酶联免疫吸附法和电化学发光免疫法检测血清HBsAg结果的比较

刘丽娜，高 阳

［作者单位］451100河南新郑，新郑市人民医院检验科（刘丽娜，高阳）

乙型肝炎病毒（hepatitis Bvirus，HBV）感染率较高，感染后该病毒持续复制导致疾病迁徙、容易反复且难以治愈，最终发展成为肝硬化、肝衰竭，HBV已经严重危害人类健康［1］。合理的使用抗病毒药物是治疗HBV感染的主要手段［2］。目前检测肝组织内cccDNA是判断抗HBV疗效及患者预后的金标准，但该检测属于有创检测，对患者的损伤较大，在临床上普及较困难［3］。有研究表明，血清HBsAg作为肝内cccDNA血清学的替代指标，血清HBsAg水平的变化贯穿在整个病程中，准确地检测血清HBsAg水平的变化可以预测疾病进展、观察治疗效果［4］。酶联免疫吸附法（ELISA）和电化学发光免疫法（CLIA）是常用的血清HBsAg水平检测方法，在临床上均被广泛应用，为了解两种检测方法的优缺点，现将两种检测方法的准确性、精密度和灵敏度进行比较，报告如下。

1 资料与方法

1.1 血清标本 由卫生部临检中心提供标准血清盘50份，其中阳性标本30份，阴性标本20份，阳性率为60%。由北京中科质检生物技术有限公司提供HBsAg血清（液体）标准物质，浓度为2IU/ml和1IU/ml两种规格，产品编号分别为GBW（E）090071（GY-004）和 GBW（E）090071（GY-003）。

1.2 试剂与仪器 ELISA法使用安图PHOMO酶标仪，HBsAg使用上海科华试剂盒，CLIA法检测仪器为德国罗氏E411全自动电化学发光仪，试剂与该仪器配套。

1.3 测定方法 （1）分别使用ELISA法和CLIA法对HBsAg标准血清盘进行HBsAg检测，每次检测均行内部质控，计算两种方法阳性检出率，与标准血清阳性率做对比。（2）将HBsAg血清（液体）标准物质（2 IU/ml、1 IU/ml）分装 20 份，10 份冷冻保存每天监测一次，进行批间重复性试验；另外10份同批检测，进行批内重复性试验。（3）将HBsAg血清（液体）标准物质（1 IU/ml）按倍比稀释（1.0、0.5、0.25、0.125、0.063、0.032），将稀 释 后 的 标 本 分 别 使 用ELISA法和CLIA法检测，检测重复5次，平均值作为检测结果，将能测出的最低浓度作为检出限。

1.4 统计学方法 选用SPSS 22.0进行分析，计数资料组间采用χ2检验，计量资料采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 准确性比较 ELISA法和CLIA法检测阳性率均为65%，与标准血清盘提供情况相符，差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 精密度比较 CLIA法批内CV值、批间CV值均小于ELISA法，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 ELISA法和CLIA法检测HBsAg的变异系数值比较（%）

2.3 灵敏度比较 ELISA法在0.5 IU/ml时为阳性，0.25 IU/ml时为阴性，即ELISA法检出限为0.5 IU/ml；CLIA 法 0.063 IU/ml为阳性，在 0.032 IU/ml为阴性，CLIA法检出限为0.063 IU/ml。CLIA法检出限低于ELISA法。见表2。

表2 ELISA法和CLIA法检测HBsAg灵敏度比较（IU/ml）

3 讨论

我国是HBV感染高流行区，约有1.2亿人携带HBV，在HBV携带者中约有25%患者发展为慢性肝病，最终恶化成肝硬化甚至肝癌，该病毒通过血液、体液传播，传播范围广，严重影响人们的生活［5］。随着现代医学的发展，许多药物对抑制HBV的复制、减轻肝脏炎症、控制疾病有很好的作用，可以阻止疾病进展，减轻感染HBV对生活带来的影响［6］。HBsAg的出现常伴随HBV病毒的存在，对HBsAg检测可以反映体内HBV病毒复制的情况，其检测方式分为定性及定量两种方式［7］。定性检测可判断是否有HBV病毒感染，定量检测对于判断治疗效果、确定治疗方案及治疗时间有重要指导价值。目前定量检测在临床上的作用越来越受重视，血清HBsAg水平可以作为HBV携带者观察病情变化的指标。

ELISA法是将酶标记物作为检测的指示物，通过以抗原和抗体的结合发生特异性结合反应为基础的研究［8］。HBV病毒的抗原抗体复合物与酶标记物结合后，通过酶的催化作用，使含量较少的抗原或抗体能在短时间内被标识出来。该方法作为一种传统方法，具有价格便宜操作简便的优点，在我国HBV病毒感染筛查中被广泛应用。但由于该操作流程较多，每步的操作都会影响最终的结果，ELISA法在样本浓度过高或过低时会出现假阴性的现象，在临床应用中发现同一份标本在不同的实验室中测出不同结果，甚至在同一实验室中不同时间点不同人操作也会出现不一样的结果。这也降低了检测结果的可信度，给患者和临床医务人员带来了不必要的麻烦。CLIA法是将免疫技术与电化学检测结合到一起的一种免疫分析方法，这种方法是以化学发光物质作为标记物，利用抗原和抗体免疫前后电化学发光信号的改变进行的［9］。CLIA法利用电化学引发的特异性发光技术在电极表面的作用，提高了检测的灵敏度和线性范围，且该检测过程极大地降低了交叉污染，具有灵敏度高、特异性强的优点，在医学方面有广泛的应用前景。

该研究中，ELISA法和CLIA法在血清HBsAg检测阳性率方面无统计学差异（P＞0.05），与殷蓓琦等［10］CLIA法阳性检测率高于ELISA法的结果不符，这可能与该研究样本量较小、血清HBsAg浓度分布不均有关。另外ELISA法平均批内CV为8.64%，批间CV为16.39%；CLIA法平均批内CV为1.62%，批间CV为5.21%，这说明CLIA法比ELISA法精密度好，这与韩春俐等［11］将ELISA法和CLIA法用于检测HIV病毒的研究结果一致。研究结果显示CLIA法的检出限低于ELISA法，即CLIA法的灵敏度更高，在低浓度的样本测定中优势明显，熊海燕等［12］使用两种方法检测孕妇乙肝表面抗原的研究结果也与该研究观点一致。