鸡毒支原体活疫苗质量评估

赵丽霞 张新新 刘浩 陈赛娟 高晓磊 吴雅清 朱秀同 赵玉龙

1.瑞普（保定）生物药业有限公司

2.河北农业大学山区研究所

鸡毒支原体病是由鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum，MG）引起的一种以呼吸道感染和气囊炎为主要症状的慢性呼吸道疾病，可以通过水平和垂直两种方式传播，且常继发或并发新城疫、传染性支气管炎、大肠杆菌病等传染病，造成很大的经济损失，目前疫苗免疫是防控该疾病的主要措施。

鸡毒支原体活疫苗可以最大限度地降低支原体引起的产蛋损失，并取代多种日龄蛋鸡同场饲养的鸡场中的支原体野毒株，不仅能有效地预防产蛋损失，而且能防止野毒株在鸡群中的定植，因此，鸡毒支原体活疫苗免疫接种在禽业生产中占有重要的地位。本文就市场在售的4种鸡毒支原体活疫苗进行实验对比，通过CCU测定和动物实验，对疫苗质量进行初步评估，为市场应用提供数据支持。

一、材料

1.疫苗：购自国内不同厂家的鸡毒支原体活疫苗（F36株）3家，进口疫苗1家，分别标记疫苗A、B、C、D。

2.培养基：CM2培养基，配制方法参照中国兽药典2015版。

3.SPF鸡：购自斯派福瑞SPF鸡。

4.SPF鸡饲养隔离器：瑞普公司实验动物中心。

二、方法

1.活菌滴度测定。按照疫苗说明书对疫苗进行复溶，每100羽份疫苗加3.0 mL CM2培养基稀释后，用于活菌滴度测定。

（1）CCU测定：取10支内装1.8 ml CM2培养基的圆底试管，在第1管中加入0.2 ml稀释好的疫苗，充分震荡混匀后从第1管中吸出0.2 ml加入第2管，做10倍系列稀释，直至第12管；另取1管装有2.0 ml的CM2培养基做为阴性对照。放置生化培养箱37℃静置培养。每日观察培养基颜色变化情况，10 d后进行结果判定，培养基颜色由红色变为橙黄色（pH值下降≥0.5）的最后一稀释管作为CCU测定的结果。每种疫苗做3个平行，取最低的CCU值为最终测定结果。

（2）CCU50测定：方法类CCU测定，取稀释好的疫苗0.2 ml至装有1.8 ml CM2培养基的圆底试管中做10倍系列稀释至10-11，再分别从10-7、10-8、10-9、10-10、10-11管中各取 0.2 ml加入至装有 1.8 mlCM2培养基的小管中，每个稀释度设6个重复，放置生化培养箱37℃静置培养。每日观察培养基颜色变化情况，10 d后进行结果判定，统计每个稀释度培养基颜色变化（pH值下降≥0.5）的小管数，按照Reed Muench法计算半数变化单位（CCU50）。

2.动物实验。

（1）安全检验：每种疫苗按10羽份/只，免疫7日龄SPF鸡，10只/组，观察14 d。免疫前与免疫后14 d剖检前逐只称重，记录体重及剖检时气囊症状。每种疫苗免疫组鸡单独放置一台隔离器内饲养。

（2）效力检验：每种疫苗按1羽份/只，免疫7日龄SPF鸡，8只/组，同时设立阴性对照组（6只SPF鸡免疫灭菌生理盐水），免疫5周后进行MG R株强毒的气溶胶攻毒；攻毒后14 d剖检，观察气囊病变，并进行病变记分，记分标准参照中国兽药典2015版。每种疫苗免疫组鸡单独放置一台隔离器内饲养。

三、结果

1.活菌计数结果。

进口疫苗D的活菌计数结果最高，比国产苗高约2个滴度。详细结果见表1。

2.动物实验结果。

（1）安全检验：各组疫苗免疫鸡只均无明显临床症状，剖检时气囊均无病理损伤。10倍剂量免疫后，其中疫苗C组的鸡只日增重量最大，对鸡生长影响最小。增重实验结果见表2。

（2）效力检验：攻毒后从第8天起，阴性对照组鸡只开始出现啰音，疫苗免疫组均无啰音症状出现；两周后剖检，记录气囊发病情况，对照组有5只鸡的气囊出现2分以上的病变，实验成立。计算每组的平均气囊保护率，其中进口疫苗D的攻毒保护率为62.5%，在4组中最低。详细结果见表3。

表1 各组疫苗活菌计数结果

表2 各组疫苗对免疫鸡增重影响实验结果

表3 各组疫苗攻毒保护试验结果

四、讨论

通过CCU及CCU50的测定，3种国产鸡毒支原体活疫苗（F36株）均低于进口疫苗，但动物实验数据表明，在抵抗强毒攻击方面进口疫苗明显逊于国产苗。鸡毒支原体活疫苗（F36株）能有效的抵抗强毒的攻击，但不同厂家的疫苗对鸡只的增重影响有差异，综合评价，疫苗C的质量最优。

5-30日龄是雏鸡最容易感染鸡毒支原体的日龄，鸡毒支原体感染对雏鸡造成的危害比成鸡严重得多，早期免疫接种非常重要，鸡毒支原体引起的气囊病变大多是不可逆的，早期感染给后期康复带来长期的不利影响。用鸡毒支原体F株接种的鸡可有效预防野毒的感染，弱毒F株能逐步取代鸡场中的野毒，从而达到清除野毒支原体的目的。因此，为了预防鸡毒支原体的早期感染，对小日龄雏鸡接种鸡毒支原体F株活疫苗非常必要。