化学指纹图谱法及DNA条形码分子鉴定技术对鸡血藤饮片煮散质 量体系进行探索

陶爱波

摘要：分析鸡血藤饮片煮散质量体系应用化学指纹图谱法及DNA条形码分子鉴定技术探索情况发现：化学指纹图谱法及DNA条形码分子鉴定技术对鸡血藤饮片煮散质量体系有较好的识别检测功能，同时鸡血藤煮散饮片的浸出率、质量均一性均较高。

关键词：鸡血藤饮片;DNA条形码分子鉴定技术;化学指纹图谱法;质量体系

鸡血藤饮片是临床上较常用的中药，其功效主要包括活血、补血、通络等，在月经不调、血虚等疾病的治疗上有较好的疗效[1]。鸡血藤主要来源于自然环境，但近年来的过度采摘，导致资源储备量下降，进而进一步影响鸡血藤药材的质量，导致其重要的化学成分含量存在很大差异，从而对临床药物的稳定性、应用效果均产生直接的影响。鸡血藤饮片煮散可有效减少鸡血藤药材的使用量，但对于该中药识别溯源存在很大的困难度，故需一种易于鉴定、检测方式[2]。因此為了分析鸡血藤饮片煮散质量体系应用化学指纹图谱法及DNA条形码分子鉴定技术探索情况，特选取鸡血藤饮片200g作为研究对象行对比分析，现将结果报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取鸡血藤饮片200g作为研究对象，将鸡血藤原饮片作为对照组（100g），将余下鸡血藤饮片粉碎后过筛得到鸡血藤煮散饮片，将其作为观察组（100g）。

1.2方法

化学指纹图谱法：应用高效液相色谱仪系统（美国Waters2695型），选择Empower色谱工作站、W2998 DAD 检测器，建立色谱条件，制备表儿茶素（中国药品生物制品鉴定所，生产批号：110878-200102，含量：≥98%）对照品溶液，将其置于4℃冰箱中，保存备用，制备鸡血藤饮片（康美药业有限公司，生产批号：160301031）供试品溶液;DNA条形码分子鉴定技术取对照组与观察组饮片样本，应用液氮磨碎，并应用植物DNA提取试剂盒提取基因组总DNA，ITS2序列扩增应用正向引物、反向引物进行扩增，PCR模板DNA为2.0μL，反应体系为25μL，PCR扩增产物应用1.2%琼脂糖凝胶电泳进行检测，并应用PCR 仪（美国Applied Biosystems公司，型号：2720Thermal Cycler）双向测序PCR产物。鸡血藤饮片，鸡血藤煮散饮片与鸡血藤原饮片采用标准汤剂煎煮法进行提取，分别加水浸泡、煮沸、过滤，再加水煎煮、过滤，减压旋蒸，蒸干，计算出膏率。

1.3观察指标

①对比两组患者表儿茶素RSD、出膏率、表儿茶素含量、指纹图谱相似度以及相对峰面积。

1.4统计学处理

采用SPSS 20.0统计学软件进行统计分析，正态计量数据用“”表示，组间比较采用t检验，样本率的比较采用χ2检验;以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

观察组表儿茶素RSD显著低于对照组;观察组出膏率、表儿茶素含量、指纹图谱相似度以及相对峰面积显著高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。具体见表1。

3 讨论

鸡血藤饮片煮散通过粉碎鸡血藤，使其成为一定的粒度，再应用水与之共煎，过滤沉渣，取上述汁，制成煮散，来进一步提高鸡血藤药材煎煮效率，节约鸡血藤用量，但鸡血藤饮片煮散过程中由于需要粉碎，导致鸡血藤药材形态遭到破坏，使临床上无法对该药物进行鉴别，故提供精准的鸡血藤识别与检测，提高临床用药疗效稳定性尤为重要，为探究鸡血藤饮片煮散质量体系应用化学指纹图谱法及DNA条形码分子鉴定技术探索情况，特做此研究分析[3]。

本研究表明，观察组表儿茶素RSD显著低于对照组;观察组出膏率、表儿茶素含量、指纹图谱相似度以及相对峰面积显著高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。结果显示表与鸡血藤原饮片相比，鸡血藤饮片煮散的儿茶素RSD值明显降低，指纹图谱相似度显著升高，说明后者质量均一性较高，同时出膏率显著升高，表明鸡血藤饮片煮散可有效提高该药材有效成分的煎出率。与鸡血藤原饮片比较，鸡血藤饮片煮散质量体系应用标准化、规范化工艺，微小化、均匀化处理鸡血藤饮片的形状、规格，使其呈颗粒型，高效的分装、调剂、煎煮，药液过滤速度适度，使鸡血藤饮片质量更加稳定化，澄清度尚可，有效提高临床鸡血藤用药的稳定。与鸡血藤原饮片指纹图谱相比，鸡血藤饮片煮散相对峰面积有所增高，指纹图谱相似度更佳，证实应用化学指纹图谱法及DNA条形码分子鉴定技术可保证鸡血藤饮片煮散质量体系的质量，解决了辨药之难的问题，提供了饮片煮散的鉴定、检测的可靠技术，便于鸡血藤饮片煮散推广、应用。此外，与鸡血藤原饮片比较，鸡血藤饮片煮散可在保证疗效的同时，还可有效降低鸡血藤药物用量，提高鸡血藤资源的合理利用率，并提高甾体、黄酮类等鸡血藤药效物质的溶出，保证药物质量的稳定性。

综上所述，对于鸡血藤饮片煮散质量体系来说，应用化学指纹图谱法及DNA条形码分子鉴定技术具有较高的临床应用价值，可实现饮片的质量均一化、标准化工艺制备、自动化生产，为中医临床疗效提供可靠保障。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[J].北京﹕中国医药科技出版社，2015：194.

[2] 舒顺利，应军，刘军民，等. 鸡血藤化学成分研究. 中药新药与临床药理，2012，23（2）：184-186.

[3] 陈士林，黄志海，丘小惠，等. 中药精准煮散饮片[J].世界科学技术中医药现代化，2016，18（9）：1430-1440.