RASSF10基因在肾细胞癌发生发展中的作用分析

左莉丽

肾细胞癌[1]是1种常见的泌尿系统恶性肿瘤，也被称为肾腺癌，人们常称为肾癌，引起原因是肾泌尿小管发生病变，发病率高、治疗难度大。肾细胞癌占肾脏各种类型恶性肿瘤比重达到90%，是最重要的肾脏恶性肿瘤[2-3]。国内外医护人员对肾细胞癌进行了大量的研究，但是仍不能全面准确的阐述肾细胞癌的发病原因[4]，不过，人们公认长期大量吸烟和过度肥胖是导致肾细胞癌的两大主要因素。近年来，随着医学技术的提高和影响学的发展，患者手术之后5年生存率有所提高，但是发生淋巴结转移等症状的患者手术之后5年生存率仍较低，所以用1种新的方法来诊断和治疗肾细胞癌显得尤为迫切[5]。随着科学技术的飞速发展，现在人们通过分子生物学对肾细胞癌进行研究，其中RASSF基因是在人体11号染色体上的一族基因，而RASSF10是RASSF家族中的一员，有1个卷曲螺旋结构域[6]。目前的研究发现卷曲螺旋结构域可能对恶性肿瘤的发生发展有着重要的作用。为更深入的分析了解RASSF10基因在肾细胞癌发生和发展过程中的作用，本次采取控制单一变量方法进行研究分析，为诊断治疗肾细胞癌提供新的依据，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取自2014年8月至2016年8月入本院的78例肾细胞癌患者为研究对象。男性49例，女性29例，年龄为30～75岁，60岁以上患者34例(43.6%)，60岁以下患者44例(56.4%)。肾细胞癌患者肿瘤直径平均为7.6 cm，直径2.5～13 cm。通过诊断及手术治疗，患者透明细胞癌61例，非透明细胞癌17例。Ⅰ期25例(32.1%)；Ⅱ期39例(50.0%)；Ⅲ期10例(12.8%)；Ⅳ期4例(5.1%)。分化程度：高分化12例(15.4%)、中分化36例(46.2%)、低分化30例(38.4%)。未发生淋巴结转移75例(96.1%)，发生淋巴结转移3例(3.9%)。

1.2 样本纳入排除标准

纳入标准：确诊为肾细胞癌患者；未患有影响本次研究的其他疾病；手术之前未进行其他治疗；患者家属及本人同意参与研究，并签署知情同意书。

排除标准：患者诊断、治疗等病历资料不全者；哺乳、妊娠等处于特殊时期的患者；无法参与研究的；中途退出研究的。

1.3 研究方法

1.3.1 标本采集 采集每位患者手术中离体20 min内的病变肾组织，癌旁组织采集自患者癌灶距离3 cm的组织，采集对应的正常组织作为对照，经过医学处理后以备使用。

1.3.2 检测方法 采用反转录聚合酶链反应检测患者肾细胞癌、癌旁组织和正常组织中RASSF10基因mRNA表达量，采用甲基特异性聚合酶链反应检测患者肾细胞癌、癌旁组织和正常组织中RASSF10基因的甲基化状态。

1.4 观察指标

及时观察患者心电图、肝肾等功能，监测患者生命体征等指标。观察肾细胞癌患者病变组织、癌旁组织和正常组织中RASSF10基因mRNA表达量及RASSF10基因的甲基化状态，同时记录RASSF10基因、甲基化状态与患者临床资料的关系。

1.5 统计方法

应用SPSS 19.0软件对采集到的数据资料作统计学分析。计量资料间均数的差异比较用t检验，计数资料采用χ2检验，多组间对比采用方差分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RASSF10在病变组织、癌旁组织和正常组织中mRNA表达水平

RASSF10 mRNA在癌变组织中表达水平低于癌旁组织和正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)，但癌旁组织和正常组织中的表达量差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 各组织中RASSF10 mRNA表达水平

注：①为a与b比较，t=4.583，P=0.002；②为b与c比较，t=3.094，P=0.001；③为a与c比较，t=1.519，P=0.368。

2.2 RASSF10在病变组织、癌旁组织和正常组织中甲基化结果比较

病变组织甲基化率高达70.5%，显著高于对应的癌旁组织甲基化率(35.9%)和正常组织甲基化率(24.4%)，差异有统计学意义(P<0.001)，见表2。

表2 各组织中RASSF10甲基化结果总体比较

注：①为a与b比较，χ2=3.049，P=0.001；②为b与c比较，χ2=4.138，P=0.002；③为a与c比较，χ2=1.781,P=0.308。

2.3 肾细胞癌组织中甲基化结果、RASSF10基因mRNA水平与患者临床病理参数的关系

肾细胞癌组织中甲基化结果、RASSF10基因mRNA水平与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理类型和分化程度无相关性(P>0.05)，与临床分期具有显著相关性(P<0.05)，见表3。

2.4 肾细胞癌组织中甲基化结果、RASSF10基因mRNA水平间的关系

肾细胞癌组织甲基化mRNA水平低于未甲基化mRNA水平，差异有统计学意义(P<0.05)，见表4。

表3 肾细胞癌组织中甲基化结果、RASSF10基因mRNA水平与其临床病理参数的关系

表4 肾细胞癌组织中甲基化结果与RASSF10基因mRNA水平的关系

3 讨论

近年来，随着环境恶化，环境污染严重，人们生活习惯的改变，饮食方式的变化，吸烟和肥胖现象越来越多，这两大因素正是引起人体各种疾病的主要元凶[7]。肾细胞癌就是由这两种因素引起的1种恶性肿瘤，1种泌尿系统常见的癌症。随着生物技术、基因学的不断发展，发现、诊断和治疗恶性肿瘤又多了1种行之有效的方法[8-9]。肾细胞癌发病原因多而且复杂，是多种因素共同长期造成的结果。早期发现困难，早期患者症状不明显，和正常人一样，很少出现癌症症状，因此，大多数患者偶然发现患病之后，一般病情已至中晚期，已错过最佳治疗阶段[10-12]。现在一般的检查手段是腹部B超，诊断的主要方法是肾CT[13]。肾是人体的特殊器官，通过常规的化疗和放疗效果不明显，手术是1种对肾细胞癌较为有效的治疗手段。而针对晚期患者，单单的手术治疗很难使患者恢复，需要新的治疗方法，这也是最近几年国内外医学工作者研究和探讨的重点方向[14-15]。RASSF10基因存在于人体的心脏、脑、胰腺和骨骼等组织和结构中，但是在肾细胞癌、食管癌和肝癌等恶性肿瘤发生了甲基化变化，在以上恶性肿瘤中低水平表达[16]。当RASSF10基因表达水平降低或者受到抑制，对恶性肿瘤细胞的抑制作用变得减弱，因此，恶性肿瘤细胞迅速分裂增殖，癌症症状加深，给患者身心带来严重的伤害，因此，加大对RASSF10基因在肾细胞癌发生发展过程中的作用研究显得尤为重要。

RASSF10 mRNA在患者癌变组织中表达水平0.63±0.05，低于癌旁组织0.71±0.04和正常组织的0.73±0.06，F值为149.37，差异有统计学意义(P<0.05)，但癌旁组织和正常组织中的表达量差异无统计学意义(P>0.05)。患者病变组织甲基化率高达70.5%，显著高于对应的癌旁组织甲基化率35.9%和正常组织甲基化率24.4%，χ2值为19.68，差异有统计学意义(P<0.001)。RASSF10在患者肾细胞癌组织中甲基化率高达70.5%，显著高于癌旁组织甲基化率35.9%和正常组织甲基化率24.4%，差异有统计学意义(P<0.05)，癌旁组织甲基化率稍高于正常组织甲基化率，差异无统计学意义(P>0.05)。患者肾细胞癌组织中甲基化结果、RASSF10基因mRNA水平与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理类型和分化程度无相关性，差异均无统计学意义(P>0.05)，与临床分期差异具有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ+Ⅱ期共有40例患者发生了甲基化，发生率为62.5%，Ⅲ+Ⅳ期虽然只有14例患者发生甲基化，但其发生率为100.0%，显著高于Ⅰ+Ⅱ期患者，说明RASSF10基因在晚期肾细胞癌患者中更容易发生甲基化现象。虽然本次研究中发生淋巴结转移患者3例，发生率为3.9%，但淋巴结转移是一个重要的影响恶性肿瘤发展的因素。患者肾细胞癌组织甲基化mRNA水平0.61±0.05，低于未甲基化mRNA水平0.67±0.03，差异有统计学意义(P<0.05)。

综上所述，RASSF10基因表达水平、甲基化状态与患者肿瘤分期明显相关，在一定程度上能反映患者RASSF10基因低表达水平与肾细胞癌的发生发展过程密切相关，同时为诊断和治疗肾细胞癌提供依据，同时，为广大医护人员积累了经验，可广泛推广。