头孢地嗪钠含量和有关物质的测定方法分析

张 爽 蔡迪鸣

（葫芦岛市食品药品检验检测中心，辽宁 葫芦岛 125000）

头孢地嗪钠是常见第三代头孢菌素之一，其具有较强的免疫功能。据有关资料显示[1]，头孢地嗪钠可使巨噬细胞被激活，促进杀菌率及吞噬活性的提高。该药物具有抵抗革兰阴性菌与革兰阳性菌作用，而且有助于稳定β-内酰胺酶、青霉素酶及头孢菌素酶等[2]。中国药典（ChP）及日本药典（JP）中均记录了头孢地嗪钠[3]。通过JP方法对头孢地嗪钠杂质进行分析的过程中，可知头孢地嗪钠具有较低的杂质水平，但是杂质数量较多，JP要想采用高效液相-质谱系统（HPLCMS）分析杂志，则需要转换磷酸盐缓冲体系，使其以可发挥性的流动相体系呈现出来[4]。本次研究主要针对头孢地嗪钠含量与有关物质测定方面进行分析，报道如下。

1 仪器与试药

1.1 实验仪器：Milli-Q超纯水系统；WatersAlliance2695 高效液相色谱仪；Platisil 18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；AT260分析天平；MettlerToledo320pH计。

1.2 试药：样品，乙腈，头孢地嗪钠对照品（含量90.9%），醋酸铵，甲酸，杂质对照组[头孢噻肟内脂（L）、7-氨基头孢烷酸（7-ACA）、头孢噻肟、头孢地嗪母核（3-MTA）、去乙酰氧头孢噻肟（DSF）、头孢地嗪侧链酸（MMTA）及去乙酰头孢噻肟（DF）]。

2 方法与结果

2.1 色谱条件：色谱柱选择P118（250 mm×4 mm，5 μm），流动相A与流动相B分别是醋酸铵溶液（甲酸调整至pH 3.2，2000 mL水溶解，醋酸铵1.9 g）与乙腈，流速设置为每分钟1.0 mL，检测波长及柱温分别为254 nm和35 ℃；进样量设置为20 μL。流动相与洗脱程序如下：0～17 min，流动相A与流动相B分别是81%和19%；17～27 min，流动相A与流动相B分别为81%→60%和19%→40%；27～28 min，流动相A与流动相B分别是60%→80%和40%→19%；28～35 min，流动相A与流动相B分别是81%和19%[5]。

2.2 制备溶液

2.2.1 头孢地嗪钠供试品溶液：选取适量本品，精密称量，添加乙腈-水混合溶液，比例为19:81，由此进行溶解，制成0.5 μg/mL溶液，振摇均匀，获得供试品溶液。

2.2.2 头孢地嗪钠对照品溶液：选取适量头孢地平对照品，精密称量，添加乙腈-水混合溶液，比例为19∶81，制定0.5 μg/mL溶液，振摇均匀，获得成品。

2.2.3 测定含量：供试品溶液及对照品溶液进样量20 μL，分别注入液相色谱仪，将色谱图记录，根据外标法对样品中头孢地嗪（C20H20N6O7S4）含量进行计算。

2.2.4 检测有关物质：于100 mL量瓶中置入经过精密量取的1 mL对照品溶液，采用稀释液进行稀释直至刻度，稀释液为乙腈-水（19∶81），振摇均匀，制取溶液为对照溶液；于液相色谱仪中注入20 μL对照溶液，对检测仪器灵敏度进行调节，确保主成分色谱峰的峰高最低为满量程的10%，后于液相色谱仪中注入20 μL供试品溶液，将色谱图记录下来，头孢地嗪峰及相邻杂质峰分离度应与要求相符。如果供试品溶液存在杂质峰，则根据1%自身对照法准确计算。

2.3 方法验证分析

2.3.1 考察专属性：为了对本方法能够对储存期间即生产期间产生的杂质进行有效检测，以贮存条件、结构特点及合成工艺等为依据开展分离度考察实验、强制降解实验。①强制降解实验：高温破坏样品粉末，温度设置为60 ℃，紫外光照破坏（10 d，UV254 nm），强酸（10 min，1 mol/L盐酸溶液），强氧化（15 min，35%过氧化氢溶液），强碱（5 min，0.1 mol/L氢氧化钾溶液），在上述环境中破坏。结果提示：于氧化条件及碱性条件中，头孢地嗪降解度提高，于光照环境中，显著增加了异构体2和MMTA；碱性环境中，极易形成异构体4、异构体3及异构体1；处于酸性环境中，显著增加了杂质L。强制降解形成的杂质可完全分离主成分。②考察分离度：混合溶解各杂质与头孢地嗪钠制成的对照品，溶解后，考察分离度，根据考察本方法的可行性，对生产工艺中形成的杂质进行监测。头孢地嗪钠与杂质混合液及头孢地嗪钠供试品溶液实验结果提示，可有效分离各杂质。根据以上实验结果可知，该方法专属性较强，可用于检测头孢地嗪钠保存及生产期间有关物质。

2.3.2 测定定量限与检出限：精密称量适量头孢地嗪钠，通过乙腈-水混合溶液进行稀释，形成包括0.044，0.13 μg/mL的头孢地嗪钠溶液，重复进行33次实验。计算公式为S/N=3，计算结果如下：0.056 μg/mL为头孢地嗪钠检测限；根据S/N=10对头孢地嗪钠定量限进行计算，结果为0.22 μg/mL。

2.3.3 考察线性关系：对头孢地嗪钠对照作品进行准确称量，通过乙腈-水混合溶液进行稀释，形成包含头孢地嗪钠不同浓度的对照品溶液，分别是0.1479、619.7、0.4929、599.4、4.929、505.4、9.858、411.1、24.64、388.2、49.29、306.9、98.58、218.7，横坐标为浓度C（μg/mL），纵坐标为峰面积A，根据上述二者做回归直线，回归方程为A=34352843.7C+9506.5，线性范围为0.1479～769.2 mg/mL，r=1.0000。

2.3.4 准确度实验：共称取9份头孢地嗪钠对照品，通过乙腈-水混合溶液分别制取50%、100%和120%溶液。根据2.2.3方法对样品含量进行检测。

2.3.5 重复性试验即精密度实验：准确称量50.0 mg头孢地嗪钠对照品，将其分为6分，溶剂为乙腈-水混合液，形成0.5 mg/mL溶液，均匀摇晃。将样品注入至液相色谱仪中，将峰面积记录，并对头孢地嗪钠相应因子进行计算，获取结果为RSD是0.13%，其中一份进行连续6次计算，将峰面积记录下来。头孢地嗪钠峰面积RSD计算结果是0.2%，结果提示，该方法具有较高的精密度。

2.3.6 溶液稳定性试验：分别采用流动相溶解头孢地嗪钠，将其置于20 ℃环境中检测，时间分别是80、160、240、320、360、420 min，对每种杂质改变状况进行考察。结果提示，通过流动相溶解的样品溶液稳定性较差，其中存在诸多杂质，从整个方面来看，杂质提高大约3.2%。通过乙腈-水及水溶解的样品溶液稳定性较强，总杂质量改变在0.1%以下。处于流动相中的样品降解速度明显，而通过乙腈-水溶解的样品溶液尽管具有较强的稳定性，但是由于空白峰值的作用，所以需要通过乙腈-水对样品进行溶解。

2.3.7 耐用性实验：实验工具为Gemini18（5 μm，250 mm×4.6 mm）色谱柱，确保每种杂质的分离及保留状况与Platisil柱相符。

3 讨 论

根据本次实验结果分析，通过高效液相色谱法检测头孢地嗪钠成分具有较高的可行性，而且具有良好的溶液稳定性、耐用性、准确度、精密度、线性及适应性，符合检测限及定量限检测要求。