麝香保心丸对代谢综合征大鼠血管重构的影响

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1.深圳市龙岗区人民医院，广东 深圳 518172；2.汕头大学医学院第一附属医院分子生物学实验室，广东 汕头 515041

代谢综合征[1](Metabolic Syndrome，MS)包括高血压、高脂血症和血糖代谢异常等心血管危险因素，可导致血管内皮功能障碍和动脉粥样硬化等心血管疾病的发生发展，并导致血管重构，是目前冠心病、脑梗塞等常见心脑血管疾病发病率升高的主要因素之一。因此，防治MS导致的血管重构除了控制相应的危险因素，还需要具有血管保护或抗动脉粥样硬化的药物。麝香保心丸具有舒张血管、抑制炎症反应、抗动脉粥样硬化及抑制血管钙化等作用[2-3]，在临床上治疗心绞痛、心肌梗死等发挥了很大的作用，能否改善MS导致的血管重构尚不清楚。为此，本实验在MS大鼠模型上，用麝香保心丸干预，观察血管重构的变化，并观察血清MCP-1及主动脉相应受体表达的变化，初步探讨相关可能的机制。

1 材料

1.1 动物 无特定病原体级(SPF)雄性SD大鼠由汕头大学医学院实验动物中心提供，8周龄。

1.2 材料 高果糖饲料(60%，北京华阜康生物科技有限公司)；MCP-1试剂盒(北京华英生物研究所)；MCP-1受体一抗、二抗及DAB显色试剂盒(武汉博士德)；其余为进口或国产分析纯试剂。麝香保心丸(批号：12050401，上海和黄药业有限公司)。

1.3 仪器 BP-2010A鼠尾动脉测压仪(北京软隆生物)；Beckman Coulter AU5800生化仪；血糖试纸及快速血糖仪购自美国雅培。

2 方法

2.1 MS动物模型制备 参照参考文献[4]制备大鼠MS模型，取雄性SD大鼠8只作为正常对照组，普通饲料喂养；取16只雄性SD大鼠作为MS组，高果糖饲料喂养8周后，检测血糖、血脂和尾动脉压水平，以确定MS模型建立成功(高血糖、高血脂及高血压状态)。将造模成功的MS大鼠随机分成MS组(8)和MS+麝香保心丸组(8)，继续高果糖饲料喂养，MS+麝香保心丸组予麝香保心丸25 mg/kg灌胃1次。饲养4周后称重后，3%水合氯醛麻醉，心脏取血，血液置入含有促凝剂的5 mL塑料试管中，充分混匀，4度离心分离血清，-80℃保存。摘取胸主动脉，用冰生理盐水冲洗后，4%多聚甲醛固定，石蜡包埋。

2.2 血糖、甘油三酯和血压的测定 禁食8 h后尾动脉取血，采用快速血糖仪检测血糖，并分离血清，采用Beckman Coulter AU5800生化仪检测血清甘油三酯水平；采用鼠尾动脉测压仪测量血压。

2.3 血清MCP-1含量的测定 将血清送至北京华英生物研究所，采用放射免疫法测定血清MCP-1含量，具体步骤按试剂盒说明书操作。

2.4 免疫组织化学法检测主动脉组织MCP-1受体的表达 采用4%多聚甲醛固定胸主动脉，石蜡包埋，制作4 μm厚切片，常规脱腊入水，抗原修复，封闭非特异性抗原，滴加一抗过夜，滴加二抗，DAB显色，苏木素复染，盐酸酒精分化、脱水、透明、中性树胶封片，具体步骤按说明书进行。

3 结果

3.1 大鼠MS模型特征 经高果糖饲料喂养8周后，大鼠血清血糖、甘油三酯和尾动脉压水平明显高于正常对照组(P<0.01)，提示MS模型建立成功。见表1。

组别n血糖/mmol/L甘油三酯/mmol/L平均动脉压/mmHg正常对照组80.80±0.452.88±00.64100.98±6.35MS组161.92±0.68a7.67±0.68a135.35±7.55Ia

注：与正常对照组比较，aP<0.01。

3.2 Masson染色 采用Masson染色观察大鼠主动脉组织，与正常组比较，MS大鼠发现血管全层均有明显胶原沉积，血管细胞和弹力纤维排列紊乱，管壁增厚，用麝香保心丸干预后胶原沉积有所改善。见图1。

3.3 大鼠血清MCP-1含量的变化 MS组血清MCP-1含量明显增加(P<0.01)，采用麝香保心丸干预后，血清MCP-1含量有所下降(P<0.01)。详见表2。

3.4 大鼠胸主动脉组织MCP-1受体表达的变化 与正常组相比，MS组主动脉组织MCP-1受体表达明显上调，用麝香保心丸干预后，主动脉组织MCP-1受体表达有所下调。见图2。

组别n血清MCP-1含量/μmol/L正常对照组866.55±4.35MS组 884.75±4.55a MS+麝香保心丸组871.22±4.35b

注：与正常对照组比较，aP<0.01；与MS组比较，bP<0.01。

4 讨论

随着近年来国民生活条件改善和生活方式的改变，肥胖人群越来越多，导致MS的患病率明显增加，包括高血压及糖脂代谢异常等多种心血管危险因素，这些危险因素均可导致血管损伤，最终导致血管重构的发生。实验研究发现MS大鼠模型可出现血管重构，表现在血管内膜及中膜不均一增厚，结构紊乱，平滑肌细胞增殖明显，涉及的可能分子机制包括炎症因子、一些血管活性因子及脂肪细胞因子等生物效应相关[4-5]。因此，探索参与血管重构的机制，为其防治提供新的策略，具有重要的间接临床意义。

本实验采用高果糖饲料喂养后，血清血糖、甘油三酯水平及尾动脉压明显高于对照组，提示大鼠MS模型建立成功。同时发现MS大鼠主动脉大量胶原沉积，血管细胞排列紊乱，提示主动脉重构，与国内外学者研究一致。同时血清MCP-1水平明显高于正常组，同时主动脉组织MCP-1受体的表达亦同步下调，而MCP-1是体内重要的促炎症因子，可诱导炎症细胞聚集，产生并加重局部组织的炎症反应，而炎症贯穿于血管重构始终，是导致血管功能及解剖结构异常重要分子机制之一，加剧动脉粥样硬化的发生发展，也促进血管重构的发生与发展。

麝香保心丸在临床上作为一种常用治疗冠心病的有效药物，对缓解心绞痛、改善心肌缺血等有显著的作用。本实验用麝香保心丸干预后，MS大鼠主动脉胶原沉积有所减轻，血清MCP-1水平明显下降，主动脉组织MCP-1受体表达同步下调，这提示麝香保心丸有明显的抑制炎症反应的作用，并可改善血管重构，可能是改善血管重构的重要分子机制之一。

实验发现麝香保心丸可改善MS大鼠诱导的血管重构并抑制MCP-1及其受体的表达，这将为血管重构的机制研究及防治提供新的思路和作用靶点，具体的分子作用机制和细胞内信号转导通路尚需进一步研究证实。由于植物提取物成分和有效成分作用靶点的复杂性，中药成分对保护血管内皮功能的药理学作用尚需进一步研究。