膀胱癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表达变化及其与临床病理特征的关系

何雪峰，平季根，邱峰，黄琛，陆勇

(苏州大学附属第一医院，江苏苏州215000)

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，占我国泌尿生殖系肿瘤发病率的第1位[1]。大多数患者最初表现为血尿，而且是无痛性、间歇性、肉眼全程血尿，有时也可为镜下血尿[2]。目前，膀胱癌的发病机制尚不清楚，其分化程度越低，预后往往较差。膀胱癌治疗方式主要有包括手术治疗、化疗、药物治疗等，但复发转移仍是患者主要的死亡原因之一。窖蛋白1(CAV-1)是构成细胞膜表面小窝的主要蛋白，与肿瘤的发生发展有关。性别决定区Y框蛋白2(SOX-2)是多潜能性干细胞标志物，在肿瘤的复发转移中发挥重要作用[3]。基质金属蛋白酶2(MMP-2)属于Ⅳ胶原蛋白酶，参与肿瘤的转移。本研究观察了膀胱癌组织和癌旁组织CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白的表达情况，并分析其与临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年2月～2017年8月在苏州大学第一附属医院行手术治疗的膀胱癌患者80例，术前均未行放疗、化疗及其他抗肿瘤治疗。术中留取癌组织及癌旁正常组织，术后均经病理检查确诊为膀胱尿路上皮癌。患者中男55例、女25例，年龄42～65岁；组织分化程度高分化52例，中、低分化28例；浸润深度T1～T238例，T3～T442例，TNM分期Ⅰ～Ⅱ期50例，Ⅲ～Ⅳ期30例；发生淋巴结转移30例，无淋巴结转移50例。本研究经医院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 膀胱癌组织CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表达检测 采用免疫组化染色法。将膀胱癌组织和癌旁组织制成病理切片，二甲苯脱蜡；梯度乙醇脱水，H2O2孵育；PBS冲洗3次，在枸橼酸缓冲液中用煮沸，冷却至室温；PBS冲洗3次，滴加一抗后放置于4 ℃冰箱过夜；PBS冲洗3次，加入生物素标记二抗孵育0.5 h；PBS冲洗3次，滴加标记的链霉素卵白素工作液孵育0.5 h；PBS冲洗3次，用DAB/H2O2反应染色；染色完全后，用自来水冲洗，苏木素复染；常规脱水，透明，干燥，封片。在显微镜下选取5个高倍视野，每个视野计数100个细胞；阳性细胞为细胞膜或细胞质染成棕黄或棕褐色，以染色强度和阳性细胞百分数判断结果。染色强度以无染色、淡黄色、黄色、棕黄色分别计0、1、2、3分，阳性细胞百分数0、﹤25%、25%～50%、﹥50%分别计0、1、2、3分，两项得分相加≥2分即判为阳性表达。

1.3 统计学方法 采用SPSS11.5统计软件。计数资料以例表示，膀胱癌和癌旁组织、不同特征膀胱癌患者癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2表达情况的比较采用χ2检验。采用Logistic回归分析法分析膀胱癌患者CAV-1、SOX-2、MMP-2表达的影响因素。P﹤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 膀胱癌及癌旁组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表达比较 膀胱癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2阳性表达率分别为77.50%(62/80)、81.25%(65/80)、85.00%(68/80)，癌旁组织中分别为13.75%(11/80)、12.50%(10/80)、10.00%(8/80)，膀胱癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表达均高于癌旁组织(χ2分别为65.527、75.922、90.226，P均﹤0.01)。

2.2 不同临床病理特征膀胱癌患者膀胱癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表达比较 中低分化、有淋巴结转移、浸润深度为T3～T4、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的膀胱癌患者癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白阳性表达率高于高分化、无淋巴结转移、浸润深度为T1～T2、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期者(P均﹤0.05)，而不同年龄、性别患者癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白阳性表达率差异无统计学意义。见表1。

2.3 膀胱癌患者CAV-1、SOX-2、MMP-2表达的影响因素 将单因素分析有意义的分化程度、淋巴结转移、浸润深度和TNM分期作为自变量，将CAV-1、SOX-2、MMP-2阳性表达作为因变量，进行多因素Logistic回归分析。结果分化程度和淋巴结转移进入回归方程，其OR分别为5.034、4.359、4.446、4.987、5.021、4.987。

3 讨论

膀胱癌可发生于任何年龄，甚至发生于儿童。其发病率随年龄增长而增加，高发年龄为50～70岁。该病具有一定的性别差异，男性发病率是女性的3～4倍[4]。膀胱癌的病理类型有膀胱尿路上皮癌、膀胱鳞状细胞癌、膀胱腺癌，但通常所说的膀胱癌就是指膀胱尿路上皮癌[5]。膀胱癌的病因复杂，既有内在遗传因素，又有外在环境因素，较明确的两大致病危险因素是吸烟和职业接触芳香胺类化学物质[6]。对于非肌层浸润性尿路上皮癌多采用经尿道膀胱肿瘤电切术，而肌层浸润性尿路上皮癌和膀胱鳞癌、腺癌多采用全膀胱切除术治疗，转移性膀胱癌则以化疗为主，因此病理诊断在治疗方式的选择中至关重要[7]。

CAV-1蛋白是一种细胞表面的穴样内陷中的主要膜内在蛋白，在保持穴样内陷完整性、小胞运输、信号传导中起一定的作用；其是细胞膜上的一种整合膜蛋白，是形成微囊的主要成分，在人类肿瘤中可能会产生突变；当体内出现肿瘤时，其表达显著增加[8～10]。MMP-2蛋白具有破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障的作用，在肿瘤侵袭转移中起关键性作用，其含量增加会加快肿瘤浸润转移。MMP-2蛋白及CAV-1蛋白在膀胱癌细胞膜上具有相同位点，可导致内源性CAV-1蛋白促进MMP-2蛋白分泌，以降低细胞外基质[11]。在正常情况下MMP-2表达量很低，但在肿瘤组织中阳性表达量增加[12]。SOX-2属于SOX基因家族成员，是一个重要的干细胞标志基因，可调控干细胞基因的表达。其位于干细胞信号调控网络的中心，对干细胞自我更新、多向分化等均可发挥重要作用。流行病学研究发现，SOX-2表达增加与膀胱癌的发生及不良预后相关[13～15]。

表1 不同临床病理特征膀胱癌患者膀胱癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表达比较(例)

本研究结果显示，膀胱癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织。这可能与肿瘤组织中CAV-1蛋白促进MMP-2蛋白分泌，破坏组织屏障，加剧病理进程有关。另外，中低分化、有淋巴结转移、浸润深度为T3～T4、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的膀胱癌患者癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白阳性表达率高于高分化、无淋巴结转移、浸润深度为T1～T2、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期者，而不同年龄、性别患者癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白阳性表达率差异无统计学意义。这表明CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白与病理分期可能存在一定联系，可以辅助临床进行分期诊断。Logistic回归分析显示，分化程度和淋巴结转移是影响膀胱癌患者CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表达的因素。这进一步说明分化程度和淋巴结转移与CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白具有密切关系，可将其阳性表达量作为判断肿瘤程度的一类指标，具有一定的精确性。由此可见，膀胱癌组织CAV-1、SOX-2、MMP蛋白表达水平增高，且与患者的分化程度和淋巴结转移情况密切相关，可作为膀胱癌分期诊断的指标。