盐酸吗啡注射液安全性实验评价*

魏文芝，孙继超，朱从会，张敏娟，王天学

(1.青海省药品检验检测院，西宁 810016；2.青海省中藏药现代化研究重点实验室，西宁 810016；3.中国检验检疫科学研究院综合检测中心，北京 100123；4.青海省食品检验检测院，西宁 810000)

盐酸吗啡属于阿片类强效镇痛药，适用于其他镇痛药无效的急性锐痛，如严重创伤、战伤、烧伤及晚期癌症患者的三阶梯止痛等，是术后手术刺激痛、癌痛等中、重度疼痛镇痛药首选[1]，盐酸吗啡注射液广泛应用于临床[2-5]，其安全性研究笔者未见报道。盐酸吗啡有轻微的阿托品样作用，可引起心搏增快，逾量中毒时可出现呼吸减慢、浅表而不规则，发绀和嗜睡现象[6]。笔者参照《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》《化学药物急性毒性实验技术指导原则》及相关文献[7-11]，对盐酸吗啡注射液局部刺激性、全身过敏性、体外溶血性进行研究，报道如下。

1 材料与方法

1.1实验动物 健康、雄性、成年家兔，体质量2.0～2.5 kg；健康、雄性、成年豚鼠，体质量300～400 g；实验动物均购买自北京金牧阳实验动物养殖有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK(京)2015-0005)。实验动物饲养环境温度为18～25 ℃，相对湿度为40%～70%，实验动物使用许可证号：SYXK(京)2011-0016。

1.2试药 盐酸吗啡注射液(东北制药集团沈阳第一制药有限公司，批号：150302-1，150701-1，150609-2，规格1 mL：10 mg)，卵白蛋白(Sigma公司，批号：SLBL7392V)，0.9%氯化钠溶液(晨欣药业股份有限公司，批号：1509191703)，10%甲醛溶液(北京益利精细化学品有限公司)。

1.3仪器 电子称(广东香山衡器集团股份有限公司)，赛多利斯BT25S电子天平(德国Sartorius公司，感量：0.1 mg)，HH-1数显恒温水浴锅(金坛市华龙实验仪器厂)，TDC-40B台式离心机(上海安亭科学仪器厂)，奥林巴斯CX31生物显微镜(日本)。

1.4血管刺激性实验 参照文献[12-13]。取家兔4只，每只家兔耳缘静脉给药，采用同体左右侧自身对比法，左侧给药，右侧作为对照。设置受试物单一剂量组和阴性对照组，单次给药剂量为2.8 mg·kg-1，阴性对照组予溶媒(0.9%氯化钠溶液)，给药频次为每天1次，连续给药3 d。给药后1，5 h，肉眼观察并记录给药血管局部变化，之后每天继续观察动物耳给药部位局部及周围血管情况，末次给药48 h后将家兔处死，取组织做病理检查，离注射点向心端1.0～2.5 cm取材(所取标本应包含有耳缘静脉)，阴性对照组应取相应部位，用10%甲醛固定，制备石蜡切片并进行局部组织病理学检查。

1.5肌肉刺激性实验 参照文献[12-13]。取家兔4只，采用同体左右侧自身对比法。剪去两侧股四头肌部位的兔毛，用碘酊和乙醇消毒后分别在右侧股四头肌注入盐酸吗啡注射液，左侧股四头肌注入等量0.9%氯化钠注射液，作为对照，单次给药剂量为2.8 mg·kg-1，给药频次为每天1次，连续给药3 d，给药后5 h肉眼观察给药部位局部反应，如充血、红肿等。末次给药后48 h处死家兔，观察注射部位肌肉组织反应情况，量取充血范围，评价并计算反应级数。解剖并取出股四头肌，沿肌纤维平行方向切开肌肉，暴露注药部位，制备石蜡切片并进行局部组织病理学检查。

1.6全身过敏性实验 参照文献[12-13]。取豚鼠18只，随机分为3组，每组6只，设置盐酸吗啡注射液组、0.9%氯化钠注射液组、卵白蛋白组。盐酸吗啡注射液组给予盐酸吗啡注射液，单次给药剂量为2.8 mg·kg-1，卵白蛋白组给予卵白蛋白，单次给药剂量为50 mg·kg-1。采用隔日腹腔注射给药致敏，共给药3次，分别于末次给药后第14天，第21天采用一次性快速静脉注射盐酸吗啡注射液进行攻击。致敏期间每日观察动物症状，首次给药、末次致敏、激发前动物称定质量。激发后即刻观察动物反应至30 min，包括症状出现及消失时间，至少观察3 h，进行评价分级。

1.7溶血性实验 参照文献[12-13]。健康成年家兔，心脏穿刺兔血15 mL，放入含玻璃珠的三角烧瓶中振摇10 min，用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白原。加入10倍量0.9%氯化钠溶液，摇匀，1500 r·min-1离心15 min，除去上清液，沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤 2或3次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液配成2%混悬液，供实验用。取洁净试管7只，进行编号，1～5号管为供试品管，6号管为阴性对照管，7号管为阳性对照管。按要求加入2%红细胞悬液、0.9%氯化钠溶液或纯化水，配制各组反应体系，混匀后，立即置(37.0±0.5)℃恒温箱中进行温育，开始每隔15 min观察1次，之后间隔1 h观察1次，观察至3 h，并于24 h后观察溶血与红细胞凝聚现象。

2 结果

2.1血管刺激性实验 家兔单次耳缘给予供试品盐酸吗啡注射液后1，5 h时观察，均发现动物活动量明显减少，反应灵敏性降低；肉眼观察药物注射部位及远离注射处血管及组织，均未见出血、淤血、水肿等异常改变，与注射0.9%氯化钠注射液的对照侧耳部血管相比无明显差异，但受试组与阴性对照组均见静脉注射部位血管轻微充血，疑与受试物药效活性有关。末次给药后48 h，处死家兔，取两耳注射部位的血管及周围组织进行病理学检查，受试组与阴性对照组家兔耳缘静脉注射部位近端、中端、远端处血管内均未见血栓，血管内皮细胞未见肿胀、增生、血管外周围组织均未见出血。见图1。

2.2肌肉刺激性实验 给药后5，24，48 h，肉眼观察家兔肌肉注射给药部位局部反应，均未见充血、红肿等异常反应。末次给药后48 h处死家兔，解剖并取出股四头肌，沿肌纤维平行方向切开肌肉，暴露注药部位，制备石蜡切片并进行局部组织病理学检查，受试动物未见充血、变性、混合性炎症细胞浸润。1只动物(2号)0.9%氯化钠注射液对照左后肢股四头肌局灶性混合性炎性细胞浸润，其他3只动物左肢肌肉未见类似改变。见图2。

2.3全身过敏性实验 豚鼠全身过敏性实验结果显示，致敏期间各组动物饮食、活动等状态均无异常，未发现明显毒性体征，各组动物体质量差异无统计学意义。分别给予各组实验动物3次致敏后第14天激发，30 min内观察动物反应症状，0.9%氯化钠注射液组未见动物出现躁动、竖毛、搔鼻、流泪、痉挛等变态反应；盐酸吗啡注射液组发现1只动物出现躁动症状(反应级数为1)，10 min后恢复正常，其他均未见任何过敏反应症状；卵白蛋白组激发后5 min内出现明显的呼吸困难、痉挛、直至死亡，剂量减半后仍然出现上述症状，并在10 min内死亡。上述结果表明盐酸吗啡注射液不会引起豚鼠全身过敏性反应。

2.4溶血性实验 本实验条件下，盐酸吗啡注射液未引起明显溶血或凝血现象，见表1。

3 讨论

在本次肌肉刺激性实验中，0.9%氯化钠注射液组1只动物右肢股四头肌发生的改变，因其发生率低，且见于对照股四头肌，分析与注射操作不当有关，与盐酸吗啡注射液本身特性无关。

A.近端；B.中端；C.远端

A.0.9%氯化钠注射液组左后肢(4号鼠)；B.盐酸吗啡右后肢(4号鼠)；C.0.9%氯化钠注射液组左后肢(2号鼠)

表1 盐酸吗啡注射液溶血性实验结果

“+”为溶血，“-”为无溶血，“±+”表示有轻微溶血现象

“+” hemolysis ；“-” no hemolysis； “±+” mild hemolysis

实验结果表明，盐酸吗啡注射液对家兔血管和肌肉无明显的刺激性，豚鼠全身过敏性实验未见变态反应，对家兔红细胞未见溶血或凝血作用，符合注射液安全用药要求，为临床安全用药提供理论依据，因其属于国家特殊管理的麻醉药品，同时具有治疗作用和依赖性，规范使用方可有效减少不良反应的发生，达到治疗目的。