茶叶中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测技术

禹子凤

我国目前茶产品质量安全较为突出的是农药残留、重金属元素、有害微生物等超标问题。茶叶是一种叶用的经济作物。在茶树生长旺季，特别是病虫害发生的旺季，为提高茶叶的产量和质量，茶农需要用化学农药防治病虫害。但一些茶农不按规定的用药量、用药次数、用药方法和安全间隔期施药甚至将不允许在茶树上使用的剧毒、高毒农药拿来使用，由此产生了非常严重的社会问题。

昌宁县茶产业发展迅速，茶叶生产加工技术和推广力度都有很大提升，因此开展茶鲜叶农药残留检测，加强茶树种植管理和茶原料的监管非常有必要。为此对昌宁县主要产茶区进行抽样检查茶叶中的有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量，以监管和提高昌宁县茶产品质量安全水平。选用RP-410农残速测仪对样品进行随机检测。

1茶叶中农药残留的现状

1.1农药的种类

农药根据其用途可以分为杀虫剂、杀瞒剂、杀菌剂、除草剂以及植物生长调节剂等根据化学结构又可分为有机氯杀虫剂、有机磷杀虫剂、拟除虫菊酷类和氨基甲酸酷类杀虫剂等。重点介绍一下有机磷农药和氨基甲酸酯类农药。

1.1.1有机磷农药

有机磷农药为杀虫剂、杀蜗剂，使用较广泛，多数易氧化、水解、异构化。有机磷农药引起中毒的作用机理是抑制了体内的胆碱酷酶，使其失去了分解乙酞胆碱的能力，从而造成体内乙酞胆碱的积累，刺激了中枢神经系统，使各项功能失调，引起生理紊乱，因此对茶叶中有机磷农药残留的检测是十分必要的。

1.1.2氨基甲酸酯类农药

氨基甲酸酷类农药毒作用机理与有机磷农药相似，主要是抑制胆碱酯酶活性，使酶活性中心丝氨酸的羟基被氨基甲酰化，因而失去酶对乙酞胆碱的水解能力。氨基甲酸酯类农药不需经代谢活化，即可直接与胆碱酯酶形成疏松的复合体。由于氨基甲酸酷类农药与胆碱酯酶结合是可逆的，且在机体内很快被水解，胆碱酯酶活性较易恢复，故其毒性作用较有机磷农药中毒为轻。但多数氨基甲酸酯类农药，在施用后不长时间内就会被降解为相应的代谢产物，其代谢產物通常具有与母体氨基甲酸酯类农药相同或更强的生物活性。氨基甲酸酯类农药可经呼吸道、消化道侵入机体，也可经皮肤粘膜缓慢吸收，主要分布在肝、肾、脂肪和肌肉组织中。

2检测方法

2.1检测原理

根据有机磷和氨基甲酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下胆碱酯酶催化碘化硫代丁酰胆碱水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。

2.2试剂的配置

2.2.1 pH8.0缓冲溶液：分别取11.9g无水磷酸氢二钾与3.2g磷酸二氢钾，用1000ml蒸馏水溶解

2.2.2 显色剂：分别取160mg二硫代二硝基苯甲酸和15.6mg碳酸氢钠，用20ml缓冲溶液溶解，4℃冰箱中保存。

2.2.3 底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱，加3.0ml蒸馏水溶解，摇匀后置4℃冰箱中保存备用。保存期不超过两周。

2.2.4 乙酰胆碱酶：根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，3min的吸光度变化△A0值应控制在0.3以上。摇匀后置4℃冰箱中保存备用。保存期不超过四天。

3分析步骤

3.1样品处理

选取采摘的茶树鲜叶样品，冲洗干净，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯中，加入5ml缓冲溶液，振荡1min～2min，倒出提取液，静置3min～5min，待用。

3.2对照溶液测试

先于试管中加入2.5ml缓冲溶液，再加入0.1ml酶液、0.1ml显色剂，摇匀后于37℃放置16min。加入0.1ml底物摇匀，此时检测液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3min的吸光度变化值△A0。

3.3样品溶液测试

先于试管中加入2.5ml样品提取液，其他操作与对照液测试过程相同，记录反应3min的吸光度变化值△At。

4结果计算及结果判断

4.1结果计算

抑制率（%）=[（△A0-△At）/△A0]×100

式中：

△A0—对照溶液反应3min的吸光度变化值；

△At—样品溶液反应3min的吸光度变化值。

4.2结果判定

结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示，当茶鲜叶样品提取液对酶的抑制率≥50%时，表示茶鲜叶中有高剂量有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在。需重复检验2次以上。。

通过结果分析得出，在随机抽取的昌宁县8个主要产茶区的茶树鲜叶选用RP-410农残快速检测仪进行检测，未发现有机磷和氨基甲酸酯类农药残留超标的现象。

RP-410农残速测仪对测定有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量具有很高的效率，用时较短，操作方便简洁。但仅限于检测有机磷与氨基甲酸酯类两类，且高农残才能反应出来，低残留的科学依据性不明显。因此做好茶叶农残的防控更为重要，可采取以下措施：坚决杜绝茶叶农残源头，禁用茶园不能使用的农药；茶园大力示范推广无农残的生物防治技术；实行科学用药，酌情使用高效、低毒、低残留的化学农药；加强无公害茶叶、茶叶绿色食品、有机茶生产基地建设；强化茶叶农残检测监控。

（作者单位：678100 云南保山昌宁县茶叶技术推广站）