MTSS1在宫颈鳞癌细胞中的表达及临床意义

王冠 王莉莉 邢焱玲 王爽 段丽 张慧晶 高洪菊

宫颈癌是妇科中十分常见的恶性肿瘤，发病率较高，近年来患病人数也呈增长趋势，且逐渐趋于年轻化发展。宫颈癌中大多为宫颈鳞癌（squamouscarcinoma cervix，SCC），约占宫颈癌的80%～95%，往往由宫颈鳞状上皮内瘤变（CIN）逐渐发展为浸润性癌，死亡率较高[1-3]。尽管早期发现并进行根治性手术具有较好的治疗效果，但仍会发生转移或复发，且由于早期没有十分明显的临床症状，因此加强了解宫颈癌发展的分子机制，对于早期诊治宫颈癌尤为重要[4]。转移抑制因子1（metastasis suppressor 1，MTSS1）是近年来发现的一种肿瘤转移抑制基因，国内外众多学者研究表明，其与多种肿瘤转移与疾病进展相关，在抑制肿瘤转移中起到了十分重要的作用，然而MTSS1在宫颈癌中的表达情况鲜有研究[5-7]。现探讨分析MTSS1在宫颈鳞癌细胞中的表达及临床意义，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月—2018年10月在我院接受治疗的60例宫颈鳞癌患者作为研究对象，均留取手术切除的蜡块组织标本作为观察组，选择同期宫颈正常组织标本60例作为对照组，均取自子宫肌瘤或子宫肌腺症行全子宫切除术的石蜡包埋标本，于液氮中保存。观察组年龄为26～72岁，平均年龄为（47.86±8.91）岁；根据组织学分级，高分化16例、中分化27例、低分化17例；有淋巴转移21例、无淋巴转移39例。对照组年龄为28～70岁，平均年龄为（46.57±9.04）岁；根据组织学分级，高分化17例、中分化28例、低分化15例；有淋巴转移22例、无淋巴转移38例。比较两组患者的一般资料，差异无统计学意义（P＞0.05），可以进行下一步分析比较。

纳入标准：本研究已获得医院伦理委员会批准。所有患者均符合宫颈鳞癌诊断标准，且经病理学检查确诊；病例资料完整；排除合并或继发有其他癌症的患者；所有患者术前均未接受过放疗、化疗或内分泌等其他辅助治疗；所有患者与患者家属均对本次研究知情，并签署知情同意书。

1.2 Real-time PCR法检测MTSS1表达

用Trizol（美国Sigma公司）提取总RNA，取1 µL提取的总RNA，加入3 mL RNase-free水稀释，分别于260 nm、280 nm、320 nm波长处测定吸光度值。若OD260/OD280比值为1.8～2.2，则表明RNA纯度较高。RNA浓度（µg/µL）=（OD260-OD320）×稀释倍数×0.04。使用TransStart First-Strand cDNA Synthesis SuperMix试剂盒（全式金生物科技有限公司）将RNA反转录合成cDNA，在Applied Biosystems仪上进行扩增与检测。每个样品设三个平行复孔，以β-Actin为内参基因，用2-ΔΔct的方法求得MTSS1基因的相对含量。

1.3 免疫组织化学检测MTSS1蛋白表达

行常规脱蜡、复水后，按照免疫组织化学试剂盒（北京中杉金桥试剂公司）说明书步骤进行SP法，抗原修复后封闭1 h，一抗过夜。二抗37℃ 1 h，DAB显色5 min，苏木素复染，乙醇梯度脱水，晾干，树胶封片。显微镜下观察阳性MTSS1蛋白表达量。每张免疫组化切片中随机选择五张不同的高倍镜视野，用计算机图象分析软件（IMAGE-PRO PLUS 6.0）进行定量分析，阳性染色细胞质或细胞膜出现黄色、棕黄色或棕褐色颗粒，以阳性率＜25%为阴性，≥25%为阳性。

1.4 统计学方法

应用SPSS 20.0统计软件，计数资料比较采用χ2检验，计量资料以（±s）表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组间MTSS1 mRNA表达水平比较

观察组MTSS1 mRNA表达的相对定量值（relative quantification，RQ）为（0.74±0.06），对照组为（0.25±0.04），观察组MTSS1的表达水平高于对照组， 且差异具有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 两组间MTSS1阳性表达率比较

观察组MTSS1阳性表达率为61.67%（37/60），对照组为18.33%（11/60），观察组MTSS1阳性表达率高于对照组，且差异具有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，据统计，全球每年因宫颈癌导致的死亡人数约为2.8×105人，多发于40～50岁妇女，严重威胁着女性的身心健康[8]。宫颈癌的分类中大多为宫颈鳞癌，转移是造成宫颈鳞癌患者难以根治甚至死亡的重要因素，因此研究宫颈鳞癌发生发展以及转移的分子机制尤为重要[9]。MTSS被定义为转移抑制因子，位于人染色体8q24.1，可通过多种途径参与肿瘤的发生发展过程，与恶性肿瘤的浸润与转移过程密切相关，最初由Lee YG等[10]在研究膀胱肿瘤转移机制中发现。近年来，较多研究发现MTSS1基因在前列腺癌、食管鳞癌、胃癌、肾癌、结肠癌、卵巢癌、肝细胞癌等肿瘤中均呈现高表达，而在正常组织中较少表达[11]。Zhang J等[12]研究发现，MTSS1基因在宫颈癌中的表达较正常高，且随着病情的发展，MTSS1基因也呈升高趋势，提示我们MTSS1基因在宫颈癌的发生发展起到了重要作用，可能成为诊治宫颈疾病的靶点。为进一步研究MTSS1在宫颈鳞癌中的作用，现研究采用Real-time PCR法检测宫颈鳞癌组织与正常宫颈组织中的MTSS1 mRNA表达水平，结果显示，MTSS1在观察组中的表达水平高于对照组（P＜0.05）。采用免疫组织化学比较两组MTSS1阳性蛋白表达，结果表明，宫颈癌组织中的MTSS1阳性表达率高于正常宫颈组织（P＜0.05）。综上所述，MTSS1基因可能在宫颈鳞癌的发生发展中发挥重要作用，可能为宫颈鳞癌的诊治提供理论依据。