海南虎奶菇抗氧化活性的研究

陈喜蓉，柯智，林芳能，钟剑锋，吴彪，阳记萍

（海南省林业科学研究院，海南海口 571100）

虎奶菇(Pleurotus tuber-regium)属担子菌纲，伞菌目，侧耳科，侧耳属，别名核耳菇、菌核侧耳、南洋茯苓等[1]，子实体及菌核富含蛋白质、矿质元素、多种维生素等，是一种珍稀食药用菌[2]。主要分布于热带和亚热带地区，最早发现于非洲[3]，中国主产区位于江西省抚州、云南省腾冲和章风县一带[4～5]。虎奶菇的子实体和菌核均可食用，其所含的多糖、多酚、麦角硫因、多酮类化合物、维生素等成分与抗氧化活性有关[6]。这些活性成分有利于抗氧化、抗癌、抗肿瘤、降血脂血糖等[7]。而IC50是指半抑制率，与抗氧化活性成反比；IC50值越小，反应速率越大，表明其抗氧化活性越好。

虎奶菇富含蛋白质、氨基酸和矿物质等，食用药用价值高，市场需求量较大，但其生长周期较长，野生资源有限，难以满足人们的需求。近些年来越来越多的地区通过人工栽培来解决食用菌资源紧缺的问题，但目前国内未见虎奶菇大规模人工栽培生产。笔者团队前期已经进行了虎奶菇适宜品种及最适菌种培养基筛选的初步探索工作，该研究再从不同栽培地点对其抗氧化活性的影响方面进行对比分析，为虎奶菇在海南的栽培技术研究及其产品深入开发奠定理论基础。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料

虎奶菇由海南省林业科学研究院提供；DPPH；无水乙醇。虎奶菇分别栽培于海南省三亚市（三亚虎奶菇）、海南省琼中黎族自治县（琼中虎奶菇）和海南省林业科学研究院定安龙州基地（定安虎奶菇和定安虎奶菌核），三个供试地基本概况见表1：

表1 供试地基本概况Tab.1 Basic profile of the sample location

DPPH 自由基母液的配制：用FA1604 电子分析天平精密称取0.0400gDPPH，用95%的乙醇溶液溶解并用500ml 棕色容量瓶定容，所得溶液为浓度为2×10-4mol·L-1的DPPH 自由基溶液，置于冰箱中冷藏备用。

实验仪器有可见分光光度计、FA1604 电子分析天平、RE-52AA 旋转蒸发器、SB2200 超声波清洗器、电热恒温鼓风干燥箱、SHB-IIIA 真空泵和HH2 数显恒温水浴锅。

1.2 虎奶菇的抗氧化活性测定

1.2.1 提取方法

分别称取四种不同虎奶菇样品10g，按料液比1：10 加入95%乙醇，混匀后置于超声波处理器中，在45kHz 条件下超声震荡30min。真空抽滤后，滤渣用乙醇再次震荡提取一次，两次滤液合并加入旋转蒸发器中蒸发浓缩到100ml 的浸提液，即得浓度为0.10g/ml 的样品溶液放于冰箱中保存备用。

1.2.2 抗氧化活性的测定

按表2 加样，总体积4mL，黑暗下反应30min。用光径1cm 的比色皿装溶液放置于紫外可见分光光度计中，调节波长在518nm 处，并以95%乙醇为空白参比，测定各吸光度值，各重复测定两次，取其平均值。不同浓度的海南栽培虎奶菇提取物溶液对DPPH 自由基的清除率按式（1）计算[8]：

表2 DPPH·自由基测定体系加样测定Tab.2 Sampling determination of DPPH free radical determination system

1.2.2 IC50值的测定

通过软件拟合计算得出三亚虎奶菇、定安虎奶菇、定安虎奶菌核、琼中虎奶菇四种样品的IC50值。

2 结果与分析

2.1 DPPH 自由基的清除能力

由图1 可知，样品浓度越高，对DPPH 自由基的清除能力越强。当加入样品浓度为0.005g/mL 时，四种样品对DPPH 自由基的清除能力由大到小依次为：琼中虎奶菇＞三亚虎奶菇＞定安虎奶菇＞定安虎奶菌核；当样品浓度为0.025g/mL 时，清除能力由大到小依次为：三亚虎奶菇＞琼中虎奶菇＞定安虎奶菇＞定安虎奶菌核；而当样品浓度为0.05g/mL 时，三亚虎奶菇、定安虎奶菇和琼中虎奶菇的清除能力都显著大于定安虎奶菌核。综上所述，在三种不同样品浓度下，虎奶菇子实体对DPPH 自由基的清除能力均比菌核强。

图1 不同样品浓度的清除率Fig.1 Clearance rate of different sample concentration

2.2 IC50 值

由表3 可知，在三亚虎奶菇、琼中虎奶菇、定安虎奶菇、定安虎奶菌核四种样品中，IC50值由小到大依次为：三亚虎奶菇＜琼中虎奶菇＜定安虎奶菇＜定 安 虎 奶 菌 核，IC50值 分 别 为 0.0131g/mL、0.0145g/mL、0.0227g/mL 和0.3833g/mL。三个地区虎奶菇子实体的IC50值均比定安虎奶菌核低，其中三亚虎奶菇IC50值最低，为定安虎奶菌核的3.42%；而琼中虎奶菇和定安虎奶菇的IC50值分别为定安虎奶菌核的3.78%和5.92%。

表3 四种样品的IC50 值Tab.3 The IC50 value of four samples

3 讨论

DPPH 自由基是一种稳定的以氮为中心的有机合成的自由基，若能被某受试物清除，则意味着该受试物具有清除自由基的能力，因此常作为基质评价某物质的抗氧化能力。清除率越大，其抗氧化能力越强[9]。该实验结果表明，在三种不同样品浓度下，虎奶菇子实体对DPPH 自由基的清除率均比菌核大，说明虎奶菇子实体的抗氧化能力比菌核强。IC50是指半抑制率，与抗氧化活性成反比；IC50值越小，反应速率越大，表明其抗氧化活性越好。该实验结果表明，四种样品中，三亚虎奶菇的IC50值最小，说明其抗氧化活性最强，可能是因为三亚的年均日照时长较长，且年平均气温相对较高（见表1），有利于虎奶菇多糖、多酚等生物活性物质的合成，从而使其抗氧化活性提高；而三个样品的虎奶菇子实体的IC50值均比定安虎奶菌核小，说明三个样品的虎奶菇子实体的抗氧化活性均比虎奶菌核强。

据报道，抗氧化活性与食用菌所含的生物活性物质如多糖、多酚、麦角硫因、多酮类化合物、维生素等成分有关[6]。研究发现，这些成分有利于抗癌、抗肿瘤、降血脂血糖等。目前对虎奶菇化学成分的研究尚未形成系统，未明确虎奶菇的蛋白质和多糖含量以及其他可能有效成分，还需要继续深入研究。另外需加强虎奶菇菌核和子实体的食药用价值的研究，比较分析其优缺点、最佳采收期等。虎奶菇菌核富含天然的膳食纤维，且其成分具有优良特性，符合人类对绿色健康食品的需求。另外，其属于温性且营养丰富的食用菌，可作为多用途的低热量食物的配料[10]。可以针对其特性进行深加工，研发绿色新型保健食用产品。