白术芍药散联合美沙拉嗪治疗溃疡性结肠炎临床疗效及对血清和结肠黏膜NGAL、MMP-9 表达水平的影响

杨倩倩 周建波 蔡 升 方 莹

作者单位：宁波大学附属阳明医院消化内科（余姚315400）

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是一种自直肠向结肠逆行蔓延的慢性非特异性炎症，病程迁延难愈，病情反复发作，严重影响患者的生存质量[1]。目前UC 尚无特效治疗方案，其临床常用药物包括氨基水杨酸类、糖皮质激素类及免疫抑制剂类，但上述药物的疗效差强人意，且具有一定的副作用[2]。白术芍药散又称痛泻要方，源自《丹溪心法》，组方由白术、白芍、陈皮和防风构成，具有柔肝止痛、补脾止泻的效果，在治疗肠鸣腹痛、大便泄泻和肝旺脾虚诸证中疗效可靠。研究显示，白术芍药散治疗UC 具有良好的疗效及安全性[3-4]。中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL）是脂质运载蛋白家族的一个成员，表达于人体的结肠、胃、肝等多个组织，参与机体的炎性反应、免疫反应、细胞凋亡、细胞分化等多种生理病理过程[5]。本研究检测UC 患者血清及结肠黏膜NGAL、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）mRNA 表达水平，探讨白术芍药散治疗UC 的可能作用机制。

1 临床资料

1.1 一般资料 2015 年6 月-2016 年6 月在宁波大学附属阳明医院消化内科诊治初发型溃疡性结肠炎（UC）患者80 例，采用随机数字表法分为观察组和对照组，各40 例。观察组中男24 例，女16 例，平均年龄（42.18±9.25）岁，平均病程（5.26±3.48）年；对照组中男25 例，女15 例，平均年龄（41.87±9.23）岁，平均病程（5.22±3.45）年。本研究方案通过医学伦理委员会审核，患者知情同意。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：（1）所有患者符合中华医学会消化病学分会炎症性肠病学组“炎症性肠病诊断与治疗的共识意见”[6]中有关轻、中型UC的诊断标准；（2）患者或家属签署知情同意书。排除标准：（1）重型UC；（2）合并脑、肺、心、肝、肾等脏器的严重疾病；（3）哺乳及妊娠期妇女；（4）药物过敏者。

2 方 法

2.1 治疗方法 对照组给予美沙拉嗪肠溶片（规格：0.25g/片，批号150320，葵花药业）1.0g，1 天4 次，观察组在对照组基础上给予白术芍药散煎剂（白术30g，白芍20g，陈皮15g，防风20g，水煎2 次，取汁200mL）100mL，1 天2 次。两组疗程均为8 周。

2.2 观察指标 两组患者治疗结束后复查肠镜并Mayo 评分量表[7]评估临床疗效。Mayo 评分量表：（1）排便次数：正常计0 分，每天增加1～2 次计1 分，每天增加3～4 次计2 分，每天增加＞5 次计3 分；（2）大便带血：无大便带血计0 分，大便带血少于一半时间计1 分，大便带血占大部分时间计2 分，大便带血为持续性计3 分；（3）肠镜检查：无病变计0 分，有轻度病变（少许充血）计1 分，有中度病变（明显糜烂）计2分，有重度病变（溃疡形成）计3 分；（4）医师评估病情：无异常计0 分，轻度计1 分，中度计2 分，重度计3 分。上述各项评分之和≤2 分则临床缓解；3～5 分则轻度活动；6～10 分则中度活动；11～12 分则重度活动。分别于治疗前后经内镜取肠黏膜标本，于-70℃冻存待检。采用RT-PCR 检测肠黏膜NGAL、MMP-9 mRNA 表达水平。取适量肠黏膜作成组织匀浆，以Trizol 法提取组织总RNA，再把获得的RNA 反转录为cDNA，将cDNA 作为模板，分别添加目标基因引物，上PCR 仪进行扩增。最后，取PCR 产物在琼脂糖凝胶中电泳，并用溴化乙锭染色，之后图像分析仪行半定量分析。分别于治疗前后清晨空腹状态下，经外周静脉抽取3mL 血液，离心并分离血清，于-70℃冻存待检。采用ELISA 法检测血清NGAL、MMP-9 蛋白表达水平。实验过程严格按照说明书步骤进行操作。NGAL、MMP-9 酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒购于美国R&D公司、NGAL、MMP-9、β-actin 引物及反转录试剂盒购于日本TaKaRa 公司、总RNA 抽提试剂盒购于美国Invitrogen 公司、荧光定量PCR 仪购于美国Bio-Rad 公司。

2.3 疗效标准 依据《对炎症性肠病诊断治疗规范的建议》及Mayo 评分量表[7]评价临床疗效，显效：临床症状全部缓解，且大便次数≤2 次/天，大便镜检无白细胞、红细胞。有效：临床症状基本缓解，且大便次数2～4 次/天，大便镜检白细胞或红细胞＜10 个/高倍镜视野。无效：临床症状、大便次数、大便镜检细胞数都未缓解。

2.4 统计学方法 应用SPSS17.0 统计软件进行数据处理，计数资料用%表示，组间比较采用χ2检验，计量资料用均数±标准差（）表示，组间比较采用t检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

3 结 果

3.1 两组UC 患者基础资料比较 两组UC 患者性别、年龄、病程等资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

3.2 两组UA 患者治疗后临床症状改善比较 治疗后，观察组40 例中显效25 例，有效12 例，无效3例，总有效率92.5%；对照组40 例，显效18 例，有效10 例，无效12 例，总有效率70%，观察组总有效率显著优于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3.3 两组UA 患者Mayo 评分比较 治疗后，两组患者Mayo 评分均较治疗前降低（P＜0.05），观察组Mayo评分明显低于对照组（P＜0.05）。见表1。

表1 两组溃疡性结肠炎患者治疗前后Mayo 评分比较（分）

表1 两组溃疡性结肠炎患者治疗前后Mayo 评分比较（分）

注：与本组治疗前比较，△P＜0.05；与对照组治疗后比较，*P＜0.05；对照组给予美沙拉嗪肠溶片治疗；观察组给予美沙拉嗪肠溶片+白术芍药散

组别 例数 治疗前 治疗后对照组406.58±3.462.24±1.15△观察组406.61±3.521.32±1.01*△

3.4 两组UA 患者肠黏膜NGAL、MMP-9 mRNA 表达水平比较 两组治疗前肠黏膜NGAL、MMP-9 mRNA 表达水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后，两组患者肠黏膜NGAL、MMP-9 mRNA 水平均明显降低（P＜0.05），观察组肠黏膜NGAL、MMP-9 mRNA 表达水平较对照组降低明显（P＜0.05）。见表2。

表2 两组溃疡性结肠炎患者肠黏膜NGAL、MMP-9 mRNA表达水平比较（）

表2 两组溃疡性结肠炎患者肠黏膜NGAL、MMP-9 mRNA表达水平比较（）

注：与本组治疗前比较，△P＜0.05；与对照组治疗后比较，*P＜0.05；NGAL：中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白；MMP-9：基质金属蛋白酶9；对照组给予美沙拉嗪肠溶片治疗；观察组给予美沙拉嗪肠溶片+白术芍药散

组别 例数 治疗前NGA治L疗 后 治疗前MMP-治9疗后对照组400.86±0.140.63±0.12△0.72±0.130.55±0.11△观察组400.87±0.150.44±0.09*△0.73±0.140.39±0.09*△

3.5 两组UA 患者血清NGAL、MMP-9 蛋白水平比较 两组治疗前血清NGAL、MMP-9 mRNA 水平差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后，两组患者血清NGAL、MMP-9 mRNA 水平均明显降低（P＜0.05），观察组血清NGAL、MMP-9 蛋白水平较对照组降低明显。见表3。

3.6 不良反应 对照组发生恶心2 例，观察组发生恶心1 例，均自行缓解。两组间不良反应发生率差异无统计学意义（P＞0.05）。

表3 两组溃疡性结肠炎患者血清NGAL、MMP-9 水平比较（）

表3 两组溃疡性结肠炎患者血清NGAL、MMP-9 水平比较（）

注：与本组治疗前比较，△P＜0.05；与对照组治疗后比较，*P＜0.05；NGAL：中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白；MMP-9：基质金属蛋白酶9；对照组给予美沙拉嗪肠溶片治疗；观察组给予美沙拉嗪肠溶片+白术芍药散

组别 例数 治疗N前G AL（ng/治mL疗）后 治疗MM前P-9（治pg疗/m后L）对照组40137.06±30.18103.21±26.29△19.28±6.2612.48±4.25△观察组40137.45±30.2479.25±18.54*△19.33±6.297.33±3.24*△

4 讨 论

UC 发病机制尚未完全阐明，其涉及环境、遗传、炎症、免疫和肠道菌群等多种因素[8]。UC 属中医“五更泄”、“泄泻”、“便血”等范畴，认为病因病机脾胃虚弱，脾失运化，湿热瘀阻，肠络受损[3]。白术芍药散用白术苦甘而温，补脾燥湿；白芍味酸性寒，柔肝止痛；陈皮辛苦而温，醒脾和胃；防风疏散肝郁，祛湿止泻[9]。研究表明，白术含白术内酯，而白术内酯能抑制LPS 诱导的巨噬细胞合成诱导型一氧化氮合酶及释放TNF-α，继而发挥抗炎效应[10]。白芍总苷提取物能抑制前列腺素E2、白三烯B4 和一氧化氮的生成，而且能抑制淋巴细胞的增殖，还能调节辅助性T 细胞和抑制性T 细胞的分化[11]。陈皮含有黄酮类成分，能抑制LPS 诱导的NO，TNF-α，IL-1β 和IL-6 的产生[12]。防风含香豆素类物质，白芷灵（一种香豆素成分）能抑制LPS 诱导的巨噬细胞中NFκB 信号通路激活[13]。本研究结果显示，观察组的临床症状改善总有效率（86.00%）显著优于对照组（73.00%），提示白术芍药散联合美沙拉嗪治疗UC 具有良好的临床疗效。

正常生理状态下，NGAL 在肾、结肠、胃及肝脏等组织中表达水平极低；但当炎症发生时，NGAL 呈现出高表达[14]。研究显示，NGAL 的持续升高与中性粒细胞的持续活化密切相关[15]。

研究显示，NGAL 与TNF-α、IL-1β、CRP 等多种炎症因子密切相关，NGAL 可能是炎症反应中的一个重要节点[16-17]。研究证实，MMP-9 通过降解基底膜中的Ⅳ型胶原，破坏肠黏膜屏障，使肠黏膜通透性升高，促进炎症的扩散[18]。UC 患者血清NGAL、MMP-9 水平与UC 病情严重程度呈正相关[19]。本研究发现，经治疗后，观察组肠黏膜NGAL、MMP-9 mRNA 表达较对照组明显降低；观察组血清NGAL、MMP-9 蛋白表达较对照组明显减少。上述结果提示，白术芍药散可能通过抑制NGAL、MMP-9 的转录和表达，进而抑制肠道炎症反应，改善肠黏膜屏障。

综上所述，白术芍药散联合美沙拉嗪治疗UC 具有良好的临床疗效，其作用机制可能与抑制NGAL、MMP-9 的转录和表达，进而抑制肠道炎症反应，改善肠黏膜屏障有关。