牛胚胎移植技术在凉山黄牛的应用试验报告

安拉扎，张 涛，陈仕毅，贾先波，吉米有尔

(1.四川省凉山彝族自治州畜牧兽医科学研究所，四川 西昌 615000；2.四川农业大学，成都 温江 611130;3.四川省昭觉县农业农村局，四川 昭觉 616150)

凉山黄牛于1995年全国畜禽品种补充调查时命名,是昭觉县的优势畜种，是一种以放牧为主的役肉兼用型小型地方品种，主要分布在四川省凉山州境内及攀枝花市部分县区，适宜在海拔1500m以上的二半山区生长、繁衍。该品种在生产性能、抗病力、适应性等方面都表现出了特有的品质，2017年末昭觉县存栏64348头。四川肉牛创新团队彝区肉牛工作岗位为推动凉山昭觉县肉牛产业的发展，加快凉山黄牛良种化进程，为品种改良提供一条新的技术思路。岗位团队从2018年7月起，在四川肉牛创新团队农区肉牛岗位、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所专家的协作指导下，共同在彝区岗位工作示范县昭觉县开展肉牛同期发情、胚胎移植技术的试验研究工作。现将胚胎移植应用试验情况报告如下：

1 材料

1.1 胚胎来源

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所提供澳大利亚进口和牛冻胚。

1.2 移植地点

四川省凉山州昭觉县特布洛乡特布洛村、庆恒乡庆恒村、比尔乡补各洛呷村、洒拉地坡乡尔打火村4个乡镇。

1.3 使用药物

黄体酮阴道缓释剂(孕酮栓CIDR):新西兰DEC国际有限公司生产、生产批号：X043691

氯前列醇钠注射液(PG-CL):宁波三生生物科技有限公司生产2ml(0.2mg×10支)、生产批号S180901

盐酸利多卡因注射液:石药银湖制药有限公司生产5ml(0.1g×5支)、生产批号：1061607311

2 方法

2.1 受体牛的选择

对移植地养牛户饲养的牛只保定，掏出直肠内积粪，用0.1%的高锰酸钾(KMnO4)液清洗肛门和外阴，然后进行直肠检查，筛选出29头2～7岁、生长发育良好、空怀、发情周期正常、无生殖系统疾病、产犊3个月以上的凉山黄牛、蜀宣花牛杂交牛作为受体牛。其中凉山黄牛18头、蜀宣花牛杂交牛11头。

2.2 同期发情处理

2.2.1 7月2日埋植孕酮栓 对筛选的29头受体牛作埋植孕酮栓处理。将受体牛保定，操作人员穿好防护服和手套，在清水中清洗放栓枪，然后放入新洁尔灭消毒液中浸泡1min。将孕酮栓放入枪中并用液体石蜡涂抹在枪表面。再用75%酒精棉消毒外阴部。将放栓枪正面向上(开口向上)轻轻用力推入阴道前部，推送孕酮栓并缓慢旋转取出放栓枪。

2.2.2 7月11日注射PG 对4头掉栓受体牛不再进行后期试验处理。庆恒乡庆恒村掉栓1头、比尔乡补各洛呷村掉栓3头。对剩余的25头受体牛注射了PG，每头牛肌肉注射0.6mg。

2.2.3 7月14日撤栓 提起牛尾，外阴部拉住塑料线轻轻扯出孕酮栓。

2.2.4 7月15日下午观察发情并配种 如出现受体牛发情可用冻精输精一次。

2.2.5 7月16日配种 早上进行二次配种。

个别受体牛先出现发情可进行冷冻精液输精，间隔12小时两次输精，这样可提高胚胎移植的成活率。

2.3 移植

7月22日对同期发情处理的25头受体牛进行直肠检查，对黄体质量较好的11头受体牛进行胚胎移植。其中凉山黄牛7头、蜀宣花牛杂交牛4头。

2.3.1 直肠检查 对受体牛进行直肠检查，确定黄体发育情况。用直肠检查法依次检查子宫颈、左右两侧子宫角、卵巢的发育情况，对符合条件的受体牛同时要检查卵巢的黄体，根据黄体大小、发育成度、质地软硬、卵巢基础和有无排卵点分为A、B、C三级。A级为正常，卵巢基础好，黄体直径在1.5cm 以上，质地软硬适中，触摸感觉如猪肝，与卵巢衔接好，有排卵点；B级为黄体直径在1～1.5cm之间，质地稍软或稍硬，与卵巢连接痕迹隐性黄体与排卵点不明显，卵巢基础薄弱；C级为黄体过小，与卵巢连接痕迹明显，有小卵泡或卵巢基础过差。C级不能作为黄体移植，视为废弃，A、B级分别进行胚胎移植[1]。

2.3.2 胚胎移植 对黄体质量较好的11头受体牛进行胚胎移植。

方法：第一步：将胚胎装入输胚枪。将细管在36℃的温水中浴浸10S解冻胚胎，剪去细管封口端，装入输胚枪。第二步：将受体牛保定好，掏出直肠积粪，用0.1%高锰酸钾(KMnO4)溶液冲洗并用毛巾将牛外阴部擦拭干净，再用75%酒精棉消毒外阴部。第三步：移植前进行硬膜外腔麻醉。在受体牛尾根部1～2尾椎间用酒精棉进行擦拭消毒，针头呈45度斜向下刺入1～2尾椎间3CM左右，注入3mL2%盐酸利多卡因注射液，便于胚移进行。第四步：输胚时用左手扒开外阴, 右手持输胚枪插入阴道。通过直肠把握法将胚胎植入有黄体一侧的子宫角的大弯处(上1/3～1/2处)，在5min内完成移植操作。移植时要做到轻、稳、快，防止用力不当损伤子宫造成感染，尤其在穿过子宫颈时必须顺着子宫颈螺旋方向前进[2]。

受体牛移植后尽量不要驱赶和剧烈运动，也不要与当地公牛混牧，以免影响胚胎着床。

3 妊娠检查

2018年10月22日初步诊断受体牛妊娠5头。其中凉山黄牛4头、蜀宣花牛杂交牛1头。经检查确定妊娠的受体母牛应加强饲养管理，保证胎儿和母牛的营养需要。

4 试验结果

妊娠牛只已分别于2019年4月22日、2019年4月28日、2019年5月1日成功产犊公牛3头。庆恒乡庆恒村1头、特布洛乡特布洛村1头、比尔乡补各洛呷村产1头。牛只被毛黑色，精神状态良好。产犊受体牛均为凉山黄牛。初生重分别为25.0kg、24.5kg、25.5kg，均显著高于凉山黄牛初生重 13～16kg，其余2头出现流产，未能正常产犊。

5 结论

(1)胚胎移植11头，成功受孕5头，受孕率45%。因此，在凉山利用凉山黄牛作为胚胎移植受体牛开展胚胎移植技术是可行的。

(2)此次进行胚胎移植受体牛11头，其中凉山黄牛7头、蜀宣花牛杂交牛4头。试验成功的产犊受体牛均为凉山黄牛，蜀宣花牛杂交牛只有1头妊娠，但中途出现流产。凉山黄牛因长期以放牧为主，对凉山气候、草料及饲养方式等的适应性非常强，具有耐粗饲、耐寒、耐劳、抗病力强的特点。因此胚胎移植应选择更适应当地生态环境的本地牛为佳。

(3)筛选的空怀、健康无生殖疾病的受体牛29头，经同期发情处理，达到移植条件的受体牛11头，仅占同期发情处理牛的37.93%；胚胎移植受体牛11头，成功产犊3头，仅占27%。主要原因是受昭觉县受地理环境、养殖习惯的影响，当地肉牛饲养以放牧、单户散养为主。养殖户养殖技术水平较低，不能及时把握牛只发情状态；饲养方式落后，肉牛营养水平跟不上；单户散养的模式给技术人员的适时跟踪造成一定难度等原因所导致。