正交试验优选苏伯维尔饮料的水提工艺

罗 群，明俊男，蒲清荣，唐定洪，李能源，杨思进

（西南医科大学附属中医医院，四川泸州 646000）

现代社会生活节奏较快，熬夜、饮食不规律等不健康的生活方式导致人体免疫力低下、肝功能受损、慢性胃病等。苏伯维尔饮料由葛根、玉竹等五味中药组成，这五味中药均为药食同源的中药。该方为西南医科大学附属中医医院的经验方，葛根具有解肌退热、透疹、生津止渴、升阳止泻的功效，主要用于表证发热、麻疹不透、热病口渴、脾虚泄泻等〔1〕。玉竹具有养阴润燥、生津止渴的功效，主要用于肺、胃阴虚证，咳嗽、咽干痰结等〔2〕。五味药配伍合用，具有养肝护胃、提神醒脑的功效，可供免疫力低下、肝功能受损、患有慢性胃病及植物神经紊乱的人群使用。为了开发一种纯中药的现代中药保健饮料，本实验采用正交试验法，以干浸膏重量和葛根素的含量为综合评分指标，多指标优选苏伯维尔饮料水提的最佳工艺。

1 仪器与材料

LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津）；JPCT0328超声波提取器（武汉嘉鹏电子有限公司）；JA203H电子天平（常州市幸运电子设备有限公司）；葛根（成都仁济宏药业有限公司，批号：171101）；玉竹（成都仁济宏药业有限公司，批号：170401）；葛根素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110752-200912，含量96.0%）；甲醇（成都市科隆化学品有限公司，批号：20170101）。

2 方法与结果

2.1 葛根素提取方法考察

2.1.1 色谱条件与系统适应性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（25：75）为流动相；检测波长为250 nm；柱温30℃；进样量10 uL。理论塔板数按葛根素峰计算应不低于4 000。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的葛根素对照品，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg葛根素的溶液，摇匀，即得对照品溶液。

2.1.3 提取溶剂的考察 按照处方比例称取药材适量，加水煎煮，滤过，合并煎煮液，浓缩成流浸膏，水浴蒸干，置于105℃的恒温干燥箱中，干燥至恒重，得苏伯维尔浸膏。取4份浸膏粉末1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入25 mL水〔3〕547、30%乙醇〔3〕715、70%乙醇〔3〕714、50%甲醇〔3〕717，密塞，称定重量，超声处理30 min，冷却，再次称重，分别用相应的溶剂补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按“2.1.1”项下进行含量测定。见表1。

表1 提取溶剂考察

由表1可知，采用30%乙醇和50%甲醇提取，葛根素含量较高。参照2015年版《中华人民共和国药典》方法，故采用30%乙醇作为提取溶剂。

2.1.4 提取时间的考察 称取3份上述浸膏粉末1 g，置100 mL具塞锥形瓶中，分别加入溶剂30%乙醇25 mL，密塞，称重，分别超声提取20、30、40 min，取出，放冷，再次称重，用30%乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见表2。

表2 提取时间考察

由表2可知，提取时间为30 min时，葛根素的含量最高，故采用提取时间为30 min。

2.1.5 提取方式的考察 称取上述浸膏粉末2份，分别加入30%乙醇25 mL，密塞，称重，分别超声和回流30 min，放冷，再称重，用30%乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见表3。

表3 提取方式考察

由表3可知，超声提取葛根素含量更高，故采用超声提取方式。最终供试品的制备方法为：提取溶剂为30%乙醇，超声提取30 min。

2.2 方法学考察

2.2.1 供试品溶液的制备 按照处方比例称取药材适量，水提后，将提取液浓缩成流浸膏，水浴蒸干，105℃恒温干燥箱中至恒重，得浸膏。精密称取浸膏粉末1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇25 mL，密塞，称重，超声30 min，放冷，再称重，用30%乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2 线性关系的考察 精密量取标准品母液（0.995mg∕mL）1、3、5、7、9、11mL加甲醇稀释至25 mL，摇匀，分别制成浓度为 0.039 8、0.119 4、0.199 0、0.278 6、0.358 2、0.437 8 mg∕mL的对照品溶液。按“2.1.1”项下条件测定葛根素的峰面积。以峰面积为纵坐标（y）、葛根素浓度为横坐标（x）进行线性回归，得回归方程y=45 960 982.05x-451 155.181（r2=0.999 2）。表明葛根素对照品在0.039 8～0.437 8 mg∕mL的范围内线性关系良好。

2.2.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 uL，连续进样6次，记录峰面积。结果，峰面积平均值为8 807 154.8，RSD值为0.62%，结果表明仪器精密度良好。

2.2.4 重复性试验 取同批浸膏粉末1 g，精密称定，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，平行试验6份，测定峰面积，计算葛根素的含量。结果葛根素的平均含量为3.81 mg∕g，RSD值为0.40%，表明该方法重复性良好。

2.2.5 稳定性试验 按照“2.2.1”项下的方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12、24 h进样，精密吸取供试品溶液10 uL，注入液相色谱仪，记录葛根素的峰面积。结果平均峰面积为7 592 098.7，RSD值为0.25%，表明样品在24 h内稳定。

2.2.6 加样回收试验 精密称取已知含量的同一份样品9份，每份0.5 g（含葛根素3.78 mg∕g），分为3组，每组分别精密加入浓度为0.382 mg∕mL的葛根素对照溶液4、5、6 mL。按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，进样，测定，结果平均回收率为100.50%，RSD值为0.70%。

2.3 正交试验优选水提工艺

2.3.1 水提工艺设计 以加水量、煎煮时间、煎煮次数为因素，选用L9（34）因素水平表安排正交试验。见表4。

表4 水提正交因素水平

2.3.2 水提工艺正交试验结果及统计分析 按照处方比例称取药材适量，根据L9（34）设计表进行9组试验，将水提液浓缩后置于已恒重的蒸发皿中，水浴浓缩蒸干，移入105℃烘箱中，干燥至恒重，取出，置干燥器中冷却30 min后，取出称重，计算浸膏得率。精密称取L9（34）试验项下1～9号浸膏样品适量，按“2.2.1”供试品溶液制备方法，进行测定，计算样品中葛根素的含量。以葛根素含量和浸膏得率为指标，将葛根素含量的权重系数设为0.8，浸膏得率设为0.2，进行统计分析。见表5～6。

表5 水提正交试验结果

表6 水提正交试验方差分析

由表5和表6可以看出A、B、C三个影响因素中，影响因素顺序为A＞C＞B。由表5的均值结果分析，因素A的优劣顺序为3＞2＞1；因素B的优劣顺序为3＞2＞1；因素C的优劣顺序为3＞1＞2。最终选择以A3B3C3为最佳水提工艺条件，即加10倍量水，煎煮3次，每次煎煮1.5 h。

2.4 水提工艺验证试验按处方比例称取药材3份，按优选的最优水提工艺为条件，平行试验3次，测定浸膏得率和葛根素含量。见表7。

表7 水提工艺验证试验结果

由表7结果分析，按选取的最佳工艺进行提取，浸膏得率可控制在36%左右，葛根素含量达到4.07 mg∕g，总体优于正交试验时任何一次试验，证明上述正交试验所得到的最佳水提工艺为最佳，并表明优选的工艺稳定可行，重现性好。

3 讨论

葛根是苏伯维尔的君药，而葛根素则是葛根的有效成分，研究表明其具有解热〔4〕，镇痛〔5〕，抗菌、抗感染〔6〕，降血压〔7〕，降血糖、血脂〔8〕，抗氧化，抗肿瘤，解酒〔9〕等作用，与苏伯维尔的功能主治一致，所以本实验选择葛根素作为苏伯维尔水提工艺的含量测定指标。为考察提取情况，首先对葛根素含量进行考察，其次对浸膏得率进行考察，试验分析得出：葛根素含量比浸膏得率更好地反映药材的提取情况，故设计葛根素含量与浸膏得率的权重系数为8：2。为确保水提工艺的合理性，本实验进行了验证试验，结果表明，正交试验优选出的水提工艺合理可行。