王丽芳 代宝强 谭余庆 刘 婷 王 洋
(中国中医科学院中药研究所,北京 100029)
改善实验动物福利,既需要新的科学研究,也需要来自人文和社会科学的研究。实验动物福利是重要而复杂的。目前,我国对动物福利有相关规定和国家标准,已日渐趋于国际化。大鼠作为医学实验中应用十分广泛的模型动物,其动物福利也应受到重视。本文以大鼠福利伦理学为出发点,探究白桦木磨牙棒对大鼠生长发育脏器指数和血清生化指标的影响,探究磨牙棒作为大鼠福利之一,分析其可行性和安全性,且此项研究在国内外鲜有报道。
80~100 g的雄性 SPF级 SD大鼠50只,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证号SCXK(京)2012-0001,每5只一笼分笼饲养,2笼一组,共分为5组:对照组和四组使用磨牙棒组,实验组一为无色无味,直径1 cm,长10 cm的小兴安岭的白桦木磨牙棒组,实验组二为直径0.6 cm,长10 cm的鸡翅木筷子磨牙棒组,实验组三为直径0.6 cm,长10 cm的仿象牙木即塑料筷子磨牙棒组,实验组四为直径0.6 cm,长10 cm的不锈钢饮用水嘴磨牙棒组,磨牙棒是成品有挂钩,其余各组在上端打孔用曲别针悬挂在笼盖上。各组均正常给予饲料及饮水,饲养在中国中医科学院中药研究所屏障环境动物实验室,使用许可证 SYXK(京)2013-0035。大鼠饲料经60Co照射、饮水经反渗透净化处理、垫料均采用125℃高压灭菌。
每天观察大鼠的一般情况,包括大鼠的精神、运动状态,皮毛色泽,对外界的反应是否灵敏,有无多饮多食、腹泻、便秘交替现象。每隔4天称取一次大鼠的体质量与摄食量,并做好记录。
饲喂30 d后按照48 mg/kg体质量注射0.8%戊巴比妥钠麻醉各组大鼠,解剖检查及计算大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、脑、睾丸及附睾等脏器的系数。
相对脏器系数计算公式为:脏器系数=脏器质量(g)/体质量(g) ×100%。
采用腹主动脉采血,3 000 g离心15 min分离血清,使用全自动生化分析仪(东芝,40FR)分析各组大鼠中血生化指标,包括:TP(g/L)、ALB(g/L)、TBIL(μmol/L)、AST(U/L)、ALT(U/L)、ALP(U/L)、GGT(U/L)、CK(U/L)、CRE(μmol/L)、UREA(mmol/L)、GLU(mmol/L)、CHO(mmol/L)、TG(mmol/L)、A/G(mmol/L)、GLB(mmol/L)和 O/P(mmol/L)。
使用SPSS 20.0统计软件对各组数据进行统计分析,采用单因素方差分析(One-way ANOVA)比较显著性差异,结果表示为(±s±s),检验水平α=0.05。
通过观察可知各组大鼠的精神状态良好,皮毛色泽洁白,有光泽,运动状态良好,对外界的反应灵敏,无多饮多食,无腹泻、便秘交替现象,表明大鼠一般行为学状态正常,经统计分析表明各组大鼠之间体质量及摄食量无显著差异(表1,2)。
表1 磨牙棒使用1个月对大鼠(♂)体质量的影响(g,±s±s,n=10)Tab le 1 The effects of using the m olars on the body weigh t of rats(♂)in 1 m on th(g,±s±s,n=10)
表1 磨牙棒使用1个月对大鼠(♂)体质量的影响(g,±s±s,n=10)Tab le 1 The effects of using the m olars on the body weigh t of rats(♂)in 1 m on th(g,±s±s,n=10)
110.88±5.41 111.86±4.30 111.13±4.20 111.92±4.30 112.23±5.34 4 147.60±5.77 150.29±6.43 148.61±5.71 149.84±6.93 148.01±6.83 8 183.98±9.91 187.00±7.81 185.16±8.58 184.04±5.75 185.71±9.71 12 218.86±11.73 221.26±9.01 222.51±10.06 217.20±8.49 220.72±12.01 16 254.50±13.06 256.74±11.17 258.63±10.57 252.51±9.05 256.79±14.48 20 289.43±12.85 291.85±11.01 291.74±13.25 286.53±8.45 291.92±18.48 24 322.99±14.79 326.80±12.35 326.33±16.67 318.07±8.20 326.83±21.25 0 27 338.77±17.96 340.04±11.11 342.54±22.57 332.32±8.31 337.19±20.98
表2 磨牙棒使用1个月对大鼠(♂)摄食量的影响(g,±s±s,n=10)Tab le 2 The effects of using the m olars on the food consum p tion of rats(♂ ) in 1 m onth(g,±s ±s,n=10)
表2 磨牙棒使用1个月对大鼠(♂)摄食量的影响(g,±s±s,n=10)Tab le 2 The effects of using the m olars on the food consum p tion of rats(♂ ) in 1 m onth(g,±s ±s,n=10)
17.10±14.07 18.33±9.97 17.26±18.03 17.72±23.83 16.82±6.72 8 22.28±27.22 22.66±3.89 22.09±4.28 21.41±14.28 22.05±6.08 12 23.68±18.24 23.86±5.02 24.42±11.46 22.99±0.57 23.64±16.48 16 25.37±7.21 25.47±5.37 25.84±4.17 25.44±0.78 25.12±13.58 20 26.11±18.38 25.91±1.70 25.43±26.52 25.03±3.18 25.43±8.98 24 27.13±13.62 28.21±7.92 27.12±13.79 26.55±7.00 27.26±12.52 4 27 26.97±3.25 27.51±11.31 27.52±2.76 26.12±11.67 26.63±12.87
解剖检查及计算心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、脑、睾丸及附睾系数,通过统计分析表明各组中各个脏器指数之间无显著差异(表3)。
表3 磨牙棒使用1个月对大鼠(♂)脏器系数的影响(±s±s,n=10)Tab le 3 The effects of using them olars on the organ coefficien ts of rats(♂ )in 1 m on th(±s ±s,n=10)
表3 磨牙棒使用1个月对大鼠(♂)脏器系数的影响(±s±s,n=10)Tab le 3 The effects of using them olars on the organ coefficien ts of rats(♂ )in 1 m on th(±s ±s,n=10)
心系数0.33±0.03 0.40±0.02 0.39±0.04 0.37±0.02 0.40±0.04肝系数 3.37±0.32 3.33±0.15 3.36±0.23 3.28±0.17 3.57±0.70脾系数 0.28±0.05 0.26±0.04 0.25±0.04 0.27±0.04 0.28±0.03肺系数 0.51±0.04 0.47±0.04 0.48±0.04 0.49±0.02 0.51±0.05肾系数 0.91±0.05 0.89±0.04 0.89±0.05 0.92±0.09 0.90±0.07肾上腺系数 0.02±0.00 0.02±0.00 0.02±0.00 0.02±0.00 0.02±0.00胸腺系数 0.20±0.03 0.22±0.05 0.23±0.04 0.23±0.04 0.23±0.03脑系数 0.60±0.03 0.63±0.04 0.60±0.02 0.62±0.03 0.61±0.05睾丸系数 0.94±0.06 0.89±0.06 0.90±0.06 0.92±0.07 0.97±0.09附睾系数0.24±0.03 0.22±0.03 0.21±0.02 0.24±0.03 0.24±0.02
检测各组大鼠的血清生化指标,通过统计分析表明各组中 TP(g/L)、ALB(g/L)、TBIL(μmol/L)、AST(U/L)、ALT(U/L)、ALP(U/L)、GGT(U/L)、CK(U/L)、CRE(μmol/L)、UREA(mmol/L)、CHO(mmol/L)、TG(mmol/L)、A/G(mmol/L)、GLB(mmol/L)、O/P(mmol/L)指数并无显著差异,但实验组一与实验组三中GLU(mmol/L)指数显著地低于其他实验组及对照组(P<0.05),且白桦木组更低,但是在正常值内(表4)。因此使用小兴安岭白桦木磨牙棒作为大鼠饲喂时的辅助玩具,对SD大鼠及血清生化指标无明显影响,且有助于降低大鼠糖尿,防止大鼠过肥或者患糖尿病。
表4 磨牙棒使用1个月对大鼠(♂)血清生化学指标的影响(±s±s,n=10)Table 4 The effect of using the m olars on the serum biochem ical indicators of rats(♂)in 1 m onth(±s±s,n=10)
表4 磨牙棒使用1个月对大鼠(♂)血清生化学指标的影响(±s±s,n=10)Table 4 The effect of using the m olars on the serum biochem ical indicators of rats(♂)in 1 m onth(±s±s,n=10)
注:与对照组比较*P<0.05为差异显著Note: Compared with the control group,*P<0.05 was significant
TP/(g/L)54.31± 2.87 55.82± 3.16 56.11±2.16 55.47±2.13 56.83±1.21 ALB/(g/L) 31.78± 1.80 32.24± 1.40 32.79±0.94 32.32±1.49 33.02±0.64 TBIL/(μmol/L) 0.87± 0.24 0.89± 0.24 0.90±0.26 0.77±0.42 0.79±0.28 AST/(U/L) 96.70±16.60 132.40±24.50 110.90±13.40 119.90± 25.60 93.90±14.50 ALT/(U/L) 53.60±11.10 48.80± 5.30 46.50±5.30 55.20±15.10 45.80±6.30 ALP/(U/L) 293.20±64.60 282.80±55.40 255.80±47.80 268.60± 55.0 247.00±64.00 GGT/(U/L) 0.40± 0.20 0.66± 0.31 0.51±0.19 0.52± 0.20 0.42±0.11 CK/(U/L) 239.60±112.1 583.60±157.50 425.10±77.10 435.90±202.10 258.20±80.00 CRE/(μmol/L) 23.80±11.9 19.20± 2.10 19.60±3.10 20.10± 3.30 17.90±2.90 UREA/(mmol/L) 4.95± 0.597 4.76± 0.87 5.16±0.54 5.14± 0.53 4.52±0.44 GLU/(mmol/L) 7.00± 0.867 5.44± 0.59* 6.52±1.44 5.85± 0.56* 6.58±0.75 CHO/(mmol/L) 1.53± 0.28 1.51± 0.17 1.60±0.25 1.36± 0.16 1.52±0.35 TG/(mmol/L) 0.45± 0.17 0.56± 0.26 0.51±0.23 0.31± 0.14 0.46±0.15 A/G/(mmol/L) 1.42± 0.05 1.37± 0.08 1.41±0.10 1.40± 0.08 1.39±0.06 GLB/(mmol/L) 22.53± 1.24 23.58± 1.96 23.32±1.68 23.15± 1.18 23.81±0.98 O/P/(mmol/L)1.82± 0.17 2.76± 0.67 2.42±0.42 2.21± 0.31 2.07±0.33
随着生物医学研究的不断深入,动物试验的重要性更为凸显。因此,社会上越来越关注实验动物福利。目前,国内外都在积极进行增加动物福利的研究,多采用积极的情感接触增强动物福利,增加改善生存环境,提升动物的兴趣、舒适、愉悦、自信能够在很大程度上提升动物福利。改善动物福利能提高农场动物的产量[1],提高牛肉和猪肉的品质[2],增加奶牛产奶量[3],增加鸡产蛋量和改善肉质[4],减少猪瘟发病率[5]。此外播放合适的音乐丰富动物环境,也能提升动物福利[6]。最近,实验动物玩具也作为动物福利被人们重视起来,动物玩具有利于动物表达天性、愉悦心情、稳定情绪的作用,主要的动物玩具包括:啮齿类的攀爬、钻洞、磨牙玩具,犬类的啃咬、球类玩具,非人灵长类的照镜、把玩类玩具,目前实验动物玩具虽发展缓慢,但前景广阔[7]。最近也有国内、外研究表明玩具有助于小鼠的生长发育[8-10],同时猪的玩具也能够降低猪的应激水平,提高猪的动物福利[11],在小鼠生存环境中放置动物玩具可以满足小鼠钻洞、啃咬和占领巢穴的天性,改善了小鼠的生存环境,使其放松精神,愉悦心情,避免争斗[12]。在猴子饲养环境中添加玩具,丰富猴子生存环境,能够减少猴子的异常行为,提升免疫指标[13]。丰富小鼠的生存环境能够提升小鼠的免疫系统能力,缓解炎症反应[14];降低大鼠的焦虑水平,逆转空间记忆缺陷[15];增进犬的食欲,增加活动水平,降低吠叫频率[16]。在啮齿类动物中添加咀嚼物和筑巢玩具能够增加幸福感[17]。添加环境富集的小笼子里可消除门诊化验室住房条件对啮齿类动物的生理和心理的影响[18],小鼠生存环境丰富之后,并不影响试验结果,且提高了动物福利,使小鼠更丰富,更容易处理[19]。大鼠为啮齿类动物,门齿较长,终生都在不断地生长,喜好啃咬,颗粒饲料要求软硬适中。本实验研究小兴安岭的白桦木磨牙棒,一种无色无味的软木,能够在大鼠生存过程中提升大鼠的舒适度,丰富大鼠生存环境,并通过与鸡翅木筷子,仿象牙木筷子,不锈钢引用水嘴做大鼠磨牙棒进行对比,通过数据分析表明对SD大鼠生长发育过程中体质量、摄食量、脏器指数及血清生化指标无明显影响,且降低了血清中的GLU水平。
在医学院校中应加强培养动物福利伦理的理念[20],且我国设有动物福利法[21],在动物实验中具有大量积极的实践与探索[22],对动物实验具有重要的积极作用。本试验研究表明使用小兴安岭白桦木磨牙棒作为大鼠饲喂时的辅助玩具有助于大鼠健康地生长与发育,对SD大鼠生长发育中的体质量、摄食量、脏器指数及血清生化指标均无明显影响,且有助于降低大鼠糖尿,防止大鼠过肥或者患糖尿病,符合其喜欢啃咬的天性,促进其心情愉悦,增加大鼠动物福利,具有可行性。