解郁怡神茶饮对链脲佐菌素小鼠焦虑和抑郁行为的影响

王君明 李亚 李金花 崔瑛 李金洋 蔡泓 余洋 卢露 蒋慧 孙云娜

(河南中医药大学 1药学院，河南 郑州 450046；2呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心)

抑郁症和焦虑症均是糖尿病常见并发症之一，糖尿病患者并发抑郁症和(或)焦虑症的概率均很大〔1,2〕。抑郁症和焦虑症对人的危害是严重的。就糖尿病而言，沉重的精神压力、不良情绪不仅会使血糖升高，降低治疗的依从性，还会加速心、肾等并发症的发生，对病情的预后不利。反之，血糖控制不好，病情加重，又或会导致患者精神痛苦、悲观等，加重他们的抑郁和(或)焦虑症状。中医治疗各种疾病有独特之处，糖尿病并发抑郁症和(或)焦虑症发病率高，且社会危害大，但至今缺乏针对糖尿病并发抑郁症和(或)焦虑症进行防治的药物。本研究旨在考察解郁怡神茶饮(JYYSCY)防治糖尿病并发抑郁症或焦虑症的药理作用。

1 材料与方法

1.1动物 昆明(KM)小鼠，SPF级，雄性，体重18～22 g，由河南省实验动物中心提供〔SCXK(豫) 2015-0004〕。

1.2试药与行为学装置 金银花：产地河南，批号150501，经本校药学院生药学科陈随清教授鉴定为忍冬科忍冬属植物忍冬Lonicera japonica Thunb.干燥花蕾；鸡血藤：产地广西，批号：150701，经本校药学院生药学科陈随清教授鉴定为豆科植物密花豆Spatholobus suberectus Dunn的干燥藤茎；合欢花：产地湖南，批号150303，经本校药学院生药学科陈随清教授鉴定为豆科植物合欢Albizia julibrissin Durazz.的干燥花序；首乌藤：批号150613，经本校药学院生药学科陈随清教授鉴定为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥藤茎。链脲佐菌素(STZ)购于Sigma公司。大小鼠高架十字迷宫(EPM)系统：PM-200，成都泰盟软件有限公司；明暗箱系统：型号：XR-XB113，强迫游泳实验系统：型号：XR-XQ202，悬尾系统：型号：XR-XX203，均上海欣软信息科技有限公司。

1.3JYYSCY制备 按照解郁怡神方(金银花、鸡血藤、合欢花和首乌藤各等分组成)，每1 g解郁怡神方粗粉加50 ml沸水(W/V=1∶50)浸泡6次，每次5 min，合并每次泡茶液，减压回收水，使药液的浓度以生药计算，每1 ml的JYYSCY含解郁怡神方1 g。

1.4动物分组、造模及处理 将实验小鼠适应性喂养3 d,随机选10只为对照组(非STZ处理)，其余小鼠一次性大剂量腹腔注射(ip)STZ 150 mg/kg造高血糖模型。72 h后尾静脉取血用血糖仪测定血糖值，选取血糖值≥11.1 mmol/L的小鼠作为STZ糖尿病模型小鼠纳入实验。STZ组及JYYSCY组从成功造高血糖模型的动物中均衡分组获得，每组10只。实验共分5组，即对照组、STZ组、JYYSCY低剂量组:STZ+JYYSCY(1 g/kg)、JYYSCY中剂量组:STZ+JYYSCY(2 g/kg)、JYYSCY高剂量组:STZ+JYYSCY(4 g/kg)。STZ组和对照组给予同体积生理盐水。自分组当天开始1 次/d连续灌胃(ig)给药，从给药第14天开始，均在当天给药1 h后进行一项行为学测试。

1.5行为学实验

1.5.1EPM实验 在给药第14天进行。将小鼠置于规格：300 mm×60 mm，开臂臂高6 mm，闭臂臂高150 mm的距地面高500 mm的EPM开臂与闭臂交汇处，头朝向任一开臂，通过PMT-100十字迷宫视频分析系统监视记录小鼠5 min内的活动轨迹，分别以小鼠在EPM的开臂滞留时间百分比(OT%)和开臂进入次数百分比(OE%)作为抗焦虑评价指标〔3〕。

1.5.2明暗穿箱(LDT)实验 在给药第15天进行。将小鼠背对暗室置于明箱中央，用STT-100穿梭实验视频分析系统记录10 min内小鼠穿箱次数(以四肢均穿过门洞为标准计为1次)，以穿箱次数(NT)作为评价药物抗焦虑作用的指标〔3〕。

1.5.3悬尾实验(TST) 在给药第16天进行。将单个小鼠尾端(在距尾尖部2～3 cm处)用医用胶带粘于悬尾箱上部支架上，成倒挂样，小鼠为克服非正常体位而挣扎，但活动一段时间出现间断性行为绝望状态，悬挂时间为6 min，TST-100系统分析并记录6 min内悬尾累计不动时间(不动状态即小鼠停止挣扎或无任何活动)，以该不动时间作为评价抗抑郁作用的指标〔4〕。

1.5.4强迫游泳实验(FST) 在给药第17天进行。将小鼠放于规格：180 mm×350 mm透明塑料圆柱直桶内，水温20～25℃的容器内，从小鼠入水后计时6 min，通过FST-100强迫游泳软件系统观察并记录后4 min内小鼠累计漂浮不动的时间(即小鼠在水中停止挣扎，或呈现漂浮状态，仅有前肢运动以保持头部浮出水面)，以该不动时间作为评价抗抑郁作用的指标〔4〕。

1.6统计学方法 采用SPSS11.5统计软件进行单因素方差分析及组间两两比较用LSD法。

2 结 果

2.1各组EPM和LDT实验中焦虑行为比较 与对照组比较，STZ组OT%、OE%及NT均有降低趋势，但均无统计学差异(均P>0.05)；与STZ组比较，JYYSCY中、高剂量组均使OT%、OE%和NT显著升高(P<0.05，P<0.01)，而JYYSCY低剂量组OT%和OE%与STZ组比较差异无统计学意义(P>0.05)，但NT显著高于STZ组(P<0.01)。JYYSCY中、高剂量比较，各指标均无统计学差异(P>0.05)。见表1。

表1 各组EPM和LDT实验中焦虑行为比较

与对照组比较：1)P<0.05，2)P<0.01；与STZ组比较：3)P<0.05，4)P<0.01

2.2各组FST和TST实验中悬尾不动时间比较 与对照组比较，STZ组TST中悬尾不动时间显著升高(P<0.01)，而FST中游泳不动时间无显著差异(P>0.05)；与STZ组比较，JYYSCY中、高剂量组FST及TST不动时间均显著降低(P<0.05，P<0.01)，JYYSCY低剂量组FST和TST不动时间与STZ组比较差异无统计学意义(P>0.05)。JYYSCY中、高剂量组比较，各指标均无统计学差异(P>0.05)。见表2。

表2 各组FST和TST实验中悬尾 不动时间比较

与对照组比较：1)P<0.01；与STZ组比较：2)P<0.05，3)P<0.01

3 讨 论

本项目组在中医药理论的指导下，以金银花、鸡血藤、合欢花、首乌藤为主要原料组成解郁怡神方，并且以该方开发JYYSCY。其中，金银花药性甘、寒，归肺、心、胃经，具有清热解毒、疏散风热之功，用于痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等病证；鸡血藤药性苦、甘、温，归肝、肾经，具有活血补血、调经止痛、舒筋活络之功，用于月经不调、痛经、经闭、风湿痹痛、麻木瘫痪、血虚萎黄等病证；合欢花药性甘、平，归心、肝经，具有解郁安神之功，用于心神不安、忧郁失眠等证；首乌藤药性甘、平，归心、肝经，具有养血安神、祛风通络之功，用于失眠多梦、血虚身痛、风湿痹痛、皮肤瘙痒等病证。本研究以金银花、鸡血藤、合欢花、首乌藤为主要原料制成的中药保健茶，同时发挥了合欢花与首乌藤解郁养心安神、金银花解热除烦、鸡血藤补血活血和通经通络之功，有望用于多种类型的高血糖、糖尿病并发焦虑症和(或)抑郁症的防治。此外，金银花药性偏寒凉而鸡血藤性偏温，合欢花和首乌藤为平性，整个茶的配方近于平性，避免了长期饮用偏寒或偏温伤胃的弊端；同时所选原料药物均具有甘味，为本茶饮具有较好口感奠定了基础。

本研究参考文献〔5,6〕方法复制糖尿病模型，并复合焦虑抑郁装置致并发焦虑抑郁模型，在此基础上考察了JYYSCY防治糖尿病并发焦虑抑郁症的药理作用。研究结果显示，JYYSCY显著改善了STZ小鼠在EPM和LDT实验中的焦虑行为，抑制了STZ小鼠在FST和TST的抑郁行为，提示JYYSCY对STZ小鼠具有抗焦虑和抗抑郁作用，说明本研究开发的JYYSCY有望用于糖尿病并发焦虑症和(或)抑郁症的防治。现代研究表明，金银花〔7〕及其所含的活性成分绿原酸〔8〕和木犀草苷〔9〕、鸡血藤中芒柄花素〔10〕和首乌藤中大黄素〔11〕均具有降糖作用，首乌藤中活性成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷〔12〕尚具有改善糖尿病肾病并发症作用，合欢花中槲皮苷〔13〕和合欢花皂苷C1〔14〕均具有抗焦虑作用，合欢花总黄酮〔15〕具有抗抑郁作用。JYYSCY防治糖尿病并发焦虑症或(和)抑郁症的作用，这可能与其组成药物金银花、鸡血藤、首乌藤和合欢花中多种活性成分综合作用有关。