食品中金黄色葡萄球菌定量检测能力验证结果与探析

□ 刘家慧 四川省内江市食品药品检验检测中心

1 引言

实际检测食品中的金黄色葡萄球菌时，必须严格遵循法律规定与标准，逐步提高检测水平与监测质量。一般情况下，检验人员会利用科学的鉴定系统完成盲菌的鉴定及分型工作，反复对比检测与鉴定结果后，明确被检测食品中的金黄色葡萄球菌数量。能力验证是一种客观的实验方法，是控制试验室准确度及精确度的重要途径，有利于修正实验室检测中可能存在的误差。为此，文章以能力验证为核心，对食品中的金黄色葡萄球菌定量检测及结果进行了分析。这不仅可以改善实验室工作质量，也可提高实验室的检测水平[1]。

2 检测材料与方法

2.1 材料

实际进行能力验证时，选取由我国研究院统一发放的6个金黄色葡萄球菌样品，分为1～6进行编号，6个金黄色葡萄球菌样品均为肉眼可见的球状，颜色为白色；选取6袋质量为25 g的奶样品，按照同样的方式进行编号，同一编码的金黄色葡萄球菌样品及奶样品为一组。配置所需的培养基：无菌生理盐水、BP琼脂平板、显色培养基、血琼脂平板、革兰氏染色液、脑心浸出液肉汤BHI与冻干兔血浆等。

2.2 方法

实际实验过程中，应严格遵循相关标准与要求，将稀释液从金黄色葡萄球菌样品瓶中取出，取出的稀释液应严格控制在225 mL，然后将其与稀释液一同放置于均质袋内，直至其完全溶解，然后将稀释液与奶样品均匀混合，逐一按照编号统一处理6组样品。本次研究以平板计数方式为核心对样品进行检测，根据对金黄色葡萄球菌盲样的评估，尽量选择稀释度范围较大一些，尽量使同一稀释度3个平板上的菌落在20～200 CFU。每个稀释度吸取1 mL均液以0.3、0.3、0.4 mL接种量分别加入到3个BP琼脂平板上。在实验过程中要注意的是：新配置的BP琼脂平板有水珠，应放置于生物安全柜吹干或者放在25～50 ℃培养箱中烘干，计数时菌落不会蔓延；涂布时用一次性塑料涂布棒，注意不要触及平板边缘，计数时菌落清晰便于计数；涂布后，静置10 min，待样液完全吸收后再倒置于36 ℃下培养45～48 h。结合研究目的选择与实验研究相符的样品匀液，合适的样品混合液有利于加快稀释速度，然后吸取1 mL的样品匀液，注意所选样品匀液稀释度不同，将0.3 mL样品匀液直接放入金黄色葡萄球菌显示培养基中，缓慢搅拌，均匀后停止。金黄色葡萄球菌的灵敏度会直接影响实验结果，为此，可反复对比其灵敏度，从而提高实验结果的准确性，确保其精准、可行[2]。

3 结果与讨论

据本次实验得出，不同稀释度的平板当中，菌落数存在较大差异。一般情况下，金黄色葡萄球菌菌落呈球状，颜色不一，大致表现为从灰到黑的过渡，表面有湿润现象，较为光滑。未实验之前，需以冷冻的形式保存金黄色葡萄球菌，以免损伤样品，影响实验结果的准确性。但是，这种保存方式仍旧会对菌株造成一定损伤，致使菌落形态与金黄色葡萄球菌菌落出现差异，不再以球状出现，而是呈不规则形态。受到干扰菌的影响，6组样品均出现不同程度的透明圈，计数难度大幅提升。位于低稀释度平板中的金黄色葡萄球菌的颜色会发生变化，以缓慢的速度从紫色向红色转变，其余细菌的颜色也会发生变化，但并不固定。

就上述分析可知，初期，金黄色葡萄球菌的分离并不复杂。要想明确结果，必须基于菌落计数进行规范的操作与详细的计算。不同编码样品的金黄色葡萄球菌基本一致，未出现明显差异。平板具有成本低、耗时长的特征，作为一种保守的培养基，存在特异性过低的问题。要想获得准确、可行的实验结果，必须进行补充性实验，从而达成有效区分菌落形态的目的。不同的培养基灵敏性也不同。显色培养基具备十分明显的优势，不仅可以简化操作，还可节约实验时间。分离培养不会对检验人员提出过高的要求，利用基本的手段即可完成检测。同时，可进行多次实验，避免假阴性问题，提升结果的准确性。

4 结语

综上所述，实验涉及的金黄色葡萄球菌菌落数十分接近，这是在验证后反复比对得出的结果。实验过后，培养基颜色全部发生变化，均为十分鲜明的红色，显色状态良好。需要注意的是，干扰菌会直接影响典型菌落的辨识度，尤其是在稀释度较低的平板上，干扰菌出现了大面积的透明圈。因此，后续的检验过程中，应慎重选择平板，避免菌落出现互相干扰的问题。提高菌落的辨识度，有效区分金黄色葡萄球菌及其他菌落。