妊娠期糖尿病孕妇血清miR-126、VEGF表达及其与胰岛素抵抗的关系

邹兰灵

重庆市资阳市第一人民医院(641300)

妊娠期糖尿病(GDM)是糖代谢异常导致的病症[1]，以胰岛素抵抗(IR)与胰岛β细胞功能异常为主要病理机制[2]。血管内皮生长因子(VEGF)可对胎盘血管构成与功能调节发挥重要功能[3]。研究指出部分微小核糖核酸(miRNAs)与胰岛素生成及分泌有关[4]。相关研究表明微小核糖核酸-126(miR-126)在糖尿病发生发展中发挥重要功能，并对其并发症发生有影响[5]。目前GDM孕妇中miR-126、VEGF水平相关研究较少，本研究探讨GDM孕妇血清miR-126、VEGF水平及与胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)关系，为提高临床治疗效果提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入标准：①单胎；②孕前无糖尿病史；③有巨大儿、胎位异常、胎盘功能不良等指征者；④无血液系统性疾病；⑤所有孕妇知情且签署同意书。排除标准：①孕前患有心脏病及高血压等疾病；②患有宫内感染或感染性疾病等；③严重肝肾功能损伤；④患有恶性肿瘤者；⑤临床资料不完整者。收集2017年2月—2018年1月在本院剖宫产的GDM孕妇76例(GDM组)，GDM符合相关诊断标准[6]。随机选取同期剖宫产且糖耐量正常孕妇68例作为对照组，观察对象亦签署知情同意书。

1.2 检测方法

1.2.1 样本采集 两组孕妇于剖宫产术前24 h内抽取空腹静脉血，离心取血清-80℃保存待测。

1.2.2 血清miR-126表达量 qRT-PCR检测。按照Trizol试剂盒(美国Invitrogen公司)说明书提取总RNA，按照反转录试剂盒(天根生化科技有限公司)说明书将RNA反转录为c DNA，最后按照SYBR Gren RCR master mix试剂(天根生化科技有限公司)说明配反应体系并加样，qRT-PCR反应体系为20μl：SYBR Premix Ex TaqⅡ(2×)10μl，c DNA 4.0μl，上下游引物各1.0μl，dd H2O 4.0μl。程序设定为：92℃1 min，95℃30 s，56℃30 s，72℃30 s，共42个循环。其中miR-126以U6为内参基因，miR-126上游引物序列为5’-GGGGTCGTACCGTGAGT-3’，下游引物序列为5’-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3’；U6上游引物序列为5’-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3’，下游引物序列为5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’，引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司设计合成。反应结束后收集数据，对所得数据循环阈值(Ct值)进行分析，采用2-ΔΔCt相对定量法计算miR-126的相对表达量

1.2.3 血 清VEGF水平 采用酶联免疫吸附(ELISA)法并严格按照试剂盒(美国R&D公司)说明书检测血清VEGF水平。

1.3 观察指标

测量两组孕妇身高、体质量并计算体质指数(BMI)，禁食10 h后分别取空腹静脉血清，采用葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖(FBG)水平，放射免疫法检测空腹胰岛素(FINS)水平，稳态模型胰岛抵抗指数(HOMA-IR)评价胰岛素抵抗程度，HOMA-IR＝(FINS×FPG)/22.5。按照检测试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)说明书操作并采用全自动生化分析仪检测糖化血红蛋白(Hb Alc)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)及低密度脂蛋白(LDL-C)水平。

1.4 统计学方法

采用SPSS21.0数据分析，计量资料符合正态分布的数据均以(±s)表示，组间用t检验；Pearson法对GDM孕妇血清miR-126、VEGF与HOMA-IR进行相关性分析；采用logistic法对GDM孕妇胰岛素抵抗的相关因素进行分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组孕妇一般资料比较

两组孕妇年龄、孕周及TC比较无差异(P＞0.05)；GDM组孕妇BMI、Hb Alc、FINS、FPG、TG、LDL-C水平均高于对照组，HDL-C水平低于对照组(均P＜0.05)。见表1。

表1 两组一般资料比较(±s)

表1 两组一般资料比较(±s)

项 目 对照组(n＝68) GDM组(n＝76) t P年 龄(岁) 27.3±1.7 27.2±1.3 0.160 0.873孕 周 38.3±1.2 38.8±2.2 1.639 0.103 BMI(kg/m2) 27.3±1.4 27.9±1.7 2.215 0.028 Hb Alc(%) 5.74±1.56 7.13±2.14 4.409 0.000 FINS(m U/L) 7.84±3.15 12.28±4.02 7.316 0.000 FPG(mmol/L) 3.74±1.05 5.54±2.31 5.902 0.000 TC(mmol/L) 4.25±2.18 4.71±1.85 1.369 0.173 TG(mmol/L) 1.03±0.41 2.12±0.68 11.480 0.000 LDL-C(mmol/L) 2.37±1.52 3.02±1.55 2.535 0.012 HDL-C(mmol/L) 1.45±0.12 1.23±0.15 9.644 0.000

2.2 两组孕妇血清指标及HOMA-IR比较

GDM组孕妇血清miR-126水平低于对照组，血清VEGF、HOMA-IR水平均高于对照组(均P＜0.05)，详见表2。

表2 两组血清指标及HOMA-IR比较(±s)

表2 两组血清指标及HOMA-IR比较(±s)

组别 例数 miR-126 VEGF(ng/L) HOMA-IR对 照 组 68 1.07±0.26 12.38±6.39 1.84±0.31 GDM组 76 0.57±0.16 23.57±9.22 3.28±1.53 t 14.055 8.369 7.620 P 0.000 0.000 0.000

2.3 GDM组孕妇血清指标与HOMA-IR相关性

Pearson法分析显示，miR-126与VEGF、HOMA-IR均呈负相关，而VEGF与HOMA-IR呈正相关(均P＜0.05)，见图1、图2、图3。

图1 血清miR-126与VEGF相关性

图2 血清miR-126与HOMA-IR相关性

图3 血清VEGF与HOMA-IR相关性

2.4 GDM组孕妇发生IR的相关因素分析

将影响GDM孕妇发生IR的相关因素进行logistic分析，结果显示FINS、FPG、miR-126、VEGF与HOMA-IR均为影响GDM孕妇发生IR的危险因素，见表3。将有意义的单因素进行多因素分析显示，FINS、HOMA-IR、血清miR-126与VEGF水平均为影响GDM孕妇发生IR的独立危险因素，见表4。

表3 影响GDM孕妇胰岛素抵抗的logistic单因素分析

表4 影响GDM孕妇胰岛素抵抗的logistic多因素分析

3 讨论

GDM孕妇以糖代谢异常为主要特征[7]，血糖含量增加可促使游离脂肪酸与三酰甘油浓度升高并抑制胰岛素分泌[8]。GDM发病机制比较复杂，目前主要从胰岛素抵抗及其分泌功能下降两方面展开研究，原因在于妊娠过程中性激素的分泌增加可降低胰岛素敏感性进而产生胰岛素抵抗[9]。miRNAs是一类具有调控功能的内源性非编码RNA分子，与糖尿病患者胰岛素抵抗有关[10]。miR-126可通过负向调控VEGF表达参与糖尿病视网膜病变过程[11]。因此，本研究主要探讨miR-126、VEGF与GDM孕妇胰岛素抵抗的关系。

miR-126具有较高的保守性，可特异性参与呼吸系统与生殖系统等生理病理过程[12]。研究发现[13]，Ⅰ型糖尿病患者血浆中miR-126表达水平与LDL-C呈正相关，miR-126可引发脂质代谢异常。另有研究表明[14]，miR-126可调控靶基因(胰岛素受体底物)表达进而引发胰岛素抵抗，从而导致GDM发生。本研究显示，GDM组孕妇血清miR-126、HDL-C表达低于对照组，血清Hb Alc、FINS、FPG、TG、LDL-C水平均高于对照组，与文献报道相似[15]。上述研究推测，GDM孕妇脂质代谢异常导致胰岛素受体降低进而产生胰岛素抵抗。进一步分析，GDM孕妇血清miR-126表达水平与HOMA-IR呈负相关，说明GDM孕妇表现出明显的胰岛素抵抗，提示血清miR-126水平降低可影响GDM体内脂质代谢过程进而促使GDM孕妇产生IR。

VEGF通过特异性刺激血管内皮细胞生长进而形成新生血管，同时在妊娠期间胎盘血管形成中发挥中心调控功能[16]。妊娠期孕妇胰岛素受体相关信号通路与炎症因子的信号转导途径紧密相关，炎症因子可促使胰岛素受体底物磷酸化并阻止胰岛素信号转导途径最终导致孕妇产生IR[17]。有研究表明VEGF与炎症因子密切相关并可影响患者炎症反应过程[18]。本研究GDM组孕妇血清VEGF水平高于对照组，且与HOMA-IR呈正相关，提示GDM孕妇血清VEGF水平与炎症因子相互作用并可影响胰岛素受体相关信号通路进而促使IR的产生。研究表明miR-126可通过负向调控VEGF表达对血管内皮细胞发挥调节功能[19]。与此相似，本研究结果显示miR-126与VEGF呈负相关，说明miR-126可通过调控VEGF表达并参与GDM孕妇IR发生过程。本研究多因素分析结果显示，FINS、HOMA-IR、血清miR-126与VEGF水平均为影响GDM孕妇发生IR的独立危险因素，提示血清miR-126与VEGF水平均对GDM孕妇发生IR有重要预测价值，可能通过参与脂类代谢或炎症反应进而参与GDM孕妇IR生成过程。

综上所述，血清miR-126与VEGF水平变化与GDM发生及进展有关，且均可能为GDM孕妇发生IR的机制，临床检测GDM孕妇血清miR-126与VEGF水平有助于监测病情进展及IR的发生。本研究存在不足之处，miR-126与VEGF参与GDM孕妇IR发生的具体作用机制还有待深入研究。