OST经鼻给药对AD模型鼠中枢胆碱能神经环路的调控研究

田春雨，米亚新，李 颖，荣大佑，徐 丽，侯雪芹*

（山东第一医科大学（山东省医学科学院）药学院，山东 泰安 271016）

蛇床子为伞形科植物蛇床Cnidium monnieri（L）Cuss.干燥成熟果实。用药历史悠久，经现代药理药理学研究发现，对神经系统具有较强的药理活性。但由于该药具有脑内浓度低，分布快，消除也快，生物利用度较低等特点，目前鲜有人开展研究。本研究以此为突破，研究新型剂型蛇床子素经鼻给药抗AD功效。

1 材料与方法

1.1 实验材料

实验动物选用8月龄昆明种雌性小鼠60只，SPF级，体重18～22 g，由山东省实验动物中心提供。蛇床子素（Osthole，Ost）纯度≥98%，北京普天同创生物科技有限公司商城分公司[CAS:484-12-81]；3%戊巴比妥钠（Sigma）；0.9%生理盐水（辰欣药业股份有限公司）；盐酸多奈哌齐（安理申卫材（中国）药业有限公司制造批准文号：国药准字H20050978）等。

1.2 实验方法

东茛菪碱致记忆障碍模型制备：参照叶翠飞等方法略加改进，第21天，每天灌胃给药后30 min，对小鼠进行腹腔注射氢溴酸东茛菪碱3 mg/kg正常对照组以等量生理盐水替代，造模后30 min进行Morris水迷宫测试。

脑组织和血清样品采集：Morris水迷宫和明暗箱实验完毕后，实验动物禁食12 h，配制4%水合氯醛，以400 mg/kg剂量腹腔注射麻醉小鼠，眼球取血，静置2 h，4℃、1000 rpm离心20 min，分离血清。断头取脑组织。

1.3 统计学方法

应用SPSS 18.0统计软件进行分析，数据表示，两组间比较采用独立样本t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

蛇床子素对AD小鼠学习记忆的影响：逃避潜伏期（Escape latency）经重复测量方差分析，球形检验（Mauchly's Test of Sphericity）结果Mauchly's W=0.453，P=0.000，满足球形检验，可以不用校正而直接进行重复测量的单变量方差分析。组内变异结果（Tests of Within-Subjects Effects）显示训练天数效应F=63.336，P=0.000，提示实验动物的逃避潜伏期随着训练天数的增加而有变化趋势；训练天数与分组的交互效应（F=0.923，P=0.55）提示训练天数的作用不随分组的不同而有差异。进一步选用LSD法对5天逃避潜伏期进行组间的两两比较，结果显示各组逃避潜伏期随训练时间增加呈现缩短趋势。模型组第1-5天逃避潜伏期比正常组延长，差异有统计学意义（第2、5天：P＜0.05）；给药组与模型组相比，蛇床子素组第5天逃避潜伏期均明显缩短，差异有统计学意义（P＜0.05）。

蛇床子素对AD小鼠脑胆碱能神经递质的影响：蛇床子素各剂量组对AD小鼠脑内Ach浓度检测。单因素方差分析结果显示各组Ach浓度（F=5.371，P=0.002）。组间两两比较显示，模型组皮质Ach浓度、较正常。组明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比，蛇床子素给药组皮质区Ach浓度增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 结 论

蛇床子素具有改善中枢胆碱能损伤，提高小鼠学习记忆的作用，东莨菪碱诱导小鼠建痴呆模型可以引起小鼠认知功能的障碍，同时降低痴呆小鼠中枢胆碱能神经环路中乙酰胆碱和胆碱乙酰基转移酶的含量。蛇床子素可以改善痴呆模型小鼠认知功能障碍，增加痴呆小鼠中枢胆碱能神经环路中乙酰胆碱（ACH）的含量，提高乙酰胆碱酯酶（AchE）活性。