地蜂子免疫作用的药理研究

陆丽 曹红九

地蜂子为蔷薇科委陵菜属植物三叶委陵菜及其变种中华三叶委陵菜的干燥根茎，性状根茎呈纺锤形、圆柱形或哑铃形，微弯曲，表面灰褐色或黄褐色，粗糙，有皱纹和突起的根痕及须根，顶端有叶柄残基，被柔毛。质坚硬，不易折断，断面颗粒状，深棕色或黑褐色，中央色探，在放大镜下可见白色细小结晶。因外形酷似蜜蜂，故名地蜂子[1]，其味甘、涩， 性凉， 具有清热、解毒、止痛、止血等功效， 主治腰痛、胃痛、痢疾、肠炎、牙痛、毒蛇咬伤、烧烫伤、跌打损伤等[2]，疗效确切。主要分布于湖北、江西、安徽、江苏等地，资源极为丰富，有很大的药用开发应用价值[3]，有关地蜂子免疫作用的实验研究文献报道稀少， 笔者对湖北恩施山丛林中的地蜂子进行了免疫作用的实验研究，现将研究结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 清洁级昆明种小鼠40只，体质量（20.0±2.2）g，雌雄兼用，由华中科技大学同济医学院提供。

1.1.2 地蜂子提取液的制备 购自恩施药材公司地蜂子。水提煎液：用水煎煮3次，过滤浓缩成1 g/ml的溶液即得水提煎液；醇提液：取地蜂子粉碎后用10倍量80%乙醇浸漉回流提取3次，经压缩除去乙醇制成1 g/ml的醇提取液。

1.1.3 试剂 醋酸泼尼松（Prednisone Acetate，三九同达药业有限公司产品）

1.1.4 仪器 TG328A型电子分析天平（上海上平仪器公司生产）；岛津UV-754型紫外可见分光光度计；RE-52型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂产品）；F6/10 超细匀浆机（上海流体机械制造有限公司产品）。

1.2 实验方法

1.2.1 小鼠碳粒廓清实验[4-5]清洁级昆明小鼠40只（雌雄各半），小鼠用药等效剂量按成人临床日用量与体质量折算系数比，随机分为水提液低剂组（25 g/kg）、醇提液高剂组（50 g/kg），生理盐水空白对照组，醋酸泼尼松阳性药物组（20 mg/kg），每组各10只，共四组。灌胃给药，各组实验动物均按0.15 ml/10 g体质量每日灌胃1次，连续给药7 d。末次给药1 h后，给每只小鼠尾静脉注射一得阁墨汁0.5 ml/100 g，并于1 min和5 min分别从眼眶静脉丛中用肝素湿润过的尖嘴吸管吸取血液20 μl，加入2 ml的0.1%Na2CO3溶液中，采用754型紫外分光光度计在650 nm波长处比色测定t1、t5的吸光度值，校正零点后计算廓清指数K值。然后采用颈椎脱臼法解剖取出其脾、肝和胸腺，用电子天平精密秤称其湿重计算各组小鼠的吞噬指数、胸腺指数、脾指数以及廓清指数。公式：

（1）吞噬指数α=体质量/（肝重+脾重+胸腺重）×k1/3。

（2）廓清指数 K=（logOD1-logOD5）/（t5-t1）。

（3）胸腺（脾）指数=胸腺（脾）重（mg）/体质量（g）。

1.2.2 DNCB致小鼠迟发型超敏反应实验[6]本实验清洁级昆明种小鼠40只（雌雄各半），分组方法同小鼠碳粒廓清实验。同日在各鼠颈背部用7%DNCB的丙酮溶液20 μl致敏，以同一溶液50 μl涂于右耳廓两面进行攻击，左耳廓留作对照，连续给药10天后。24 h后，剪下两耳，用直径6 mm打孔器取耳片称重， 以其差值作为迟发型超敏反应的强度，计算抑制率：抑制率=（1-给药组两耳重量差/空白组两耳重量差）×100%。

1.3 统计学方法

采用SPSS 10.0 统计分析软件进行数据分析，计量资料以（均数±标准差）表示，两个样本均数比较采用t检验，多于两组样本均数的比较，采用方差分析（ANOVA）；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 地蜂子对小鼠免疫器官的影响

地蜂子水提液低剂组、醇提液高剂组脾脏和胸腺的重量均高于空白对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 地蜂子对小鼠免疫器官的影响（±s，mg/g）

表1 地蜂子对小鼠免疫器官的影响（±s，mg/g）

注：与空白对照组比较，※P＜0.05

空白对照组 10 5.772±0.885 3.006±0.747水提液低剂组 10 6.055±1.271※ 4.242±0.494※醇提液高剂组 10 6.968±1.773※ 4.240±0.879※醋酸泼尼松组 10 6.646±1.856※ 4.432±0.677※F值 - 3.581 2.764 P值 - ＜0.05 ＜0.05

2.2 地蜂子对小鼠非特异性免疫功能的影响

地蜂子对小鼠非特异性免疫功能的影响，小鼠碳粒廓清实验，结果见表2。地蜂子水提液低剂组、醇提液高剂组的小鼠的碳粒廓清指数K和吞噬指数α高于空白对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

2.3 DNCB致小鼠迟发型超敏反应实验结果见表3

地蜂子水提液、醇提液均能明显抑制DNCB引起的小鼠迟发型超敏反应，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

3 讨论

表2 地蜂子对小鼠巨噬细胞吞噬功能（±s）

表2 地蜂子对小鼠巨噬细胞吞噬功能（±s）

注：与空白对照组比较，※P＜0.05

空白对照组 10 0.035 5±0.006 2 5.386 6±0.576 5水提液低剂组 10 0.039 4±0.008 1※ 5.745 2±0.713 3※醇提液高剂组 10 0.045 3±0.007 5※ 6.424 3±0.589 4※醋酸泼尼松组 10 0.038 2±0.005 3 5.593 8±0.683 5※F值 - 2.228 3.169 P值 - ＜0.05 ＜0.05

脾脏是机体最大的免疫器官，占全身淋巴组织总量的25%，含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞，是机体细胞免疫和体液免疫的中心[7]。脾脏有三大功能[8]：（1）人体的“血库”；（2）血液“过滤器”；（3）制造免疫球蛋白、补体等免疫物质，发挥免疫作用。胸腺位于胸腔上纵隔前部。为机体的重要淋巴器官，与免疫紧密相关，是T细胞分化、发育、成熟的场所。可以分泌胸腺激素及激素类物质，其主要功能[9]：产生T淋巴细胞、产生和分泌胸腺素和激素类物质。

表3 各组小鼠迟发型超敏反应比较（±s）

表3 各组小鼠迟发型超敏反应比较（±s）

注：与空白对照组比较，※P＜0.05

空白对照组 10 16.26±5.11 -水提液低剂组 10 10.75±3.94※ 33.6±10.45醇提液高剂组 10 10.43±3.93※ 35.5±11.44醋酸泼尼松组 10 11.27±3.72※ 29.5±12.43 F值 4.144 22.93 P值 ＜0.05 ＜0.05

人之生命虽源于肾精， 但脾脏、胸腺作为“后天之本”， 是人体主要的免疫系统[10]，内伤脾胃，必暗伤寿数[11]。若脾脏、胸腺功能下降，则血气不足， 免疫力下降[12]，若再外感六淫之邪，病变乃生。有研究表明地蜂子分离中得到的化合物黄酮、三萜及甾体类化合物中具有抗炎、镇痛、抗病毒、抗氧化等功效[1]，其抗炎镇痛作用尤为明显，对急性炎症和亚急性炎症均有明显地抑制作用[2]。本实验结果中地蜂子水提液、醇提液脾脏和胸腺的重量均高于空白对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），表明地蜂子可增加免疫器官的重量。蜂子水提液、醇提液可提高小鼠碳粒廓清K值及α值，小鼠的碳粒廓清指数K和吞噬指数α均高于空白对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），表明地蜂子具有增强单核巨噬细胞吞噬功能的作用，可增强小鼠的非特异性免疫功能。地蜂子水提液、醇提液均能明显抑制DNCB引起的小鼠迟发型超敏反应，差异具有统计学意义（P＜0.05），这可能与T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞被抑制有关。

综上所述，地蜂子能显著增强单核巨噬细胞的吞噬功能，能明显抑制迟发型超敏反应，从而增强其免疫功能的作用，有效促进机体的免疫功能，增强体质，预防疾病发生。地蜂子资源极为丰富，药用广泛，价值有待进一步深入研究与开发。