CD10在甲状腺肿瘤组织中的表达及检测临床意义*

杜 静，袁 勇，陆建荣，陈诗缘，任栋栋

1.西安医学院(西安710068);2.陕西省肿瘤医院(西安710061)

CD10是一种中性跨膜金属内肽酶，最早作为普通急性淋巴细胞白血病抗原(Common acute lymphoblastic leukemia antigen，CALLA)而被发现。最新研究发现CD10在多种肿瘤细胞(主要为上皮细胞来源)和肿瘤内的非肿瘤性间质细胞均有表达，并且在不管其正常器官是否表达CD10，其所发生的肿瘤细胞都有可能表达CD10[1-2]。CD10表达失调节可以影响细胞生长、分化调节、细胞间的信号传导及细胞的微环境[3-6]，例如通过抑癌基因、PTEN整合素介导的途径和粘着斑激酶(FAK)而影响肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移能力。因此，CD10可能作为肿瘤细胞增殖和侵袭的关键调节因子发挥作用。CD10的高表达与肿瘤的远处转移和局部广泛浸润倾向相关，导致患者临床预后较差[7-8]。Tomoda等[9]研究提示CD10仅表达于甲状腺滤泡癌(FTC)和甲状腺乳头状癌(PTC)的滤泡亚型，而不表达于良性滤泡性病变或经典型甲状腺乳头状癌(PTC)。后来有研究报道CD10在经典的甲状腺乳头状癌(PTC)中呈强阳性表达[10]，近期有报道指出CD10仅表达于PTC，暗示CD10可作为甲状腺良性病变与PTC鉴别的有用诊断标记[11]。但CD10在甲状腺肿瘤中的表达情况仍存在争议。为此为我们进行了CD10在各种甲状腺肿瘤及腺瘤性甲状腺肿中的表达情况的研究,现报道如下。

材料和方法

1 材 料 本研究收集了陕西省肿瘤医院2016-2018年保存在本院病理科的137例手术切除的甲状腺结节的石蜡标本，所有病例包含男98例,女39例;年龄24～75岁(平均年龄50岁)。包括9例腺瘤性甲状腺肿(AG)、13例甲状腺髓样癌(MTC)、16例甲状腺滤泡性腺瘤(FTA)、11例甲状腺滤泡癌(FTC)、48例甲状腺乳头状癌(PTC)和40例甲状腺未分化癌(ATC)。所有病理切片均由3位高年资病理医师经显微镜观察诊断，参照WHO关于内分泌器官肿瘤的分类标准(2016)(Classification of Tumours of Endocrine Organs)[12],诊断结果均一致。免疫组化所用抗CD10 抗体(鼠抗人单克隆抗体,克隆号为 56C5)和免疫组化超敏SP试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。

2 实验方法 采用免疫组织化学SP法,操作步骤简述如下：石蜡标本以4 μm切片, 脱蜡、水化，PBS冲洗后滴加3%的过氧化氢,室温孵育10 min;PBS冲洗,滴加非免疫动物血清，室温孵育10 min;微波抗原修复10 min;自然冷却至室温,PBS冲洗,滴加一抗(抗CD10抗体),4℃过夜;PBS冲洗,加生物素标记的二抗,室温下孵育10 min;PBS冲洗,滴加抗生物素抗体,室温下孵育10 min ;PBS冲洗,滴加新鲜配制的DAB显色,显微镜下观察显色结果,及时终止；自来水冲洗、苏木素复染,脱水、透明、封片。再对PTC进行EVG特染(大多数PTC具有广泛的纤维化)。以淋巴结免疫组化染色结果作为阳性对照，以PBS液代替一抗作为阴性对照。

3 免疫组化结果评判 CD10阳性反应物为棕黄色颗粒，定位于细胞浆和(或)细胞膜，免疫组化结果按阳性细胞百分比对每例病例进行半定量分析。阳性细胞0%，评分为0；阳性细胞1%～20%，定为弱阳(+)；阳性细胞21%～80%，定为中等强度阳性，评分为()；阳性细胞81%～100%定为强阳性，评分()。

4 统计学方法 实验数据由SPSS 22.0统计学软件处理。计数资料以[例(%)]表示，使用χ2检验，P<0.05认为差异有统计学意义。

结 果

1 甲状腺肿瘤上皮细胞中CD10表达情况 正常甲状腺组织中的滤泡上皮CD10表达缺失(图1)。AG、FTA、FTC、PTC的上皮成分中CD10表达为阴性，13例MTC均为阴性。具有嗜酸细胞变化和(或)鳞状化生的AG的滤泡上皮细胞呈灶状阳性,FTA、FTC和PTC也具有类似的CD10阳性的形态学特征。在一些鳞化的PTC上皮细胞和嗜酸变的FTC上皮细胞呈CD10阳性(图2)。而ATC的上皮细胞在细胞膜和细胞质中显示弥漫和强阳性(图3)。

A：甲状腺组织的HE染色,淋巴滤泡可见局灶性淋巴细胞浸润(HE，×10)

2 CD10在腺瘤性甲状腺肿和甲状腺肿瘤上皮成分中的免疫评分 见表1。 AG评分为0和(+)的频率分别为77.8%和22.2%；13例MTC评分均为0。 FTA评分0或含有少量CD10阳性肿瘤细胞(+)的频率分别为87.5%和12.5%。11例FTC，有8例(72.7%)肿瘤细胞CD10完全不表达为阴性，其余3例(27.3%)评分为()；48例PTC评分分别为0、(+)、()的频率分别为58.3%、37.5%和4.2%。值得注意的是，几乎所有的ATC(38/40，95.0%)评分为(),仅2例(2/40，5%)评分为()。ATC的染色强度明显强于其他甲状腺病变和其它种类的甲状腺肿瘤。ATC评分为()的频率显著高于PTC(P<0.01)。ATC与分化型甲状腺癌(PTC和FTC)相比，评分为()的比例显著增高(P<0.01)。

A、B：甲状腺乳头状癌及其鳞化部分的上皮部分呈CD10阳性(HE，×10);C、D：甲状腺滤泡癌及其嗜酸性上皮和致密胶体的部分上皮呈CD10阳性(SP，×10)

A、C：甲状腺未分化癌的免疫组化结果(HE，×10);B、D：分别为甲状腺未分化癌的细胞膜和细胞质中的弥漫强阳性(EVG，×10)

表1 CD10在甲状腺肿瘤上皮成分中的表达[例(%)]

3 甲状腺肿瘤间质成分中CD10表达情况 见表2。在评价CD10在甲状腺间质成分中的表达情况时，我们首先排除淋巴细胞和内皮细胞。正常甲状腺组织中没有CD10阳性的间质细胞，AG和MTC中也没有CD10阳性表达的间质细胞。同样，FTA和FTC的肿瘤区域的基质细胞和纤维包膜都没有CD10阳性表达。PTC中的成纤维细胞样细胞和纤维基质中CD10可呈阳性。在47例ATC中，有11例包含PTC成分，而仅在7例ATC的PTC基质中检测到CD10阳性。EVG染色与显示CD10阳性的纤维基质的定位及弹性纤维堆积位置一致。CD10在甲状腺肿瘤的间质成分中的免疫评分：AG、MTC、FTA、FTC中评分均为0。48例PTC标本有22例，评分0(45.8%);其余26例阳性PTC中，12例(25%)和14例(29.1%)评分分别为(+)和();大多数ATC(35/40，87.5%)基质细胞中没有检测到CD10的表达,有3例ATC(7.5%)评分为(+)，2例ATC(5%)评分为()。结合在甲状腺病变中PTC具有纤维化增生的特征、PTC的EVG染色及免疫评分结果，说明CD10在间质成分中的表达情况与弹力纤维增生程度呈正相关。

表2 甲状腺肿瘤间质中CD10的表达(排除淋巴细胞和内皮细胞)[例(%)]

讨 论

迄今为止，许多研究者已经广泛地研究了CD10在各种肿瘤中的许多方面，包括机制、表达情况及临床意义等[13-15]。有报告显示，不管CD10在正常细胞中是否表达，通常情况在高级别组织学类型的癌症中可呈高度表达[16-17]。本研究也得出类似结果，几乎所有的甲状腺未分化癌，都显示出CD10在上皮细胞中的弥漫性和强阳免疫反应。与甲状腺未分化癌对比，在腺瘤性甲状腺肿、滤泡性腺瘤、和具有嗜酸性变或鳞状分化的分化型甲状腺癌的部分上皮中免疫组化显示CD10局灶阳性。基于这些结果，CD10在分化型甲状腺癌的致瘤过程中可能并不发挥作用，因为腺瘤性甲状腺肿的上皮细胞也具有CD10阳性的类似的细胞形态学特征。由于细胞质的形态学变化通常是由细胞骨架的改变引起的，如微丝和线粒体。因此，CD10表达情况可能与细胞骨架的结构改变有关，而不是与肿瘤形成过程有关。

很多研究报道，各种器官和部位的肿瘤中的非肿瘤性基质细胞可表达CD10，如结直肠[18]、胃[19]、乳腺[20]等，并且均得出相似结论：基质细胞中CD10的高表达与患者预后差密切相关。本研究表明，基质细胞CD10的阳性表达仅限于PTC和ATC中的PTC成分。在临床上除了罕见的变异，PTC通常有较好的临床结局。因此，我们得出结论：在甲状腺癌患者中，基质细胞CD10的表达情况和预后无相关性，不具有临床意义。

Kondo等[21]人的报道称，弹性纤维密集聚集，称为间质弹力纤维增生，是PTC基质的一个特征。在本研究中，CD10的表达部位与间质性弹力纤维增生的定位几乎一致。CD10具有弹力酶活性可降解弹性纤维，这意味着CD10是弹性纤维积累的负性调节器。此外，CD10还可通过降解FGF-2而抑制成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)诱导的血管生成的功能[22]。综合起来，CD10在肿瘤的侵袭方面可能发挥正性调节作用。一直以来甲状腺肿瘤中ATC的鉴别诊断十分棘手，常常需要与肉瘤和其他器官的肉瘤样癌鉴别。很多研究报道CD10在软组织肉瘤中表达比例和强度都很高[23]，在子宫内膜间质肉瘤(ESS)的CD10表达频率也较高[24]，以及很多器官的肉瘤样癌中也大量表达。因此，病理学家在使用CD10阳性做出ATC的诊断应考虑到转移可能性。CD10通过阻断多种生物活性肽的作用间接调节肿瘤细胞增殖。除了胞外酶降解外，CD10还可直接影响细胞内信号转导，抑制PI3K/Akt通路和FAK信号通路。因此，CD10在ATC中的高表达说明其可能参与ATC细胞的增殖、存活和迁移。

综上所述，根据本研究的免疫组织化学检测结果CD10可作为鉴别甲状腺癌组织亚型的重要标记物。尤其是在排除转移后，CD10对于ATC的诊断具有极大意义。我们需进一步研究其作用机制。