全自动快速微生物检测系统在鉴定流感嗜血杆菌中的应用价值

吕其凡

（丹东市妇女儿童医院，辽宁 丹东 118000）

流感嗜血杆菌即流感杆菌，作为人类上呼吸道正常菌群，该细菌经人工培养时需加血液方可生长，因此被命名为嗜血杆菌。流感嗜血杆菌作为致病性细菌，可诱发原发性化脓性感染和呼吸道继发感染，呼吸道和孕妇产道为该细菌两大传染途径，临床常表现为肺炎、泌尿生殖道及妇产科感染、脑膜炎、会厌炎及其他化脓性感染（阑尾炎、胆道感染、化脓性关节炎）等，医者多根据临床表现结合实验室检查（病原学检查、细菌培养）确诊，以便为后续医疗工作的正常开展奠定基础，如一般治疗、对症治疗、病原学治疗等，以减少医患负担，实现最佳治疗效果[1-2]。现有流感嗜血杆菌鉴定方法较为多样，本文就全自动快速微生物检测系统其应用价值进行分析，资料报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：从2016年1月至2017年6月于我院就诊的38例肺部炎症患者作为研究对象，均为女性；年龄3～29岁，平均（14.2±1.2）岁；组织采集痰液，制作标本后经16SrDNA（金标准）检测均鉴定出流感嗜血杆菌，所有入选对象均同意参与研究，每例病患制作4份痰液标本，分别进行16SrDNA、VITEK MS、APINH、V+X因子检测评估流感嗜血杆菌检出率。

1.2 研究方法

1.2.1 痰液标本采集：运用自然咳痰法晨起组织患者冷水漱口，深呼吸后用力咳出呼吸道深部痰液或采用雾化蒸汽吸入法和一次性吸痰管法采集痰液标本，标本量不少于1 mL，切记痰液标本忌与唾液、鼻咽分泌物、漱口水和食物混淆，将置于痰杯中的痰液加盖及时送检，若无法及时送检者暂时冷藏保存，核对病患信息。

1.2.2 流感嗜血杆菌检测：①准备DNA提取试剂盒、PCR扩增试剂盒、离心机、PCR仪、电泳仪及测序仪，严格按规定对痰液标本进行检测并进行DNA测序，其结果与BLASET数据库中序列进行比对，鉴定细菌。②VITEK MS检测，取培养的无菌接种环置于质谱仪检测板上，随后滴加1 µL质谱样品处理基质溶液覆盖样品后待其干燥后经质谱仪鉴定。③APINH检测，将菌株标本接种于细菌培养基上，于35 ℃条件下培养18～24 h观察培养基情况，运用APINH鉴定条，检查细菌情况。④V+X因子检查，运用血平板、嗜血杆菌分离平板、V因子、X因子和V+X因子纸片严格按规定进行分离鉴定。

1.3 观察指标：以16SrDNA检查结果为金标准，比较其余三项检查其病菌检出率；比较四种检查方法检查所需时间。

1.4 统计学处理：使用统计学软件SPSS20.0处理数据，用（）、（%）表示，用t和χ2检验，分析组间差异，若P＜0.05，即有统计学意义。

2 结果

2.1 16SrDNA与VITEK MS检出率比较：所有痰液标本经16SrDNA检查均检测出流感嗜血杆菌，其检出率达100.0%（38/38）；VITEK MS检出率为89.5%（34/38），两种检查方法其检出率相比无统计学意义（χ2=4.222，P=0.040）。

2.2 VITEK MS与APINH、V+X因子需求性试验检出率比较：VITEK MS检出率为89.5%（34/38）均优于APINH检出率71.1%（27/38）和V+X因子需求性试验检出率68.4%（26/38），数据对比均有统计学意义（χ2=4.070，P=0.044；χ2=5.067，P=0.024）。

2.3 四项检查方法耗时比较：16SrDNA检查耗时为（2.4±0.3）h、VITEK MS耗时为（0.4±0.1）h、APINH耗时（11.5±2.5）h、V+X因子需求性试验耗时为（27.5±2.5）h，VITEK MS检查耗时明显短于 16SrDNA、APIN及V+X因子需求性试验，均有统计学意义（t=38.987，P=0.000；t=27.348，P=0.000；t=66.769，P=0.000）。

3 讨 论

流感嗜血杆菌前称费佛氏杆菌/拜菲尔氏菌或流感杆菌，属于孤菌科嗜血杆菌属，是一种没有运动力的革兰阴性杆菌，嗜血杆菌最早于1892年由费佛教授在流行性感冒瘟疫中发现，曾被误认为时1889年流感大流行的病因，直至1933年发现流感性感冒病毒性病原后才得以消除此误解。流感嗜血杆菌广泛寄居于人们上呼吸道中，常诱发呼吸道病变、继发感染及急性化脓性感染，为有效防治疾病，帮助病患摆脱病魔困扰，进而减轻医患负担，医者多通过实验室检验分离病菌，给予对症治疗[3-4]。16SrDNA检查虽为流感嗜血杆菌鉴定金标准但因耗时长，且容易存在污染，为提高检测的安全性，以便医者快速获取准确检测结果，临床常用VITEK MS、APINH、V+X因子需求性试验作为替代，但有学者在研究中提出APINH、V+X因子需求性试验检测准确率尚有待提高且耗时长，可肉眼判读，无需特殊仪器，成本较低，但存在一定人为失误，VITEK MS自动判读，检测耗时短，操作简便（无需革兰染色）、灵活（所有微生物简单样品制备后均可鉴定）、准确（能满足临床与科研需求）、迅速（10min内即可获取检测结果）、高通量（可同时检测192个样本），具有极佳推广前景[5-6]。本次研究结果显示：VITEK MS检出率低于16SrDNA有统计学意义（P＞0.05）；但均优于APINH、V+X因子需求性试验检出率，差异有统计学意义（P＜0.05）；检测耗时VITEK MS短于16SrDNA、APINH及V+X因子需求性试验，均有统计学意义（P＜0.05），即流感嗜血杆菌运用VITEK MS安全高效便捷，具有极高应用价值。总之，全自动快速微生物检测系统鉴定流感嗜血杆菌效果显著，可临床推广应用。