陕西省延安地区育龄女性MTHFR基因多态性和国内多地区相关报道比较分析*

曹 云，周 晓，张晓艳，李 帅，何进伟，庞宝华

(1.延安市人民医院检验科，陕西延安 716000；2.延安大学医学院，陕西延安 716000)

亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)由MTHFR基因编码，是叶酸代谢通路的关键酶之一。目前已发现MTHFR基因多态性位点有近20种，其中C677T和A1298C是最具有临床意义的两个突变位点，会直接影响到体内血清和红细胞叶酸水平、同型半胱氨酸的水平，因而对新生儿神经管畸形、21-三体综合征，孕产妇复发性流产、妊娠期高血压等疾病产生重大的影响[1～3]。本研究拟了解延安地区育龄女性MTHFR基因遗传突变情况，进而指导临床为当地育龄女性选择适宜的叶酸增补方案提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 见表1。选取2016年4月1日～2017年12月31日来延安第二医疗集团(网络单位有延安市人民医院、延安市人民医院河庄坪分院、吴起县人民医院、安塞县人民医院、子长县人民医院、富县人民医院、延长石油职工医院等)进行孕前与孕期叶酸代谢能力检测的育龄女性，共1 508例，全部来自于陕西省延安市各个区县，年龄15～49岁，平均年龄27.61±4.19岁。

表1 研究人群来源地分布情况

1.2 试剂和仪器 试剂：叶酸代谢能力测定荧光试剂盒(江西诺德医疗器械有限公司)。仪器：ViiA 7 Dx全自动PCR荧光定量分析仪(美国ABI公司)。

1.3 方法 采集研究对象EDTA抗凝全血，提取DNA，完全按照试剂盒及仪器标准操作流程进行操作。采用荧光定量PCR技术检测MTHFR C677T，MTHFR A1298C的基因多态性，反应体系20 μl，反应条件：95℃ 10 min；95℃ 15 s，60℃ 40 s，40个循环；室温冷却1 min。反应完成后，在荧光定量PCR仪上读取样品孔中的终点荧光，应用分析软件判读样本的基因分型并确定其结果。

1.4 统计学分析 采用SPSS 20.0软件进行统计学分析。计数资料采用率(%)表示，对基因型频率及等位基因频率进行R×C多连列表卡方(χ2)检验，检验水准α=0.05，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 延安地区育龄女性MTHFR基因C677T和A1298C位点Hardy-Weinberg遗传平衡分析 见表2。MTHFR C677T位点基因型有CC(野生型)，CT(杂合型)和TT(突变型)三种。MTHFR A1298C位点基因型也是三种：AA(野生型)，AC(杂合型)和CC(突变型)。研究群体MTHFR C677T 和A1298C两个位点的基因多态性分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡，具有该区域群体代表性。

表2 研究群体MTHFR C677T和A1298C位点Hardy-Weinberg遗传平衡分析

2.2 延安地区育龄女性MTHFR基因C677T和A1298C位点表现型分布 见表3。延安地区1 508例育龄女性MTHFR基因代谢能力正常的还不到研究群体的1/4。

表3 延安地区育龄女性MTHFR基因C677T和A1298C位点表现型分布(n=1 058)

基因型(MTHFR C677T/A1298C)表现型n构成比(%)CC/AA,CC/ACCC/CC,CT/AA,CT/ACCT/CC,TT/AA,TT/AC,TT/CC正常代谢型较弱代谢型弱代谢型33976540422.550.726.8

2.3 延安地区与国内其他地区育龄女性MTHFR基因C677T和A1298C位点基因型和等位基因分布特征

2.3.1 延安地区与国内其他地区育龄女性MTHFR基因C677T和A1298C位点基因型分布特征，见表4。延安地区女性MTHFR C677T位点以杂合突变型CT为主，而其A1298C位点以野生型AA为主。MTHFR C677T和A1298C位点基因型分布情况与湘潭、武汉、南宁等地区基因分布情况的差异有统计学意义(P<0.05)；与乌鲁木齐、辽源等地区基因分布情况的差异无统计学意义(P>0.05)。整体来看MTHFR C677T TT纯合突变型呈现北高南低的趋势。见图1。

表4 不同地区育龄女性MTHFR基因C677T和A1298C位点基因型分布特征[n(%)]

注：aP<0.05。

图1 各地区人群中MTHFR基因C677T位点多态性(CC，CT，TT)分布

2.3.2 延安地区与国内其他地区育龄女性MTHFR基因C677T和A1298C位点等位基因分布特征，见表5。延安地区女性MTHFR C677T位点等位基因C，T和A1298C位点等位基因A，C分布情况与廊坊、武汉、南宁等地区的等位基因分布情况的差异有统计学意义(P<0.05)；与乌鲁木齐、辽源等地区的等位基因分布情况的差异无统计学意义(P>0.05)。并且各个地区的等位基因T有随着纬度下降而下降的趋势。见图2。

表5 不同地区育龄女性MTHFR基因C677T和A1298C位点等位基因分布特征[n(%)]

注：bP<0.05。

图2 MTHFR基因C667T位点等位基因(C，T)随纬度变化趋势

3 讨论

MTHFR基因突变导致的体内低叶酸水平会增加多种疾病的患病风险，包括21-三体综合症、胎儿抗惊厥综合症、唇裂(伴或不伴腭裂)等，对于突变纯合子和突变杂合子的影响风险不同。随着医疗科技的发展与孕期叶酸补充等措施的实施，近年来新生儿出生缺陷发病率虽然有所降低，但每年新生儿出生缺陷仍高达90万例[13]。本研究调查显示，陕西省延安地区超过3/4的育龄女性存在叶酸能力代谢不足的风险，临床常规的叶酸补充剂量(400 μg/d)可能满足不了这部分人群胎儿发育的实际需求。因此，在为育龄女性制定孕前及孕期叶酸增补方案时需考虑区域遗传特征，不能盲目进补。

该研究延安地区育龄女性以基因型(MTHFR C677T/A1298C)CT/AA型为主，并与国内多地区相比存在差异性。有文献报道[14]，叶酸代谢基因MTHFR C677T位点的突变是死胎发生的危险因素，与MTHFR A1298C位点突变无关。另有研究指出[15]，叶酸代谢基因MTHFR C677T位点的突变可能是神经管缺损、先天性心脏病、21-三体综合征发生的危险因素之一，而MTHFR A1298C在其中的作用相对较弱。因此，深度研究了MTHFR C677T位点突变的规律。就总体而言，北方地区(延安、乌鲁木齐、辽源、廊坊、烟台)人群中MTHFR C677T纯合突变基因型TT所占比例比南方地区(湘潭、武汉、昆明、南宁、琼海)高，呈现北高南低的趋势；有趣的是其等位基因T的基因频率也呈现随纬度的递减而降低的走向，这与我国神经管畸形发病率北高于南的趋势相一致[16]，这种基因多态性分布可能受地形、地貌、经纬度、气候、生活环境、饮食等影响，是经过漫长的自然选择形成的。

目前陕西省延安地区还尚未有大样本人群的关于MTHFR C677T，A1298C位点的基因多态性分析报道，这一研究填补了目前这一领域的相关数据的空白。基于该地区研究结果，一方面对一些有过出生缺陷史的育龄女性建议进一步进行MTHFR基因多态性精准检测是非常有必要的，进而采取有效的靶向干预措施；另一方面可为一些基层无法开展叶酸代谢能力检测的医院提供经验用药指导。