自身免疫性肝炎患者血清高尔基体糖蛋白73的变化特征

左凌云 张斌 钱晶晶 郁金红 杨阳 韦成

高尔基体蛋白73(GP73)是位于细胞高尔基体顺面的一种Ⅱ型整合膜蛋白。GP73在正常肝组织中主要表达于胆管上皮细胞，而肝细胞很少表达或不表达[1-2]，但在各种原因引发的肝脏疾病中，几乎所有肝细胞均有表达，特别是结缔组织周边和肝硬化结节部位表达尤其强烈。但目前有关该标志物在自身免疫性肝病，尤其是自身免疫性肝炎的变化特征的研究资料尚缺乏。本研究旨在观察自身免疫性肝炎，尤其是不同程度肝损伤时，该蛋白的变化特征及可能的临床意义。

资料与方法

一、研究对象

收集南京中医药大学附属南京第二医院2012年1月至2018年5月的62例自身免疫性肝炎、70例慢性乙型肝炎临床资料，包括患者年龄、性别、病程、症状、体征、实验室检查、肝穿刺结果等。研究选取的患者均已完善相关检查，排除前列腺癌[3]、肺癌[4]以及Wilson病[5]等其他可能引起血清GP73升高的疾病，同时也排除酒精性肝损伤、代谢性肝损伤、非乙型病毒性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、血吸虫性肝病、胆源性肝损伤、肝脏肿瘤等疾病。AIH确诊由 IAIHG(国际自身免疫性肝炎小组)2008年制定的简化诊断积分系统[6]诊断。慢性乙型肝炎诊断包括HBsAg阳性超过6月，HBV DNA定量>500拷贝/mL，ALT>40 U/L，腹部超声未提示肝硬化、肝占位，血小板、WBC正常。两组均选取ALT<400 U/L，TBil<34 μmol/L的患者，以避免因肝功能不匹配引起的GP73异常。

二、实验方法

(一)血常规分析、凝血功能测定、肝功能 分别采用仪器sysmex XN-1000、sysmex CA-7000、HITACHI 7600-120 series测定，试剂均为配套试剂。

(二)自身免疫性抗体、HBsAg定量、HBV DNA定量、免疫球蛋白定量 分别采用EUROIMMUN欧盟中国自身抗体谱IgG检测试剂盒(间接免疫荧光法)，I-2000免疫仪及配套试剂测定，仪器ABI7500配套HBV核酸扩增荧光定量检测试剂盒测定，免疫球蛋白由HITACHI 7600 series自动分析仪及配套试剂测定。

(三)血清GP73检测 采用Golgi protein 73 (GP73)assay kit (ELISA)(北京热景生物技术股份有限公司)，按照制造商提供的操作说明书进行。

(四)病理检查 62 例自身免疫性肝炎患者均接受肝组织活检和病理学检查，本研究获得本院伦理委员会通过，并经患者知情同意。病理标本经过2位病理专家确诊为自身免疫性肝炎；肝细胞坏死程度根据病理学进行分级。

三、统计学方法

受试者工作曲线分析(ROC)用于明确血清GP73水平对较严重肝损伤的诊断价值。诊断的特异性和敏感性根据最大曲线下面积(AUC)确定。血清 GP73 水平与不同生物化学指标的关系采用相关分析。以P<0.05 为差异具有统计学意义。

结 果

一、患者的基本人口学资料

自身免疫性肝炎患者62例，年龄35～59岁，平均年龄为42岁，男性10人，女性52人。同时收集于本院慢性乙型肝炎对照人群70例，年龄(19～56)岁，平均35岁，男42例，女28例。两组患者乏力、腹胀、阳性体征、病程差异无统计学意义。

二、自身免疫性肝炎患者血清GP73水平的变化特征

为明确自身免疫性肝炎患者血清GP73水平的变化特征，对62例自身免疫性肝炎患者(观察组)和70例健康对照人群(对照组)的血清GP73水平进行对照分析。与 70例慢性乙型肝炎患者[(64.57±21.53)ng/mL]相比，62 例自身免疫性肝炎患者的血清 GP73 水平[(189.6±57.24)ng/mL]显著升高(P<0.001)。

三、血清GP73水平与患者肝功能损伤之间的相关性

为明确自身免疫性肝炎患者血清GP73水平与肝功能损伤间的相关性，本研究选取几个主要的肝功能指标，血清ALT活性、AST活性、TBil以及凝血酶原活动度(PTA)与血清GP73水平间的相关性进行相应的线性回归分析。其中 42例血清ALT>200 U/L的患者，其血清 GP73 水平[(142.8±56.4)ng/mL] 显著高于20 例血清ALT<200 U/L者[(113.6±68.41)ng/mL]，差异具有统计学意义(P=0.004)。PTA<60% 的患者中，有85%(9 /11)的患者血清GP73>142 ng/mL。

四、GP73在诊断自身免疫性肝炎与慢性乙型肝炎组的ROC曲线

针对于ANA、GP73鉴别自身免疫性肝炎以及慢性乙型肝炎，ANA的AUC为0.683，标准误0.55，95%可信区间为(0.575～0.792)，诊断价值较低；GP73的AUC为0.801,标准误0.049，95%可信区间为(0.704～0.897)诊断价值中等。

讨 论

GP73在正常肝组织中几乎不表达，但在各种原因引发的肝脏疾病中，几乎所有肝细胞均有表达，特别是结缔组织周边和肝硬化结节部位表达尤其强烈，而本研究对于慢性乙型肝炎以及自身免疫性肝炎的GP73水平同时进行了分析，均发现高于该指标正常值上限。有研究显示，GP73的表达水平与自身免疫性肝病的治疗进程呈相关性，在自身免疫性肝炎的各个阶段，从纤维间隔形成前的疾病早期至肝硬化早期均可出现界面性肝炎(碎屑样坏死)，肝细胞的免疫损害仍在持续存在，皮质激素的免疫调节仅可使活动性肝硬化得到缓解，位于窦周间隙的肝星状细胞是肝纤维化时细胞外基质的最主要来源细胞[7]。GP73在激活的星状细胞中过度表达，提示这种蛋白参与控制肝脏纤维化的起始和进程。在非病毒调节机制中，IFN-γ和TNF-α这两种多向性的细胞因子对GP73起主要调节作用。最后导致大约100个基因开始转录，从而对病毒感染、细胞生长和凋亡调节起重要作用。GP73为高尔基体中的一个固定糖蛋白，导致HBV复制增加，HBV复制又激发了GP73蛋白的表达。本研究发现，GP73在自身免疫性肝炎的表达水平高于其在慢性乙型肝炎中的表达水平，两者差异有统计学意义(P<0.05)。GP73在慢性乙型肝炎和自身免疫性肝炎所致肝硬化的肝组织中表达差异可能由GP73在这两种肝病中增高途径不同有关，即与自身免疫性肝炎依赖的非病毒途径引起的GP73表达增高要高于HBV病毒途径。陈文莉等[8]研究显示血清GP73升高与肝功能相关，这与本组结论相符。

本研究表明，一定程度上血清 GP73 是诊断自身免疫性肝炎的良好标志物之一。由于6年多时间只积攒了62例病例，这对于多因素、多阶段长期慢性肝病患者来说，只有加大研究病例，尤其是纵向多时间点病例，细分层、多指标联合动态检测，才能进一步说明 GP73 水平在自身免疫性肝炎早期鉴别诊断和预后判断中的意义。