自动染色机在病理冷冻切片染色中的应用研究

叶美华 方庆全 张翠霞

[摘要]目的 探讨自动染色机在病理冷冻切片HE染色中的应用价值。方法 收集我院病理科2017年2月～2018年1月接收的术中冷冻切片病例100例，每例连续切片2片，固定后随机分为两组。甲组采用传统手工染色方法染色，乙组采用自动染色机染色，统计分析两组染色的优良率、时效性及资金投入方面的差异。结果 ①乙组的染色优良率（98%）高于甲组（94%），差异有统计学意义（P<0.05）。②单台冷冻切片染色时，甲组染色时间为（301.1±2.083）s，乙组为（297.2±0.186）s，两组差异无统计学意义（t=1.865，P>0.05）。当2台冷冻切片同时染色时，甲组染色时间为（556.9±1.714）s，乙组为（495.1±0.148）s，两组差异有统计学意义（t=35.92，P<0.001）。③甲组每年成本约12.4万元；乙组每年成本约3.74万元，乙组每年比甲组节省成本8.66万元。结论 自动染色机用于病理术中快速冷冻切片的HE染色效果好、效率高、成本低，值得推荐。

[关键词]自动染色机；冷冻切片；染色；成本

[中图分类号] R361.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）11（c）-0071-03

[Abstract] Objective To investigate the application value of automatic staining machine in HE staining of pathological frozen sections. Methods 100 cases of intraoperative frozen sections who were admitted from February 2017 to January 2018 in the Department of Pathology in the First Affiliated Hospital of Xiamen University were collected， 2 continuous sections in each case. After fixation， they were randomly divided into two groups. Group A was given traditional manual staining methods. Group B was given staining by automatic staining machine. Statistical analysis was performed on the differences of the excellent rate， timeliness and capital investment of the two groups of staining. Results ①The excellent rate of staining in group B （98%） was higher than that in group A （94%）， and the difference was statistically significant （χ2=4.17， P<0.05）. ②When staining a single frozen section， the staining time in group A was （301.1±2.083） s， and that in group B was （297.2±0.186） s. There was no statistically significant difference between the two groups （t=1.865， P>0.05）. When two frozen sections were simultaneously stained， the staining time in group A was （556.9±1.714） s， and that in group B was （495.1±0.148） s. The difference between the two groups was statistically significant （t=35.92， P<0.001）. ③The annual cost in group A was about 124 000 yuan； the annual cost in group B was about 37 400 yuan. group B saved 86 600 yuan per year compared to group A. Conclusion The automatic staining machine applied to pathological intraoperative rapid frozen section has a favorable HE staining effect， high efficiency and low cost， which is worthy of recommendation.

[Key words] Automatic staining machine； Frozen sections； Staining； Cost

快速將组织冷冻成一定硬度，切出薄片的过程，称冷冻切片[1]。随着医学技术的不断发展，冷冻切片在组织病理学技术中有着较广的应用范围[2-3]，对临床手术的快速病理诊断具有重大意义。病理工作人员可对外科手术医师送检的可疑病变组织进行快速冷冻切片染色，进而做出初步诊断。这对外科手术医师明确病变性质、制定下一步的手术方案有重要的指导作用[4]。 近几年随着外科手术量的不断增加，病理冷冻切片病例数也不断增加。为缓解病理工作人员的工作压力，提高工作效率与染色质量，我科引进了达科为（DP260）自动染色机，承担了冷冻切片的染色任务。现将自动染色机染色与传统手工染色方法在染色优良率、染色时效性、资金投入方面的比较进行探讨，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

收集厦门大学附属第一医院病理科2017年2月～2018年1月接收的术中冷冻切片病例100例，每例连续切片2片，切片厚5～6 μm，固定后随机分为两组。甲组采用传统手工染色方法染色，乙组采用自动染色机染色。每组各取50例进行单台（单例）染色，50例进行2台同时染色。

1.2方法

1.2.1仪器设备 达科为自动染色机（配有17个试剂缸，4个水洗缸，1个烤片箱，1个加载站点，3个卸载站点，疏水性玻片架等）、LEICA CM1950 恒温箱冷冻切片机（德国莱卡）、普通胶水、立式染缸数个。

1.2.2试剂 AAF液（乙酸A∶95%乙醇A∶甲醛F=5∶85∶10）[5]，Harris苏木精，盐酸乙醇，碳酸锂饱和溶液，氨水，伊红，80%乙醇，95%乙醇，100%乙醇。

1.2.3传统手工染色方法流程 ①切片固定后稍水洗5 s；②苏木精染色液染色120 s；③流水冲洗10 s；③1%盐酸乙醇1 s；⑤水洗5 s；⑥返蓝（用温水或者1%氨水等）5 s；⑦流水冲洗30 s；⑦0.5%伊红染色30 s；⑨流水稍洗10 s；⑩80%乙醇10 s；？輥？輯？訛95%乙醇10 s；？輥？輰？訛100%乙醇10 s；？輥？輱？訛100%乙醇10 s[6]。

1.2.4自动染色机染色方法流程 由于自动染色机机械臂的行进路线存在特定的迂回性，不是单一的直线型，为了减短染色的时间，避免试剂间的交叉污染[7]，结合本科室的实际工作情况而设置了快速冷冻HE染色程序（表1）。

1.2.5染色效果判读 由两名经验丰富的病理主管技师进行双盲阅片，评估冷冻切片染色效果，将切片分为优良片和差片。优良片评估标准：切片组织结构完整，染色红、蓝分明，胞质、胞核结构对比清晰，透明洁净。差片评估标准：切片组织结构不完整，染色红蓝对比差，核浆模糊不清，影响术中病理诊断。

1.2.6染色时效性 染色时间均从切完片固定后开始计时，移出100%乙醇后计时结束，用均数±标准差表示。

1.2.7资金投入 包括耗材支出、设备成本、人力成本。

1.3观察指标

比较甲组和乙组的染色优良率、染色时效性、资金投入方面的差异。

1.4统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件对所得数据进行分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料用百分率（%）表示，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组染色优良率的比较

乙组的染色优良率为98%（196/200）高于甲组的94%（188/200），差异有统计学意义（χ2=4.17，P<0.05）。

2.2两组染色时效性的比较

单台冷冻切片染色时，两组的染色时间比较，差异无统计学意义（t=1.865，P>0.05）。当2台冷冻切片同时染色时，乙组的染色时间短于甲组，差异有统计学意义（t=35.92，P<0.001）（表2）。

2.3两组资金投入方面的比较

本科室所有冷冻切片的染液均自主配制，甲、乙两组每年耗材支出均约为4000元。甲组无仪器设备投入，但同一时段多台冷冻切片染色时要多一个人力成本，每年成本约12万元，加上耗材支出，共计12.4万元；乙组自动染色机成本20万元，按6年折旧，每年成本约3.34万元，加上耗材支出，共计3.74万元。乙组每年比甲组节省成本8.66万元。

3讨论

1818年Pieter de Riemer 发明了冷冻切片技术，直至1905年Wilson Mecarty 将其列为病理学诊断方法之一[8]。如今，冷冻切片技术在病理诊断工作中具有举足轻重的作用[9-11]，冷冻切片技术是术中快速病理诊断的基石，术中快速病理诊断是病理科医师最具风险的急诊工作[12]， 如何在限定的时间内既快又好地完成制片，不仅是病理医师做出正确诊断的需要，更是术中临床医师的迫切要求[13]。而快速冷冻染色技术是冷冻切片技术中至关重要的环节，染色质量好坏直接关系到病理医师诊断的准确率。传统手工染色会因温度高低、试剂浓度、染色时间长短、环境、不同操作者等因素而使得胞质、胞核染色深浅不一，对比不均；自动染色机可预先设好染色时间和程序，使每一批次的染色步骤和时间能保持一致，染色后组织结构完整，着色鲜艳，红、蓝分明，核质对比清晰，染色均匀，而且省时省力[14]。此外，全自动染色机在密闭空间内完成染色过程，减少了试剂的挥发，减轻对病理科工作人员的化学危害[15]。

随着医院手术室规模的扩大，手术台数不断增加，冷冻切片数也不断增多。实际工作中，经常会遇到在同一时间段接收多份冷冻标本的状况。大多数医院的病理科，一般只有一个技术员承担冷冻切片制片的任务，当同时接收多份标本时，该技术员将无法在规定时间（15 min）内完成所有的冷凍切片，这就需要另一技术员的协助，即一个技术员制片，一个技术员染色。然而即便如此，冷冻制片时间延长的情况也时有发生。使用自动染色机后，技术员使用统筹方法，在染色机进行染色期间，可进行下一个患者冷冻组织的速冻和切片，再将切完固定好的冰冻切片上机，而后再将上一个染好的冷冻切片取出，完成电吹风吹干、中性树胶封片及核对、贴标签等后续工作。这样，技术员可及时处理同一时间段送来的批量标本，病理医师就能及时、准确地发出冷冻快速病理报告。这对缩短手术等候时间，快速确定手术方案，减轻患者痛苦有着重要意义。

随着病理实验室质量控制管理的深入，对冷冻切片染色的质量要求也越来越高。达科为自动染色机自带质控功能，为冷冻切片染色的质量控制提供便利和帮助[16]。但在实际运行中，由于冷冻切片制片的时限性，我科质控人员必须得先做质控，即先试染一张切片，然后显微镜下观察染色质量，以确保试剂处于有效的染色状态，不能完全依赖机器自带的质控功能。一旦试染片染色质量不佳，质控人员就得查出具体原因，及时更换染色试剂，并做好相关记录，确保高质量染色的正常运行，为后续工作做好充分的准备。质量控制做好了，就可以避免由染色不佳导致反复制片所造成的时间延误。要制作一张优良的冷冻切片，有赖于病理科技术员在工作中不断积累经验，提升自身的业务水平。

自动染色机在实际工作中也存在不足，即当同一染色机上多批次进行染色时，由于染色缸的使用及机械臂的起落时间会发生冲突，会导致出片时间拖延。为了加快染色速度，当染色批次>4次时，应考虑再增加一台自动染色机进行染色。机器每次使用完毕，须及时盖上缸盖，以有效避免试剂挥发，并定期进行保养和清洁。

综上所述，自动染色机的染色效果相对稳定，操作方便，可承担批量冷冻切片染色任务，有效减轻病理技术工作人员的负担，极大节省工作中的人力成本，节约时间资源，提高工作效率。

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