8种常见鲜中草药MIC测定

为了研究新鲜中草药对细菌的抑制作用，选取了常见的8种鲜中草药获取药汁并且运用煮沸和低温超速离心进行处理对其MIC测定。MIC测定结果显示新鲜酢浆草对大肠杆菌和葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为2.5 g/ml、1.25 g/ml。

一、材料与方法

1.主要药品。苦卖菜、酢浆草、车前草、金银花、蒲公英、板蓝根、鱼腥草、苍耳子。

2.主要仪器。BCD-555WKM华凌电冰箱、GNP-9 160型隔水式恒温培养箱、GZX-9 140 MBE数显鼓风干燥箱、LDZX-50KBS立式压力蒸汽灭菌器、SWCJ-2F洁净工作台。

3.试验菌株。大肠杆菌和葡萄球菌。

4.试验方法。（1）鲜中草药原液的提取与处理。将选取的鲜中草药（苦卖菜500 g、车前草400 g、金银花300 g、板蓝根300 g、苍耳子400 g、酢浆草500 g、鱼腥草500 g、蒲公英400 g），洗净剪碎，碾碎或打成浆状，用消毒纱布过滤，滤除药渣等杂质，获得药汁原液，4℃保存备用（短期内使用）；

药汁酸碱度的测定：运用 0.5～ 5.0和 5.0～ 7.0的pH精密试纸，测定鲜中草药汁pH；

药汁的处理：①加热消毒法：将药汁加热70℃～80℃，保持3 min，自然冷却，4℃保存备用；②低温高速离心法：将药汁原液4℃，12 000 r/min，离心10 min，4℃保存备用；

（2）干品中药提取物的制备。每种中药均采用水煎法制备水提物。苦卖菜、车前草、金银花、板蓝根、苍耳子、酢浆草、鱼腥草、蒲公英各称取50 g，分别置于500 ml烧杯中，加蒸馏水300 ml浸泡30 min，加热至沸腾，然后改用文火继续煎煮，30 min后趁热过滤(4层纱布)，收集滤液。药渣中再加蒸馏水200 ml，同法煎煮、过滤。将两次滤液相混，水浴浓缩后凉至室温，用100 ml容量瓶定容后进行高压灭菌，制得各浓度为0.5 g/ml的水煎液，4℃保存，备用，并测定其pH值；

（3）鲜中草药原液的稀释。制备的干品水煎液的浓度为0.5 g/mL，根据每种鲜中草的折干率（酢浆草、金银花和蒲公英的折干率约为5∶1，鱼腥草和车前草的折干率约为4∶1，苦荬菜和板蓝根的折干率约为3∶1，苍耳子的折干率约为2∶1）将鲜中草药物原液用灭菌蒸馏水进行稀释，使终浓度与干品水煎液浓度一致，4℃备用；

（4）试验菌液的制备。将大肠杆菌和葡萄球菌的纯培养物接种于含5.0 ml的血清肉汤培养基的试管中，37℃培养24 h，用灭菌生理盐水稀释至其浊度0.5麦氏单位，此时肉汤中细菌数约1.5×l08CFU/ml。并且将两种细菌接种于pH为1.7和4.5的普通营养肉汤中，培养24 h；

（5）MIC值的测定。取培养24 h的目标菌，接种营养肉汤液体培养基中，再培养24 h。借助比浊管将菌悬液浓度调整为0.5麦氏比浊标准。按照表1进行MIC值的测定。

二、试验结果

1.中药药液pH值。见表2。

2.鲜中草药MIC结果。酢浆草MIC值运用常量肉汤二倍稀释法得出试验结果：酢浆草对大肠杆菌的最小抑菌浓度为2.5 g/ml；对葡萄球菌的最小抑菌浓度为1.25 g/ml。如图 1 所示：

三、分析与讨论

酢浆草，分为红花、黄花和白花3个品种。其别名：酸味草、鸠酸和酸醋酱等，为多年生草本植物，丛生，春夏秋不间断开花，以春秋凉爽时间开花最盛。主要功效：全草入药，能解热利尿，消肿散瘀；茎叶含草酸，用以磨镜或擦铜器，使其具有光泽。但牛羊食其过多可中毒致死。酢浆草药汁pH为1.7，本课题中大肠杆菌可在pH1.7的普通营养肉汤中生长，这说明新鲜酢浆草药汁对大肠杆菌的抑制作用并非酸度过高导致，而且陈卓逐等研究发现，具有耐强酸能力的大肠杆菌在酸性胁迫条件下更易生存；葡萄球菌不能在pH1.7的普通营养肉汤中生长，但能够在pH4.5的普通营养肉汤中生长。谭萍等对酢浆草的成分进行了提取测定，发现黄酮的提取率是最高的，达到22.58 mg/g。而在众多对黄酮类化合物的研究中发现，黄酮是一类具有消炎、抗菌作用和抗癌抗肿瘤的天然多酚类化合物，因此，酢浆草具有很强的生理活性，说明了酢浆草对葡萄球菌的抑制并非酸度过高导致而是由这类化合物引起的。

表1 鲜中草药MIC值测定方法

表2 鲜品和干品中草药药液的pH值

图1 鲜酢浆草对大肠杆菌(左)和葡萄球菌(右)的MIC测定结果

四、结论

新鲜酢浆草的MIC值：新鲜酢浆草药物原液对葡萄球菌的最小抑菌浓度为1.25 g/ml，对大肠杆菌的最小抑菌浓度为 2.50 g/ml。