5%唑啉·炔草酯乳油高效液相色谱分析

俞霖洁，冯宇杰，庞银娟，吴航俊，吴伟东

（浙江省化工研究院有限公司，杭州 310023）

唑啉草酯（pinoxaden）是由瑞士先正达公司发现、开发和生产的新苯基吡唑啉类除草剂，具有内吸传导性。其为乙酰辅酶A羧化酶（ACCase）抑制剂，通过阻碍脂肪酸的合成，破坏细胞膜的含酯结构，从而导致杂草生长停止，最终死亡。唑啉草酯主要用于一年生禾本科杂草的防除[1-4]。炔草酯（clodinafop-propargyl）是汽巴-嘉基（现先正达）公司开发的具光学活性的含氟芳氧苯氧丙酸酯类除草剂，主要用于防除野燕麦、看麦娘、燕麦、黑麦草、普通早熟禾、狗尾草等[5-6]。目前唑啉草酯单剂的主要检测方法有高效液相色谱法，炔草酯单剂的主要检测方法有高效液相色谱法和气相色谱法，但两者复配制剂的分析方法尚未见报道。本文通过确定紫外检测器检测波长、流动相溶液配比和流速，建立了唑啉草酯和炔草酯同柱分离测定的高效液相色谱分析方法。该方法操作简便，分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求，适用于该产品的分析测定。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Agilent 1260高效液相色谱仪，具可调波长紫外检测器和自动进样器、色谱处理工作站；色谱柱：AcclaimTM120 C18不锈钢柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），孔径120Å；甲醇（色谱纯），临海市浙东特种试剂有限公司；唑啉草酯标样（99.0%）、炔草酯标样（98.9%），国家农药产品质量监督检验中心（定值）；2次蒸馏水；5%唑啉·炔草酯乳油（2.5%唑啉草酯＋2.5%炔草酯）。

1.2 溶液配制

标样溶液：准确称取25 mg唑啉草酯标样和25 mg炔草酯标样，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，充分摇匀，配制成唑啉草酯和炔草酯混合标样溶液。

样品溶液：称取5%唑啉·炔草酯乳油样品约1.0 g，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，充分摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤后待测。

1.3 色谱条件

色谱柱：AcclaimTM120 C18不锈钢柱（250 mm×4.6 mm），孔径120Å，粒径5 μm；进样量：5 μL；流速：1.0 mL/min；柱温：35℃；检测波长：230 nm。流动相梯度洗脱程序见表1。

表1 流动相梯度洗脱程序

1.4 测定步骤

在1.3色谱条件下，待仪器基线稳定后连续注入数针标样溶液，当相邻2针的峰面积变化小于1.5%时，按标样溶液、样品溶液、样品溶液、标样溶液的顺序进行测定。

将测得的样品溶液以及标样溶液中唑啉草酯（或炔草酯）的峰面积分别进行平均。试样中唑啉草酯（或炔草酯）的质量分数w（%）按下式计算。

式中：A1为标样溶液中唑啉草酯（或炔草酯）峰面积的平均值；A2为样品溶液中唑啉草酯（或炔草酯）峰面积的平均值；m1为标样的质量，g；m2为样品的质量，g；P为标样中唑啉草酯（或炔草酯）的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

采用紫外分光光度仪对1.2中配制的标样溶液进行光谱扫描，获得唑啉草酯和炔草酯的紫外吸收光谱图（见图1）。

图1 唑啉草酯和炔草酯紫外吸收光谱图

从图1可知，唑啉草酯在195 nm、230 nm和280 nm波长处均有较大吸收，炔草酯在198 nm和260 nm波长处有较大吸收。经过实验比对，选择230 nm作为检测波长。在此波长下，唑啉草酯和炔草酯峰形良好，吸收比例适当，无杂质影响。

2.2 流动相的选择

分别使用不同比例的甲醇＋水为流动相对样品进行检测分析。由于乳油样品中添加成分及杂质较多，当流动相中甲醇体积占比较低时，杂质出峰慢，使得样品检测时间过长，且未出峰的杂质对目标物出峰时间有影响，目标物出峰时间出现偏差；当流动相中甲醇体积占比较高时，样品中的杂质难以和目标峰有效分离。经多次实验，确定流动相采用梯度洗脱程序。先以体积比为62∶38的甲醇＋水为流动相，出峰快的杂质和目标物有效分离，然后以体积比95∶5的甲醇＋水为流动相，样品中的杂质快速出峰，最后将流动相转换回体积比为62∶38的甲醇＋水，稳定5 min。在此条件下，两组分及杂质均能得到很好的分离，峰形尖锐、对称，基线平稳。唑啉草酯保留时间约为29.6 min，炔草酯保留时间约为37.7 min。标样及样品色谱图分别见图2、图3。

图2 唑啉草酯和炔草酯标样溶液液相色谱图

图3 5%唑啉·炔草酯乳油液相色谱图

2.3 线性关系曲线

在上述液相色谱操作条件下，分别注入1 μL、3 μL、5 μL、7 μL、8 μL唑啉草酯、炔草酯混合标样溶液，以标样溶液进样体积为横坐标，唑啉草酯（或炔草酯）峰面积为纵坐标，绘制标准曲线（见图4）。唑啉草酯线性回归方程为y=1 233 x-138.48，R2=0.999 8；炔草酯线性回归方程为y=590.57 x-127.72，R2=0.999 1。结果表明，该方法在测定范围内线性关系良好。

图4 唑啉草酯和炔草酯线性关系图

2.4 准确度实验

称取5批次5%唑啉·炔草酯乳油样品，分别准确加入一定量的标样，根据称取样品量和加入标样量计算出唑啉草酯和炔草酯的理论含量。按照1.3色谱条件进样分析，得到唑啉草酯和炔草酯的实测值。唑啉草酯回收率为98.87%～101.56%，平均回收率为99.70%；炔草酯回收率为98.09%～99.16%，平均回收率为98.51%。检测方法满足定量分析要求，结果见表2。

表2 方法准确度测定结果

2.5 精密度实验

按1.3色谱条件，对同一5%唑啉·炔草酯乳油样品平行测定5次，分别获得唑啉草酯和炔草酯的标准偏差和变异系数，结果见表3。

表3 方法精密度测定结果