榆干离褶伞液体培养基配方筛选试验

高智涛，敖贵彬，宋淑丽

(1.黑龙江省伊春林业科学院，黑龙江 伊春153000；2.伊春森工集团铁力林业局，黑龙江 伊春153000；3.伊春市友好林业局，黑龙江伊春153000 )

榆干离褶伞[Lyophyllumulmarium(Bull.:Fr.) Kuhner]菌肉肥厚，香味浓郁的食用菌，在我国河北、吉林、黑龙江、河南、甘肃、青海等省均有分布，夏秋生于榆、柳、槭等树种的干部。目前榆干离褶伞初步驯化栽培成功，但是走出实验室面向生产，一些技术问题还需要进一步研发。目前榆干离褶伞三级菌制作都是通过固体斜面培养基分级进行培养，从一级菌(试管)→二级菌(菌袋)→三级菌(菌袋)出菇，过程较繁琐，并且榆干离褶伞其菌丝在二级菌中生长极为缓慢，长满菌袋需50～60天，培养时间长[1-2]。而利用液体培养基进行接种，菌丝长满菌袋仅需要35～45天。本试验通过对榆干离褶伞液体培养基中碳氮源、碳氮比、温度等因素进行分析，得出最适合榆干离褶伞菌丝生长液体培养配方，为进一步推广榆干离褶伞栽培提供技术依据。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

榆干离褶伞菌株来自黑龙江省林副特产研究所。

1.2 培养基

1.2.1 母种培养基。采用PDA培养基。

1.2.2 碳源测定基础培养基。蛋白胨0.5%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、pH自然。

1.2.3 氮源测定基础培养基。葡萄糖2%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、pH自然。

1.2.4 试验培养基。将碳氮源基础培养基中的蛋白胨、葡萄糖分别以酵母膏、黄豆粉、蔗糖、可溶性淀粉进行替换，开展碳氮源筛选试验

1.2.5 碳氮比筛选试验。利用得出最适合榆干离褶伞菌丝生长的碳氮源进行碳氮比筛选试验，氮素浓度设定为0.03%，碳氮比设定分别为15∶1；18∶1；21∶1；24∶1；27∶1。得出适合菌丝生长的最适碳氮比。

1.2.6 菌丝生长物理指标筛选试验。利用筛选得出的榆干离褶伞液体培养基配方，在不同培养温度和不同培养时间进行培养。得出适合菌丝生长的温度、时间。

1.3 方法

1.3.1 碳源筛选。取榆干离褶伞菌种接种到4种不同碳源液体培养基中，在24℃摇床中培养5d，培养结束后过滤出菌丝放入25mL离心管中4000转离心10min，称重既得菌丝体湿重。每种配方设置10个重复，取平均值。

1.3.2 氮元筛选。取榆干离褶伞菌种接种到4种不同氮源液体培养基中，在24℃摇床中培养5d，培养结束后过滤出菌丝放入50mL离心管中4000转离心10min，称重既得菌丝体湿重。每种配方设置10个重复，取平均值。

1.3.3 碳氮比筛选。用适合榆干离褶伞菌丝生长的碳氮源制作液体培养基，氮素浓度设定0.03%，碳氮比设置为15∶1；18∶1；21∶1；24∶1；27∶1共计5个梯度，在24℃摇床中培养5d，培养结束后过滤出菌丝放入25mL离心管中4000转离心10min，称重既得菌丝体湿重。每种配方设置10个重复，取平均值。

1.3.4 培养温度筛选。利用筛选后的液体培养基配方制作液体培养基，接种后放入摇床中培养，控制培养温度为18℃、20℃、22℃、24℃、26℃、28℃等6个不同培养梯度，培养5d，培养结束后过滤出菌丝放入25mL离心管中4000转离心10min，称重既得菌丝体湿重。每个温度培养10瓶，取平均值。

1.3.5 培养时间筛选。利用筛选后的液体培养基配方制作液体培养基60瓶，接种后放入24℃摇床中培养，在接种第4天开始每天拿出10瓶，过滤出菌丝放入25mL离心管中4000转离心10min，称重既得菌丝体湿重。

2 结果与分析

2.1 不同碳氮源对榆干离褶伞菌丝生长的影响

图1 不同碳氮源对榆干离褶伞菌丝生长的影响

由图1可以看出，可溶性淀粉作为碳源菌丝产量最高，其次是葡萄糖、蔗糖。酵母膏作为氮源菌丝产量最高，其次是黄豆粉、蛋白胨。利用可溶性淀粉、酵母膏制作液体培养基培养榆干离褶伞菌种，菌丝体产量最高，菌丝体湿重23.48g/100mL，利用蔗糖、蛋白胨培养榆干离褶伞菌种，菌丝产量最低，菌丝体湿重15.02g/100mL。

2.2 不同碳氮比对榆干离褶伞菌丝生长影响

图2 不同碳氮比对榆干离褶伞菌丝生长的影响

由图2可以看出，碳氮比为18∶1、21∶1、24∶1时，菌丝体产量差异性较小，呈递增趋势，碳氮比为27∶1时，菌丝体产量有所下降，碳氮比在24∶1时菌丝体最高，菌丝体湿重26.29g/100mL。碳氮比15∶1时，菌丝体产量最低，菌丝体湿重21.44g/mL。

2.3 不同温度对榆干离褶伞菌丝生长影响

图3 不同温度对榆干离褶伞菌丝生长的影响

由图3看出，培养温度在18～24℃时菌丝体产量呈递增趋势，在24℃时菌丝产量最高达26.97g/100mL，温度在24～28℃时菌丝产量呈递减趋势。

2.4 不同培养时间对榆干离褶伞菌丝生长影响

图4 不同培养时间对榆干离褶伞菌丝生长的影响

由图4可以看出，榆干离褶伞菌丝体培养时间在4～8天时呈现递增趋势，第8～9天菌丝体产量变化不大，其第7天产量为29.45g/100mL、第8天产量为29.99g/100mL、第9天产量为30.17g/100mL。

3 小结与讨论

实验结果表明，榆干离褶伞液体培养基碳源选择为可溶性淀粉，氮源是酵母膏，碳氮比为24∶1，适合榆干离褶伞菌丝体生长的液体培养基配方为可溶性淀粉16.49g、酵母膏4.2g、纤维素钠0.05%，培养温度为24℃，培养时间为7～8天，培养菌丝体湿重可达29.99g/100mL。