苦参碱对阿尔茨海默病小鼠筑巢行为的效果探析

李娟 陈菲 姜成帅

【摘 要】目的：探究苦参碱对阿尔茨海默病小鼠筑巢行为的影响。方法：将ICR小鼠随机分为6组，正常组，模型组，苦参碱高、中、低剂量组和阳性药物组。除正常组小鼠外其余各组小鼠用5?g/?l的LPS溶液进行侧脑室注射，正常组小鼠注射等体积的生理盐水，造模24h后灌胃给药，苦参碱给药组高中低剂量分别为40，20，10mg/kg，阳性藥物多奈哌齐组给药剂量为5mg/kg，LPS注射后第25天进行筑巢实验。利用筑巢材料在小鼠饲养笼中进行个体筑巢实验。结果：与正常组比较，模型组小鼠的筑巢能力明显降低，巢穴松散，面积大，不牢固;与模型组比较，苦参碱高、中、低剂量组均可使小鼠的筑巢能力提高，随着剂量的增加筑巢的面积越来越小，巢穴紧凑且牢固。结论：小鼠侧脑室注射LPS成功地复制了AD小鼠模型，实验结果表明苦参碱能够明显提高AD小鼠的筑巢能力，可初步确定苦参碱对AD小鼠有一定的治疗作用。

【关键词】苦参碱;阿尔茨海默病;筑巢实验;效果影响

阿尔茨海默病（Alzheimers disease， AD）是常见的一种与年龄高度相关的神经退行性疾病，严重威胁老年人群的健康水平与生活质量。随着人口老龄化的加重，阿尔茨海默病的发生呈现上升发展趋势，因此受到了人们的重点关注。人们对治疗阿尔茨海默病的药物需求迫切，在科学研究中，如何方便直观的判断药物对治疗阿尔茨海默病是否有效尤为重要。筑巢行为实验研究方法简便易行，且过程几乎无创，可反映小鼠的社会行为和日常活动能力，为研究AD的动物行为学研究提供了一种较好的手段[1]。

苦参碱在抗炎、保肝、抗菌、抗肿瘤、调节机体免疫功能等方面都具有良好的药理活性[2-3]，基于脑内神经炎症在AD发病过程中扮演的重要作用以及苦参碱良好的抗炎活性，本研究通过小鼠筑巢实验探讨苦参碱对AD小鼠筑巢行为的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物

雄性ICR小鼠72只，体重18-22g，由宁夏医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（宁）2015-0001。小鼠饲养在ICV笼具中，自由摄食和饮水。实验方案经宁夏医科大学医学伦理审查委员会审查批准，编号为宁医大伦理第2014-124号。

1.2 实验分组及给药

对ICR小鼠适应性饲养10天后，进行随机分组，每组12只，随机分为6组：正常组，模型组，苦参碱高中低剂量组（即苦参碱40、20、10mg/kg）和阳性药盐酸多奈哌齐5mg/kg（Donepezil-5 mg/kg）组。用25?L无菌平头微量注射器对各组动物进行侧脑室注射，模型组、苦参碱高、中、低剂量组和阳性药物组注射LPS溶液（5?g/?l，3?l/只），正常组小鼠注射等体积的生理盐水，造模完成。造模24h后按照小鼠体重（0.2ml/10g）开始灌胃给药，阳性药物组的小鼠每天灌胃盐酸多奈哌齐溶液，苦参碱高中低剂量组灌胃给予相应剂量的苦参碱溶液，正常组和模型组小鼠每天灌胃给予等体积的生理盐水。LPS注射后第25天进行筑巢实验。

1.3 筑巢实验方法及评价标准

实验前将单只小鼠分笼饲养，使其适应环境至少24h。在小鼠新的饲养笼（25×15×14cm3）中放入约2cm厚的新垫料，将6块正方形软纸片（4cm×4cm）均匀平铺于垫料上，作为小鼠筑巢材料。将小鼠放入笼内，饮食照常供应。筑巢实验时间为当天19：00至次日7：00。

2 结果

如图1所示，与正常组相比，模型组小鼠巢穴松散，面积大，不牢固，无浅坑形成，小鼠的筑巢能力明显降低;与模型组相比，苦参碱和多奈哌齐组巢穴紧凑面积小，并且牢固，其中给药组随着苦参碱剂量的增加筑巢的面积越来越小，巢穴紧凑且牢固，有可见的碎或整的纸片围以垫料的浅坑。实验结果表明侧脑室注射LPS能够损伤AD小鼠的筑巢能力，不同剂量的苦参碱对AD小鼠模型均有一定的治疗作用，能使AD小鼠的筑巢能力提高。

3 讨论

本实验采用侧脑室注射LPS建立AD小鼠模型，造成小鼠筑巢能力下降，给予苦参碱治疗能够提高AD小鼠模型的筑巢能力。

随着炎性反应在AD的发病机制中的重要作用被人们日益重视，研究资料表明，AD患者脑内持续存在着慢性炎症反应，可能是其他病理特征形成和发展的诱发因素[4-5]，随着新药的进一步研究，中药通过多途径、多环节、多靶点对疾病起着综合施治、整体调整的作用，具有使用历史悠久、疗效确切、毒副作用相对较小的优点，中药提取物不但可以为临床用药提供有力的实验依据，而且对于筛选和研制安全有效的抗AD新药具有十分重要的意义。本次研究显示苦参碱对AD小鼠的筑巢能力有一定提高，可初步确定苦参碱对AD小鼠模型有一定的治疗作用[6-7]。

此外小鼠筑巢行为的生物学基础复杂，可能受到许多脑区和神经递质活动的控制[5]，目前文献涉及AD小鼠模型筑巢行为的研究较少，其具体的作用机制还有待后续进一步深入研究。

参考文献

[1]闵喆，王淑楠，吴军，黄晓江，方瑜，邱占东，张苏明.Tg-SwDI小鼠的筑巢行为研究[J].神经损伤与功能重建，2014，9（01）：1-5.

[2]张丽华，陈邦恩，潘明佳.苦参碱药理作用研究进展[J].中草药，2009，40（6）：1000-1003.

[3]陈晓峡，向小庆，叶红.苦参碱及氧化苦参碱抗肿瘤作用的研究进展[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（11）：361-364.

[4]刘健翔，蒋洁，魏峥曦.超声波碱水法提取贯叶连翘总黄酮[J].广东化工，2010，37（12）：15-16.

[5]Kaya I， Brinet D， Michno W， et al. Delineating Amyloid Plaque Associated Neuronal Sphingolipids in Transgenic Alzheimer's Disease Mice （tgArcSwe） Using MALDI Imaging Mass Spectrometry[J]. Acs Chemical Neuroscience， 2017，8（2）：347-355.

[6]王淑楠.阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的筑巢行为研究[D].华中科技大学，2013.

[7]Feng A， Liu N， Meihua P， et al. Effect of isoflurane anesthesia on hippocampus neuroapoptosis in zinc-deficient APP/PS1 transgenic mice of Alzheimer's disease models[J]. Journal of Jilin University， 2018，44（1）：24-29.