香酸类柑橘种质耐寒力比较研究

罗君琴 王 平 柯甫志 聂振朋 徐建国

（浙江省柑橘研究所 台州318026）

目前，在我国种植发展的香酸类柑橘种质主要包括柠檬类和香橙类柑橘。柠檬类柑橘品种耐寒适应范围相对较窄，台州属于柑橘生产北缘适宜栽培地区，种植柠檬存在冻害风险。香酸类柑橘新种质创制研究中，开展香酸类柑橘育种亲本种质的电导率检测及耐寒力相关性考察评价有助于杂种优势育种中目标亲本的早期筛选，为新种质创制节约时间和空间，试验研究意义较大[1]。

1 材料与方法

1.1 供试材料

本研究样品采集自浙江省柑橘研究所种质资源圃收集保存的小莱檬（XLM）、柠檬（01-35）、巴甘檬（BGM）、兴津66（XJ66）、尤力克柠檬（YLK）、香橙（XC）、云柠（YN）、北京柠檬（BJ）、德岛酸橙（DD）、费姆莱特（FMNL）、卡波苏（KBS）和枨（Z）共12份香酸类柑橘种质（下文均以大写字母表示种质名称）。

1.2 试验方法

分别于2016年1月和2月期间，采集长势较一致的目标柑橘种质近稍顶端第3～4节位叶片约20张，带回实验室自来水冲洗干净，再用去离子水冲洗2遍，滤纸吸干，分别用6mm 规格的打孔器避开叶片中脉，切取叶片小圆片混合待用。

试验1：2016年1月，于种质资源圃分别采集XLM、01-35、BGM、XJ66、YLK、XC、YN和BJ等12份香酸类柑橘种质近稍顶端叶片进行相对电导率比较试验，试验2次。每次试验，分别称取各种质叶片小圆片1±0.002g，装入烘干的洁净锥形瓶，分别加入30ml无离子水，包上耐高温组培瓶封口纸，于震荡器中摇动6h 后取出测各份种质叶片浸出液电导率1；检测完毕后各处理置于准备好的沸水浴中加热15min,再次测各处理浸出液电导率2，然后利用公式：相对电导率=电导率1/电导率2×100%，计算分析试验检测结果。每次试验各种质处理重复2次。

试验2：2016年2月中旬分别采集01-35、YLK、XC、BJ 四份种质近稍顶端叶片开展不同低温条件下相对电导率低温半致死温度LT50拟合试验[2～4]。试验时将各种质叶片小圆片混合分成6份，每份称取1±0.002g样品，分别装入烘干的洁净锥形瓶，四份种质重复2次，分别放置于智能低温培养箱设定0℃、-2℃、-4℃、-6℃、-8℃、-10℃模拟低温条件处理6h,再分别加无离子水30ml震荡均匀后用雷磁电导率仪测各种质各低温处理叶片相对电导率（相对电导率=电导率（室温）/电导率（沸水）×100%）。

1.3 数据分析

测定数据结合利用Logistic方程、Excel2007趋势线回归分析，拟合获取各被测香酸类种质试验植株的低温半致死温度LT50（LT50拟合计算公式=-Lna/b）。

2 结果与分析

2.112 份香酸类柑橘种质冬季叶片相对电导率比较

试验1中的12份香酸类柑橘种质叶片相对电导率结果如图1所示，结果以电导率从大到小排列，被检测的12份香酸类柑橘种质耐寒性强弱顺序依次为：DD、Z＞FMNL、YN、XC＞BJ、YLK、XJ、KBS＞BGM、01-35＞XLM，各种质之间达到显著差异（p＜0.05）。其中XLM 相对电导率检测值最高（93.63%），显著高于其它11个品种，耐寒性最弱；Z和DD 的相对电导率最低，与其它品种也表现显著差异，耐寒力最高。

2.24 个香酸类种质不同低温条件下相对电导率低温半致死温度LT50拟合试验

香橙、01-35柠檬、YLK柠檬及BJ柠檬四份种质不同低温处理条件下的叶片相对电导率检测平均值统计分析结果分别如表1、表2所示，结合Excel 趋势线回归及Logistic方程数据处理，拟合分析各种质低温半致死温度LT50理论值，结果分别如图1至图4所示。

表1结合图2、图3可拟合分析获得01-35柠檬、香橙XC 的半致死温度，预估值分别为-5.09℃和-9.28℃；同理，表2结合图4、图5可拟合分析获香YLK柠檬、BJ柠檬的半致死温度，预估值分别为-6.63℃和-8.04℃；四份香酸类柑橘种质的理论耐寒能力强弱表现为XC＞BJ＞YLK＞01-35。此结果与2016年春，浙江省柑橘冻害发生后田间种质植株的耐寒表现力调查结果基本一致。

表1 香橙、01-35柠檬不同低温条件下相对电导率低温半致死温度LT50拟合

表2 YLK、BJ 柠檬不同低温条件下相对电导率低温半致死温度LT50拟合

图201 -35柠檬利用logistic 方程拟合低温半致死温度LT50线性回归散点图

图3 香橙XC利用logistic 方程拟合低温半致死温度LT50线性回归散点图

图4 YLK柠檬利用logistic 方程拟合低温半致死温度LT50线性回归散点图

图5 BJ柠檬利用logistic 方程拟合低温半致死温度LT50线性回归散点图

3 小结

当低温发生时，植物细胞膜透性增大，电解质大量外渗，相对电导率数据可初步直观地反映出植物细胞膜的受伤害程度及其耐寒能力强弱。本试验研究，初步明确十二份香酸类柑橘种质耐寒性强弱顺序依次为:DD、Z＞FMNL、YN、XC＞BJ、YLK、XJ＞BGM、01-35＞XLM。

同时，通过低温人工模拟冻害逆境进行香酸类柑橘种质叶片相对电导率检测，结合logistic方程、excel 趋势线回归数据分析，利用目标种质叶片电解质渗出率随低温变化获得温度曲线拐点的方法，拟合求取不同目标种质的低温半致死温度LT50（Semi-lethal temperature）（把低温曲线拐点作为低温半致死温度预估值）理论值，初步实现了香酸类柑橘种质抗寒能力的数量表达，为香酸类种质资源抗寒特性的深入了解及今后的胚抢救育种材料后代耐寒性能的早期筛选提供了一条有效的途径。