沙棘油对鼠H22肝癌影响的研究

刘雪梅，张亚婷

（赤峰学院 医学院，内蒙古 赤峰 024000）

世界上有很多古老的植物，沙棘油就是是其中之一，它起源于我国的青藏高原地区，著名的藏族医生玉妥·元丹贡布的《四部医典》记录了沙棘有化痰、清肺、祛湿、滋阴壮阳的功效，其中数十处还讲述了它在脾胃处发挥的作用，而且对烧伤的治疗效果也十分明显.还有记载说沙棘的种子中含有极少量的油质，能够使人体血液得到相应的补充.沙棘于20世纪70年代被正式列入到中国药典中，从此成为受中华人民共和国法律保护的药材，也明确了它成为既能入药又能保健的宝贵资源.从自然植物沙棘的果实中经过细心挑选、精心提炼得到的沙棘油.其中包括有不饱和脂肪酸、黄酮、各种微量元素、生育酚及5-羟色胺等成分，而且生育酚具有保护皮肤的功效，而且还有能够促进癌细胞退化的生物活性物质，例如花青素、苦木素、香豆素、5-羟色胺等，这些物质使可能导致癌症发生发展的某些客观条件不能发挥作用，从而抑制肿瘤的生长，前苏联的研究学者对沙棘的各种成分以及它生物医学价值做了更多的调查分析，研究表明其活性成份能够达到200多种，在人类已经发现的植物物种中极为稀有，由此沙棘被人们称作是神奇的果实、随之开展了前瞻性的研究，在医药方面做出了贡献，前苏联国家政府对此给予大力支持，投入了大量的人力、物力，对此展开了许多临床相关方面的探讨，研究表明沙棘的确具有一定的医学药用价值.沙棘油抗肿瘤研究已有成果，如果沙棘油能作为抗肿瘤药物在临床广泛应用，沙棘属于天然植物，副作用小，成本低，会给广大患者带来福利，本实验通过建立H22细胞瘤小鼠模型探讨沙棘油的抗肿瘤作用及机制从而为沙棘开发创造良好的经济前景提供依据.

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 细胞株:H22肿瘤细胞采购于中科院上海细胞库.

1.1.2 动物：KM小鼠SPF级.由斯贝福（北京）实验动物科技有限公司提供并饲养.动物使用许可证：SCXK（京）2011-0004，实验动物生产许可证：SCXK（京）2011-0004

1.1.3 沙棘油：购于沙漠之花，敖汉沙漠之花饮料有限责任公司位于在赤峰市敖汉旗，在2002年，由联合国授予敖汉旗“全球环境500佳”的称号，是全国沙棘生态建设示范县，有“中国沙棘之都”之美称.该公司是主要致力于沙棘的一系列产品研发，经过不断探索，迄今为止拥有了以沙棘汁、沙棘油、沙棘养生茶为主的一套商业体系.在2005年，沙棘系列的部分产品通过过了国家食品质量安全认证（QS150406014519），正式进入销售市场.而且“沙漠之花”品牌饮品凭借绿色、天然等产品优势通过十三运组委会层层审查与严格筛选，成为内蒙古自治区十三运饮料唯一指定品牌.

1.1.4 注射用生理盐水

1.2 动物及分组

1.2.1 12只健康昆明雄性小鼠被随机分成两组，即生理盐水小组和治疗小组.

1.3 实验方法

1.3.1 小鼠模型建立：取体重18g左右雄性昆明小鼠12只，将购买的肿瘤细胞3000r离心10分钟，弃上层培养基，重复离心提纯后用生理盐水将其稀释至2ml，每只小鼠腋下注射0.2ml1×106的H22肝肿瘤细胞.

1.3.2 将小鼠随机分成两大实验组，即治疗小组和生理盐水小组，每组6只，在相同的环境中，分别给予治疗组经过沙棘油浸泡的鼠粮和饮用水，生理盐水组未经处理过的鼠粮和饮用水.

1.3.3 实验第21天，将小鼠处死后，取出腋下的肿瘤组织称其重量，对比其外观大小，电子表格下进行统计学分析.

1.3.4 交专业病理科室并做切片检查，显微镜下比较瘤组织中血管分布的差异.

2 结果

2.1 瘤体外观

2.2 肿瘤组织病理切片对比

2.3 统计学分析

表1 统计学分析

3 讨论

在很久以前肿瘤这一类疾病已经得到人们的关注.我国的首部字书《说文解字》解释“瘤”这字的时候说:瘤，肿也.”与此同时“肿瘤是血液聚集形成的”这种说法在当时也备受推崇.而大量的研究表明，血管生成因子是新生血管的关键因素，而炎细胞即巨噬细胞为主要的肿瘤细胞其能产生血管生成因子诱导新生血管的产生.因此通过控制肿瘤血管的形成被看作为肿瘤治疗的新方向.而肿瘤细胞的恶性生物学行为主要表现在无限性的生长和向周边组织浸润和转移[4]，肿瘤新生血管的形成是肿瘤细胞生长、浸润、转移的必要前提.所以说抗肿瘤的基础是通过抑制肿瘤新生血管的形成.本实验表明在经过沙棘油浸泡过的鼠粮喂养的小鼠中肿瘤的生长明显受到抑制，而在喂食没经过处理的鼠粮的小鼠中肿瘤的生长情况相反，在治疗组中对肿瘤新生血管的抑制效果显著，所以推断沙棘油阻碍肿瘤的生长的原理是通过抑制肿瘤新生血管的形成发挥作用的.早在20世纪70年代Folkman教授就提出肿瘤的生长和转移与血管新生过程密切相关[3].戚玮琳等人在红景天抑制乳腺癌血管新生的研究中得到结论表明，红景天提取物是通过抑制癌细胞VEGA（促血管生成因子）表达，从而抑制血管新生[6].与此同时张海英等人也在桑黄灵芝UE-1对肿瘤生长及血管新生的抑制作用的研究中表明桑黄灵芝UE-1具有明显的抗肿瘤作用，黄灵芝UE-1的抗肿瘤作用很有可能是通过抑制肿瘤血管新生达成的[5].内蒙古赤峰市敖汉旗盛产沙棘，已经有报道沙棘油富含槲皮素等黄酮类物质及维生素C，有抗肿瘤作用.目前临床上采用的抗肿瘤药物主要是细胞毒性药物，这类药物在杀伤肿瘤细胞的同时具有选择性差，不良反应大及易产生耐药的弊端.天然药物抗肿瘤研究之所以成为新的研究热点就是因为它在抑制或消灭癌细胞的同时，与细胞毒性药物相比这些不良反应会大大减少.陈世虎等人在抗肿瘤实验的调查研究中，分析得出结论，表明沙棘油静脉联合乳对CTX抗移植瘤具有增效减毒的作用[1].药食同源，可以为肿瘤患者减少病痛.本实验可以为沙棘油的开发与研究提供依据.而韩春卉等人通过大量的实验研究，结果显示沙棘油能够增强小鼠NK细胞的活性，并且可以大大的提高小鼠巨噬细胞的吞噬作用从而发挥抗肿瘤的功效[2].本实验通过观察瘤重级病理切片证明沙棘油有一定抑制肿瘤新生血管的形成，即抗肿瘤作用，其详细的机制究竟是通过影响VEGA从而抑制血管的新生，还是直接作用于癌细胞，或者是通过调节免疫系统间接发挥抗肿瘤的作用尚需要进一步研究.