21.12±0.36) kg/m2。对照组男34例，女13例；年龄22～63岁，平均年龄(32.43±9.07)岁；病程1～9年，平均病程(4.36±2.12)年；体质量45～72 kg，平均(65.28±4.32) kg；BMI为19.02～24.23 kg/m2；平均BMI(22.54±0.37) kg/m2。两组患者一般资料对比，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2入选标准 (1)纳入标准：年龄>18岁；全部病例均参考《中国临床皮肤病学》[5]中寻常型银屑病诊断标准并经临床确诊；所有患者于入院前1个月未使用过糖皮质类以及免疫抑制剂等影响本次研究结果的药物；依从性较好；对本次研究使用药物无过敏反应。(2)排除标准：合并恶性肿瘤；有自身免疫性疾病患者；有严重的肝肾功能不全及消化道疾病者；过敏体质者。

1.3方法 (1)用药方法：两组患者均给予常规治疗，包括甲氨蝶呤、维A酸类以及糖皮质激素类等药物治疗。①对照组在常规治疗的基础上加用窄谱中波紫外线治疗，即采用UV100L窄谱中波紫外线治疗仪(采购于德国Waldmann公司)对患者进行照射治疗。调整机器参数为311 nm辐射波长峰值，治疗前佩戴防护眼镜，用布套盖住男性患者生殖器官。初次照射剂量为0.3 J/cm2，剂量往后逐次增加0.1 J/cm2。治疗过程中患者出现红斑、瘙痒等不良反应时，停止照射或者减少剂量。使用过程中最大剂量为2.7 J/cm2，每次照射时间依据剂量自动生成。2 d照射一次。②实验组：在对照组治疗的基础上加用复方青黛胶囊(陕西医药控股集团天宁制药有限责任公司，国药准字Z20010157)，口服。一次4粒，一日3次。两组患者均治疗7 W。(2)检测方法：①治疗前、治疗7 W后空腹抽取两组患者的静脉血8 mL于真空采血管中。在4 ℃温度条件下静置1 h，3 000 r/min离心20 min后分离血清。ELISA法(酶联免疫分析法)检测患者外周血细胞因子白介素-17(nterleukin-17，IL-17)、白介素-22(nterleukin-22，IL-22)、白介素-23(nterleukin-23，IL-23)、白介素-1β(nterleukin-1β，IL-1β)水平。步骤如下：用蒸馏水将60 mL浓缩洗涤液稀释至600 mL，标本稀释液1.0 mL将冻干标准品复溶，室温条件下静置15 min后，放于螺旋震荡仪混匀，等比稀释8个浓度以备后用。按照实验用量以酶结合物稀释液稀释浓缩酶结合物，比例为1∶250，震荡摇匀后用于稀释浓缩生物素化抗体，比例1∶250。取出平衡至室温的板条，按照对应顺序将样品加入对应微孔中，加入不同浓度的标准品至相应孔中，每个小孔为100 μL，封紧后室温孵育120 min。丢掉板中液体，洗涤液洗涤5次，每次洗涤后浸泡1 min。加入检测工作液于孔中，空白孔除外，100 μL每孔，室温孵育60 min。洗涤液洗涤5次，加入A、B底物，每孔50 μL，室温避光孵育25 min，加入50 μL终止液至每个孔中，震荡混匀。采用450 nm波长处测量各孔OD值。②采用荧光定量PCR法检测JAK3基因表达量，步骤如下：实验前提取患者RNA，反转录为cRNA，以引物：样本：水+Mix=1∶2∶17的比例配置20 μL PCR体系，7500PCR仪(采购于罗氏诊断)进行测量。

1.4观察指标 (1)两组患者治疗7 W后临床疗效；(2)治疗前、治疗7 W后银屑病皮损程度评分(psoriasis area and severity index，PASI)以及瘙痒评分；(3)治疗前、治疗7 W后外周血Th17细胞因子IL-17、IL-22、IL-23、IL-1β；(4)治疗前、治疗7 W后JAK3基因表达量。

1.5评价标准 参考《中药新药临床研究指导原则(2002年)》[6]对患者疗效标准、PASI评分以及瘙痒评分进行评估。(1)瘙痒程度评分：患者无瘙痒计为0分；轻度瘙痒计为1分；阵发性瘙痒计为2分；剧烈瘙痒计为3分；分数越高，瘙痒越严重。(2)PASI评分：患者4个躯体部位分别以0～6分评分：面积：0=无皮疹；1<10%；2=10%～29%；3=30%～49%；4=50%～69%；5=70%～89%；6=90%～100%；躯干部位：头面=10%；躯干=30%；上肢=20%；下肢=40%。评分越高，代表患者病情越严重。(3)疗效评价标准：皮损完全消退，无痒感为痊愈，皮损明显消退、痒感减轻显著为显效，皮损、痒感有所减轻为有效；皮损较前严重、痒感未减轻为无效。有效率=(痊愈例数+显效例数+有效例数)/总例数×100%。

2 结 果

2.1临床疗效 实验组治愈7例(14.89%)，显效8例(17.02%)，有效26例(55.32%)，无效6例(12.77%)，总有效41例(87.23%)；对照组治愈3例(6.38%)，显效6例(12.77%)，有效15例(31.91%)，无效23例(48.94%)，总有效24例(51.06%)。实验组治疗总有效率较对照组高，差异具有统计学意义(χ2=15.863，P=0.000)。

2.2PASI、瘙痒评分 治疗前，两组患者PASI、瘙痒评分相比，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，实验组患者PASI、瘙痒评分明显低于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组患者治疗前后PASI、瘙痒评分比较分)

注：组内治疗前后比较，*P<0.05。

2.3Th17细胞因子 治疗前，两组患者IL-17、IL-22、IL-23、IL-1β水平相比，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，实验组患者的IL-17、IL-22、IL-23、IL-1β水平明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 治疗前后两组患者Th17细胞因子变化比较

注：组内治疗前后比较，*P<0.05。

2.4JAK3基因表达量 治疗前，两组患者JAK3基因表达量相比，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，实验组患者JAK3基因表达量明显低于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 两组患者治疗前后JAK3基因表达量对比

3 讨 论

寻常性银屑病是T细胞介导的自身免疫性疾病，与多基因遗传密切相关，多种免疫相关物质以及致炎因子等与中性粒细胞以及树突状细胞共同形成银屑病的免疫炎症致病网[7]。患者皮肤组织出现大量的局部炎症，且角质细胞异常增生[8]。由于老年患者机体免疫力低下，免疫功能异常紊乱的概率较大，是银屑病的高发人群[9]。有研究指出，TNF-α为该病免疫损伤的启动因素，刺激巨噬细胞以及KC细胞分泌的炎症因子，参与银屑病的发展过程[10]。随着免疫学研究进展，发现CD4+T细胞亚群是一种与Th1/2细胞不同的新型细胞亚群，分泌的IL-17、IL-22、IL-23、IL-1β等细胞因子，被称为Th17细胞[11]。Th17细胞、Th1细胞以及抑制T细胞共同参与该病的发生与发展，银屑病发病的重要原因为Th1/2细胞比例失衡[12]。在IL-6、IL-22、IL-23、IL-21以及转化生长因子β1等炎症因子共同作用下，CD4+T细胞亚群被诱导分化，Th17细胞增殖并活化，大量的细胞因子被释放，使得角质逐渐形成细胞，内皮细胞增殖，此为银屑病的病理表现[13-14]。整个过程，炎性因子互相作用，形成慢性炎症，损伤机体皮肤。有研究指出，JAK-STAT通路能够调控Th17细胞的生物活性。JAK-STAT细胞内信号转导通路是与细胞因子密切相关，参与细胞的增殖分化[15-16]。

目前，复方青黛胶囊具有清热解毒、消斑化瘀、祛风止痒的效果，适用于血热挟淤、热毒炽盛证的银屑病患者[17]。其成分为马齿苋、土茯苓、白鲜皮、白芷、青黛、紫草、丹参、蒲公英、贯众、粉萆薢、乌梅、五味子(酒)、山楂(焦)、建曲。马齿苋清热利湿、解毒消肿、消炎、止渴、利尿。土茯苓解毒，除湿。白鲜皮、白芷、粉萆薢利湿化浊，有凉血消斑的功效。青黛主要用于温病热盛，斑疹，吐血、咯血，咽痛口疮，小儿惊痫，疮肿，丹毒，蛇虫咬伤等[18]。紫草、丹参活血化瘀，去腐生新。蒲公英、贯众清热解毒。乌梅具有敛肺、涩肠、生津、安蛔之功效，五味子可强身健体，山楂可祛滞、活血化痰，建曲祛寒热[19]。

虽然复方青黛胶囊治疗银屑病的临床报道并不少见，但关于其对银屑病患者免疫学的相关作用机制的研究并不多。本研究结果显示，实验组治疗总有效率、治疗后PASI、瘙痒评分改善程度及IL-17、IL-22、IL-23、IL-1β水平变化情况均显著优于对照组，分析原因主要是因为复方青黛胶囊能够较好地调节Th17细胞及其相关因子，并作用于KC细胞，起到抑制细胞增殖、诱导血管内皮细胞凋亡的作用。此外，实验组患者JAK3基因表达量明显低于对照组，可能是因为复方青黛胶囊能够抑制JAK3基因，细胞受到精细调控，减少炎性因子的转录分泌。

综上所述，复方青黛胶囊对寻常型银屑病，能够显著提高患者临床疗效，降低PASI、瘙痒评分，调节Th17细胞因子水平以及减少JAK3基因表达量，值得在临床推广应用。