外周血T淋巴细胞亚群和维生素D水平与婴幼儿反复喘息及哮喘预测指数的关系研究

田军，高志刚，沈佩芳，俞涟芳，潘开宇，许凌帆

（杭州市萧山区第一人民医院（杭州师范大学附属萧山第一医院），浙江 杭州 311200）

婴幼儿反复性咳喘常见于5岁以下儿童，是较为常见的呼吸系统疾病，如果治疗不及时，容易对婴幼儿的身心健康以及生长发育造成严重影响，同时，给社会和家庭带来严重的经济和精神负担[1]。流行病学统计发现[2]，目前，儿童哮喘发病率呈现惊人的增长幅度，50%的儿童哮喘在婴幼儿期发作，有研究报道指出[3]，3岁以下婴幼儿的急性哮喘得到有效控制，可显著降低成年哮喘的发病情况。儿童持续性哮喘疾病的发作主要是由于大量炎症因子以及巨噬细胞的持续作用，引起气道高反应性，由于此病具有较强非特异性，所以，经常造成患儿的抗治疗性，最终导致持续性咳喘发生。哮喘的发病与患者的细胞免疫状态密切相关[4]，血液25羟基维生素D3、免疫球蛋白以及外周血T淋巴细胞亚群与婴幼儿反复性咳喘有明显关系，咳喘预测指数是临床中用来有效预测3岁以内儿童持续性哮喘的有效指标，本文通过对本院反复性咳喘患儿血清25羟基维生素D3、免疫球蛋白以及外周血T淋巴细胞亚群与哮喘预测指数的相关性分析，为临床治疗提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 本研究对象为2015年6月至2017年6月期间本院收治的120例反复性咳喘患者作为研究对象，其中男者59例，女61例，年龄6个月～3岁，平均年龄为（1.92±1.07）岁，平均体质量（11.89±2.01）kg，根据患者的临床症状，依据反复咳喘诊断标准，将患者分为哮喘预测指数（asthma predictive index，API）阳性组患者和阴性组患者，其中API阳性组患者57例，API阴性组患者63例，两组患者的年龄、体质量、性别之间的差异无统计学意义，见表1。两组患者家属均以签署了知情同意书，同时本研究通过医院伦理学会论证通过。

表1 基线资料Table 1 The baseline information

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：①所有患者均为3岁以下儿童；②所有患者的临床表现均为反复性咳喘；③所有患者家属均签署知情同意书。排除标准：①患者近一个月内使用糖皮质激素；②先天气道性疾病导致的高反应性；③患者肺部发育不良或胸廓畸形导致的咳喘；④恶性呼吸道肿瘤疾病患者。

API阳性判定标准[5]：患者在一年内咳喘次数超过4次，且对患者的病史进行询问，患者存在1个主要危险因素或者2个次要危险因素。其中，患者主要危险因素包括：①患者直系亲属存在哮喘病史；②患者有明确的特异性皮炎诊断；③明确的呼吸道过敏物质。次要危险因素包含：①患者的喘息由过敏性变应原导致；②患者的外周血嗜酸性粒细胞比例大于4%；③患者的喘息与感冒等疾病无关。

1.3 研究方法 对所有患者进行回顾性调查，调查内容主要包括家族咳喘史、既往咳喘史、变应原过敏原接触史、外周血嗜酸性粒细胞比例、潮气量参数等，分析患者的API情况。1.4 观察指标

1.4.1 外周血T细胞亚群与API相关性分析 分别对API阳性和API阴性组患者进行空腹采血4 ml，将所得样品在离心（5 000 r/min，20 min）后，对患者样品进行贝克曼Cyto-FLEX流式细胞仪检测其CD3+、CD4+及CD8+细胞水平。

1.4.2 血清维生素D水平、血清免疫球蛋白E（IgE）、嗜酸性粒细胞比率（EOS%）与API相关性分析 分别对API阳性和API阴性组患者进行空腹采血4 ml，将所得样品在离心（5 000 r/min，20 min）后，对患者样品进行电化学光法对患者血清25-羟维生素D、IgE、EOS%进行检测。分析25（OH）D、IgE、EOS%与API相关性。

1.4.3 潮气量参数与API相关性分析 使用肺功能仪器（德国JEAGER,masterlab pead systerm）对两组患者的潮气量参数进行测定。设定参数为：流量参数0～20 L，感受力总阻力在50 Pa以下，死腔容积为100 ml，分别对两组患者进行100次测定，将测定中部的20个数据作为研究对象。分别对患者的最大呼气流速时间（TPEF）、总呼气时间（TE）、最大呼气量（VPEF）、总呼气量（VE）、吸气时间（T1）、呼气时间（TE）、潮气量（VT）、呼吸频率（BF）、每分钟通气量（MV）进行对比。

1.4.4 API多因素logistic回归分析 分别对两组以上危险因素进行多因素logistic回归分析，得到影响API患者的主要危险因素。

1.5 统计学方法 所有数据采用SPSS 19.0统计软件进行分析,计量资料的采用“±s”表示,统计分析采用t检验，患者的多因素分析采用Logistic回归分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 外周血T细胞亚群与API相关性分析 通过对两组患者的T细胞亚群进行分析，API阳性组患者的CD3+（%）、CD4+（%）、CD8+（%）、CD4+/CD8+水平明显低于API阴性组，API阳性组患者CD19+（%）水平明显高于API阴性组，两组患者之间的差异存在统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 外周血T细胞亚群与API相关性分析Table 2 Analysis of the correlation between T cell subsets in peripheral blood andAPI

2.2 血清维生素D水平、IgE、EOS%与API相关性分析 通过分析，API阳性组患者的IgE、EOS%水平明显高于API阴性组患者，API阳性组患者的25（OH）D3水平明显低于API阴性组患者，两组差异具有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 血清维生素D水平、血清免疫球蛋白E（IgE）、嗜酸性粒细胞比率（EOS%）与API相关性分析Table 3 Correlation analysis between serum vitamin D level,serum immunoglobulin E(IgE),eosinophil ratio(EOS%)andAPI

2.3 潮气量参数与API相关性分析 通过分析，API阳性组患者的TPEF/TE、VPEF/VE、T1水平明显低于API阴性组患者，API阳性组患者的BF、MV水平明显高于API阴性组患者，两组患者之间的差异存在统计学意义（P＜0.05）。两组患者TE、VT差异无统计学意义，见表4。

2.4 API多因素logistic回归分析 通过对患者的API多因素logistic回归分析，CD4+/CD8+过低、CD19+（%）过高、25（OH）D3过低、IgE过高、EOS%过高、TPEF/TE（%）过低、VPEF/VE（%）过低为影响患者API阳性率的主要危险因素，见表5。

3 讨论

临床上，婴幼儿反复性咳喘是儿科常见的呼吸道疾病，小儿支气管哮喘诊断指南中，推荐使用哮喘预测指数，即API作为咳喘发作的预测性指标[6]，但是，在实际工作中，API指数仅仅是定性资料，虽然在一定程度上可以对患者的咳喘情况进行预测分析，但是缺乏客观性的量化指标支持，所以，此指标在临床实际工作中的应用常常受到一定的制约[7]。本文通过对反复性咳喘患者的血清维生素D水平、潮气量相关参数、外周血T淋巴细胞分布等情况展开相关性分析，旨在为临床反复性咳喘疾病预测提供科学数据支持。

表4 潮气量参数与API相关性分析Table 4 Correlation analysis of tidal volume parameters andAPI

表5 API多因素logistic回归分析Table 5 Multiple factor Logistic regression analysis ofAPI

本研究中，API阳性组患者的CD3+（%）、CD4+（%）、CD8+（%）、CD4+/CD8+水平明显低于API阴性组，API阳性组患者CD19+（%）水平明显高于API阴性组，分析认为，儿童咳喘性疾病的主要病因是由自身免疫性反应造成的气道肥大细胞、T淋巴细胞以及嗜酸性细胞的大量分泌，造成患者的的高气道反应，进而造成患者的咳喘等临床症状[8]。患者的咳喘疾病发作的根源在于过敏性气道炎性反应，在气道炎性反应的发展过程中，气道上皮细胞由于免疫反应造成损伤而脱落、坏死，进而造成患者气道基膜下胶原物质沉积，杯状细胞和平滑细胞增生肥厚，进而发展为气道结构的不可逆结构改变[9]，所以，患者在早期咳喘现象得不到有效控制，其成年后的哮喘发作于治疗将变得更加困难[10]。而从患者的免疫情况分析，随着患者细胞的脱落以及祈祷的不可逆性改变，患者的自身免疫性反应加剧，CD3+（%）、CD4+（%）、CD8+（%）、CD4+/CD8+水平明显降低，CD19+水平明显升高，随着以上外周血T淋巴细胞水平的紊乱加剧，患者咳喘现象也随之加剧，患者最终发展为API阳性[11]。从多因素logistic结果分析，外周血CD3+（%）、CD4+（%）、CD8+（%）、CD4+/CD8+、CD19+水平的明显变化，可作为患者API进展的关键影响因素。王进雅等[12]在T淋巴细胞亚群在反复性咳喘患者的分析中，提到，T淋巴细胞亚群水平的紊乱以及失衡对于API阳性患者具有明显促进作用，与本文研究结果相互印证。

API阳性组患者的25（OH）D3水平明显低于API阴性组患者，分析认为，维生素D作为神经内分泌免疫调节激素，在吞噬细胞成熟阶段具有重要调节作用，通过与细胞内源性维生素D受体相结合，调节吞噬细胞的分化[13]。同时，维生素D对于患者上呼吸道黏膜细胞的结构和功能的完整性具有积极的作用，通过增强患者上呼吸道的免疫调节功能，减少炎症反应对患者上呼吸道的内皮细胞损伤，进而减轻患者气道的气道高反应性，降低患者的咳喘反应。从多因素logistic结果分析，血清维生素D水平与患者的API阳性情况呈现负相关，徐艳娜等[13]在对婴幼儿咳喘疾病与维生素D的相关性分析中认为，维生素D主要通过影响患者的总免疫球蛋白含量，进而影响疾病进展，与本研究结果一致。

在对患者的呼吸潮气量分析中，患者的API阳性组患者的TPEF/TE、VPEF/VE水平明显低于API阴性组患者，多因素logistic结果分析显示，TPEF/TE（%）过低、VPEF/VE（%）过低为影响患者API阳性率的主要危险因素，分析认为，在本次研究中，对患者的潮气量参数的分析中，主要采用患者在安静舒适的呼吸情况进行对比，TPEF/TE、VPEF/VE主要反映患者的支气管痉挛状况[14]，与患者的小气道反应密切相关，对于咳喘患儿而言，由于患者的生理情况相似，都处于生命周期最为旺盛阶段，肺功能的正常与否，对于患者而言，其影响力较为微弱，而对于患者的小气道反应而言，由于在API阳性患者中，绝大多数患者的气道发生不可逆性改变，同时，由于免疫炎症反应，气道内大量附着粘性液体，患者的小气道阻力明显上升[15]，随之TPEF/TE、VPEF/VE、T1水平明显降低。李伟生等[16]在反复性咳喘患者的潮气量参数进行分析时指出，TPEF/TE、VPEF/VE与患者的API指数呈现负相关，与本研究结果相互印证。

综上所述，API阳性患者T淋巴细胞亚群紊乱失调，血清维生素D降低、潮气量参数中TPEF/TE、VPEF/VE水平明显下降，在反复性咳喘患者诊断中可明显弥补API指数定性分析的缺点，通过定量分析，确定患者的诊断以及治疗效果，值得临床治疗中关注。