妊娠期糖尿病患者血清Kisspeptin表达水平及其影响因素研究

王卓群，王 鹏，胡红琳，牛 敏，章 秋

本文意义：目前Kisspeptin作为生殖内分泌系统的研究热点之一，在能量代谢及生殖过程中起桥梁及纽带的作用，在中外各研究中大量报道了其与生殖及代谢的相关性，但关于其在糖尿病，特别是妊娠期糖尿病（GDM）中所发挥作用的研究目前尚不多见。本文对GDM患者Kisspeptin水平进行检测，观察其与代谢指标的相关性，结合多种临床常用生化指标，可以指导临床诊断治疗。

妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是一种严重危害孕妇及胎儿生长发育的代谢性疾病，多种激素参与其病情进展，由复杂的神经内分泌系统调节参与。Kisspeptin是由LEE等［1］于1996年在肿瘤转移机制研究中发现的多肽类激素，又称为人吻素-1（KISS-1），基因定位在染色体1q32-1q41，受体为G蛋白偶联受体54（GPR54）。研究发现，Kisspeptin/GPR54在生殖系统通过参与多种代谢过程发挥作用，在受精卵着床及性腺功能发育阶段有重要的作用［2］。关于Kisspeptin在GDM患者体内表达水平及相关的影响因素研究较少。本文旨在研究Kisspeptin在GDM患者体内表达水平、作用特点及影响因素，分析其与血糖代谢、胰岛β细胞功能及胰岛素抵抗指数之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 纳入标准：（1）在妊娠24～28周期间就诊于安徽医科大学第一附属医院产科门诊初诊，并于妊娠24～32周于安徽医科大学第一附属医院内分泌实验室行75 g葡萄糖耐量试验（oral glucose tolerance，OGTT）；（2）妊娠24～32周。排除标准：妊娠前糖耐量异常、严重脂代谢紊乱、妊娠期高血压、多囊卵巢综合征、甲状腺疾病等内分泌疾病及妊娠期急慢性心脏、肝肾等脏器疾病。选取2016年4—7月在安徽医科大学第一附属医院内分泌实验室行75 g OGTT的孕妇120例。参照国际糖尿病与妊娠研究组（IADPSG）的GDM诊断标准［3］，即未被诊断为糖尿病的孕妇于妊娠期24～28周行75 g OGTT，若满足以下1项则诊断为GDM：空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）≥5.1 mmol/L、1 h血糖（PG）≥10.0 mmol/L、2 hPG≥8.5 mmol/L。根据75 g OGTT结果将孕妇分为GDM组（61例）和正常糖耐量（normal glucosetolerance，NGT）组（59例）。根据体质指数（body mass index，BMI）将GDM组和NGT组进行分组，BMI≤24 kg/m2作为GDM-A亚组（31例）和NGT-A亚组（30例），BMI＞24 kg/m2作为GDM-B亚组（30例）和NGT-B亚组（29例）。研究对象均知情同意，本研究经安徽医科大学第一附属医院临床医学研究伦理委员会批准。

1.2 研究方法

1.2.1 观察指标 收集受试者年龄、妊娠期体质量、体质量差（妊娠期体质量与妊娠前体质量之差）等资料。受试者行75 g OGTT，试验前禁食8 h以上，连续3 d正常饮食，进食碳水化合物≥150 g/d，检查前静坐休息0.5 h以上，清晨留取空腹血标本4 ml，取全血标本2 ml，以1 000 r/min离心20 min，离心半径为12.8 cm，留取血清1 ml，置于-80 ℃冰箱保存用于测定血清Kisspeptin水平；取全血标本2 ml，以4 200 r/min离心5 min，离心半径为12.8 cm，留取血清1 ml，测定FBG、空腹胰岛素（fasting plasma insulin，FINS）、空腹C肽；将75 g无水葡萄糖粉溶于300 ml水中，于5 min内口服。以服第1口糖水时开始计时，1、2 h后分别抽取肘部静脉血5 ml，以4 200 r/min离心5 min，离心半径为12.8 cm，留取血清1 ml测定1 hPG、2 hPG、1 h胰岛素（INS）、2 hINS、1 h C肽、2 h C肽。利用稳态模型计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、胰岛β细胞功能指数（HOMA-β），HOMA-IR=FINS×FBG/22.5，HOMA-β=20×FINS/（FBG-3.5）［4］。

1.2.2 血清Kisspeptin水平测定 取出存放于-80 ℃冰箱中血清标本，4 ℃复融2 h，采用酶联免疫吸附测定试剂盒（武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，批号：AK0017JUN07005）检测血清Kisspeptin水平，严格按照说明书操作。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。计量资料以（s）表示，两组间比较采用独立样本t检验，采用Bonferroni法校正P值；多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；相关性分析采用Pearson相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

表1 GDM组和NGT组一般资料比较（s）Table1 Comparison of general data between the GDM group and NGT group

表1 GDM组和NGT组一般资料比较（s）Table1 Comparison of general data between the GDM group and NGT group

注：GDM=妊娠期糖尿病，NGT=正常糖耐量

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表2 GDM组和NGT组生化指标比较（s）Table2 Comparison of biochemical indicators between the GDM group and NGT group

表2 GDM组和NGT组生化指标比较（s）Table2 Comparison of biochemical indicators between the GDM group and NGT group

注：FBG=空腹血糖，PG=血糖，FINS=空腹胰岛素，INS=胰岛素，HOMA-IR=胰岛素抵抗指数，HOMA-β=胰岛β细胞功能指数

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表3 NGT-A亚组和NGT-B亚组生化指标比较（s）Table3 Comparison of biochemical indicators between the NGT-A subgroup and NGT-B subgroup

表3 NGT-A亚组和NGT-B亚组生化指标比较（s）Table3 Comparison of biochemical indicators between the NGT-A subgroup and NGT-B subgroup

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表4 GDM-A亚组和GDM-B亚组生化指标比较（s）Table4 Comparison of biochemical indicators between the GDM-A subgroup and GDM-B subgroup

表4 GDM-A亚组和GDM-B亚组生化指标比较（s）Table4 Comparison of biochemical indicators between the GDM-A subgroup and GDM-B subgroup

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2 结果

2.1 一般资料比较 GDM组和NGT组年龄、体质量比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。GDM组体质量差大于NGT组，差异有统计学意义（P＜0.05，见表1）。

2.2 生化指标比较 GDM组FBG、1 hPG、2 hPG、FINS、2 hINS、空腹C肽、2 h C肽、HOMA-IR均高于NGT组，HOMA-β低于NGT组，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组1 hINS、1 h C肽比较，差异无统计学意义（P＞0.05，见表2）。NGT-A亚组FBG、1 hPG、2 hPG、1 h C肽、2 h C肽与NGT-B亚组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；NGT-A 亚 组 FINS、1 hINS、2 hINS、 空腹C肽、HOMA-IR、HOMA-β均低于NGT-B亚组，差异有统计学意义（P＜0.05，见表3）。GDM-A亚组FBG、1 hPG、2 hPG、FINS、1 hINS、2 hINS、空腹C肽、1 h C肽、2 h C肽、HOMA-β与GDM-B亚组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；GDM-A亚组HOMA-IR低于GDM-B亚组，差异有统计学意义（P＜0.05，见表4）。

2.3 血清Kisspeptin水平比较 GDM组血清Kisspeptin水平为（66.5±40.9）ng/L，高于NGT组的（39.2±20.3）ng/L，差异有统计学意义（t=4.60，P＜0.01）。NGT-A亚组、NGT-B亚组、GDM-A亚组、GDM-B亚组血清Kisspeptin水平分别为（37.4±17.9）ng/L、（41.1±22.8）ng/L、（59.1±49.0）ng/L、（72.5±29.6）ng/L，4个亚组的血清Kisspeptin水平比较，差异有统计学意义（F=7.90，P＜0.01）。其中，GDM-A亚组血清Kisspeptin水平高于NGT-A亚组，差异有统计学意义（P＜0.05）；GDM-B亚组血清 Kisspeptin水平高于NGT-B亚组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.4 血清Kisspeptin水平与生化指标的相关性分析 所有受试者血清Kisspeptin水平与FBG、1 hPG、2 hPG、2 hINS、空腹C肽、2 h C肽、HOMA-IR呈正相关（P＜0.05），与HOMA-β呈负相关（P＜0.05）。NGT组血清Kisspeptin水平与FBG、2 hPG呈正相关（P＜0.05，见表5）。

表5 血清Kisspeptin水平与生化指标的相关性分析（r值）Table5 Correlation analysis between serum Kisspeptin level and biochemical indicators

3 讨论

GDM患者逐年增多，可导致多种不良妊娠结局，具体发病机制目前尚不明确，一般认为是多因素共同作用的结果。Kisspeptin是KISS-1基因编码的多肽类产物，包含145个氨基酸，包括Kisspeptin-54、Kisspeptin-13、Kisspeptin-10等多种短肽［1］，在妊娠期Kisspeptin通过作用于下丘脑调节促性腺激素释放激素（gonadotropin-releasing hormone，GnRH）的释放，调节黄体生成素（luteinizing hormone，LH）和卵泡刺激素的释放，从而调控生殖内分泌系统功能［2，5］。

目前关于Kisspeptin与能量代谢及生殖内分泌相关研究已成热门课题，但其与糖尿病特别是GDM相关性鲜有报道。本研究结果显示，GDM组患者血清Kisspeptin水平较NGT组明显升高。国外临床研究显示，Kisspeptin可作为辅助检测GDM的良好指标，其特异度可达到90%以上［6］。研究表明，GDM患者的血清Kisspeptin水平是胎盘功能障碍和围生期不良结局的潜在标志物［7］，因此关于妊娠期Kisspeptin水平的测定对预测GDM发生及围生期不良结局有重要意义。研究表明，普通非糖尿病人群的血清Kisspeptin水平与2 hINS呈负相关［8］。本研究结果显示，血清Kisspeptin水平与2 hINS水平呈正相关，考虑与妊娠期机体特异的激素水平有关。在妊娠期，血清Kisspeptin水平随孕周的增加逐渐上升，直至妊娠后期甚至分娩，妊娠后期Kisspeptin水平可以升高到非妊娠期的数千倍以上［9］，因此Kisspeptin在妊娠期代谢调节中发挥重要作用，对GDM可能有一定的促进作用。研究显示，Kisspeptin在妊娠晚期诊断GDM的特异度较妊娠早期高，因GDM多发生在妊娠中晚期，故Kisspeptin在妊娠早期不作为GDM的诊断指标，但在妊娠中晚期可以作为诊断GDM的敏感指标，并对病情评估起到良好的辅助作用［9］。

Kisspeptin在下丘脑、垂体、卵巢、睾丸、胰腺、小肠、肝脏等脏器均有表达，在糖尿病大鼠模型中胰高血糖素通过cAMP-PKA-CREB信号通路作用于肝脏产生Kisspeptin，其可作用于胰岛β细胞导致胰岛β细胞功能受损［10］。本研究结果显示，血清Kisspeptin水平与FBG、1 hPG、2 hPG、2 hINS、空腹C肽、2 h C肽、HOMA-IR呈正相关，与HOMA-β呈负相关，与目前已有动物实验结果［11］相一致。GDM患者体内Kisspeptin的表达水平与其遗传、营养状态、饮食、合并疾病等均有关系，BROWN等［11］发现对于高脂饮食的大鼠，其Kisspeptin-1 mRNA表达明显提高，血糖水平上升。成年女性网膜脂肪Kisspeptin-1 mRNA表达与BMI呈正相关，而在皮下脂肪的表达则无相关性［12］。故Kisspeptin水平一定程度上受到BMI的影响。动物实验表明，营养状态及进食可影响Kisspeptin-1 mRNA及Kisspeptin的表达水平，在大鼠诱导糖尿病模型中，血糖水平及体质量下降同时，Kisspeptin水平下降，下丘脑Kisspeptin-1 mRNA表达亦下降［13］。

综上所述，Kisspeptin在GDM患者的代谢途径发挥重要作用，有可能成为检测GDM的良好辅助指标。本研究的局限为样本量不足，仅对妊娠中晚期孕妇Kisspeptin水平与GDM相关性进行研究，在整个妊娠过程对能量代谢的影响尚不明确，且其对能量代谢具体影响机制及可能导致的妊娠结局还未完全明确，有待进一步收集数据进行补充研究。

作者贡献：王卓群、胡红琳进行文章的构思与设计；王卓群、王鹏、胡红琳、牛敏、章秋进行研究的实施与可行性分析；王卓群、王鹏进行数据收集与整理；王卓群进行统计学处理，撰写论文；王卓群、王鹏、胡红琳进行结果的分析与解释；胡红琳进行论文的修订，对文章整体负责，监督管理；王鹏、胡红琳、牛敏、章秋负责文章的质量控制及审校。

本文无利益冲突。