超高效液相-串联质谱法同时测定动物尿液中11种违禁兽药残留分析方法研究

张振宇 李 明

（济源市畜产品质量监测检验中心，河南济源 459000）

0 引言

兽药广泛应用的于畜牧养殖业，使用过程中滥用、误用及不遵守休药期规定，导致产生药物残留，这些药物通过食物链在人体内产生耐药性，还可致基因突变、致畸、致癌。生猪、牛、羊体内兽药残留监控通过尿液检测较为便捷，易操作，但我国动物尿液中兽药多残留检测标准严重缺乏，且存在通量低的不足，难以满足残留快速检测的要求。

检测兽药残留的方法较多，主要有液相色谱法、气相色谱质谱法、液相色谱-串联质谱法、酶联免疫法等。开展了动物尿液兽药多残留检测技术的研究，相比单一检测方法具有更高的效率、更简单的前处理过程。

1 材料与方法

1.1 仪器

UPLC Xevo TQ MS超高效液相色谱-质谱联用仪（Waters公司）；高速冷冻离心机（香港力康公司）；TTL-DCII型氮吹仪（北京同泰联科技公司）。

1.2 试剂与材料

乙腈、甲醇、甲酸为色谱纯；克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、氯丙那林、特布他林、苯乙醇胺A、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、金刚烷胺、金刚乙胺标准品全部购自于德国Dr.Ehrenstorfer公司；同位素内标为：沙丁胺醇-D3、莱克多巴胺-D3、克仑特罗-D9、氯霉素-D5、甲砜霉素-D3、氟苯尼考-D3、金刚烷胺-D15；Oasis MCX 固相萃取柱（Waters公司，60 mg/3mL）。

1.3 色谱条件

色谱柱：CORTECS UPLC C18（1.6 μm，2.1 mm X 100 mm）；流动相A为乙腈；流动相B为0.2%甲酸水；流速为0.4 ml/min；柱温为40 ℃；进样量为5μl，0～1min，5～10%A；1～3min，10～80%A；3～4min，80%A；4～5min，80～5%A。

1.4 质谱条件

电离方式：除酰胺醇类采用电喷雾负离子模式，其他均为电喷雾正离子模式；多反应监测模式（MRM）采集；毛细管电压2.7kV离子源温度为150 ℃；脱溶剂气温度为500 ℃；脱溶剂气流量为1000 L/h。

1.5 样品处理

测试取适量尿液于离心管，10000r/min离心10min，量取试样2ml于10ml离心管，添加混合同位素内标，加入甲酸100μl，混合均匀；MCX小柱依次用甲醇、水各3ml活化，试样过柱，用0.2%甲酸水溶液、甲醇各3ml淋洗，减压抽干，用5%氨水甲醇溶液3mL洗脱，洗脱液在50℃氮气吹干，残余物用1.0ml初始流动相溶解，涡旋混匀，过膜，供超高效液相色谱-串联质谱仪测定。

2 结果与分析

2.1 色谱柱及流动相的选择

本方法选取了CORTECS UPLC C18 柱、BEH C18柱、HSS T3柱进行分离实验。本研究选择了3大类11种兽药进行检测，在根据各色谱柱的特点分别对流动相进行了优化实验。经实验，上述三种化合物在CORTECS UPLC C18的分离优于HSS T3 色谱柱、BEH C18色谱柱，本实验采用该色谱柱进行测定。

2.2 方法学验证

2.2.1 基质标准曲线与检出限

为降低基质效应影响，采用基质标准进行定量，采用尿液空白基质溶液配制质量浓度，为0.5，1，5，10，20，50 ng/mL标准溶液，以标样峰面积/内标峰面积比值与质量浓度做标准曲线，结果表明：在此质量浓度范围内所有组分线性良好，相关系数r均在0.991～0.999。以3倍信噪比计算得到的检出限在0.1～10μg/kg范围内，可满足动物尿液中相应兽药残留测定的要求。

2.2.2 回收率、精密度

根据实际检出能力，制备了1.0，5.0，10.0 μg/kg三个质量分数的阳性尿液样品，每个水平5 平行实验，三个水平样品的回收率在75.1～106.5%之间，RSD小于12.5%。方法的准确性和重复性良好。

3 结论

本文建立了采用Oasis MCX固相萃取柱净化超高效液相色谱-串联质谱法同时测定动物尿液中β-激动剂类、酰胺醇类、抗病毒类11种违禁药物残留含量的方法，该法与现行国家标准、行业标准相比在保证准确性好、灵敏度高的同时，前处理方法更简单快速，可用大批量样品检测。