温肾固疏方对绝经后骨质疏松大鼠骨代谢以及脂代谢的影响

舒高 宋晓飞 张轲 陈晓东 梁鹏展

1. 广州中医药大学第三临床医学院，广东 广州 510006 2. 南阳市中心医院骨科，河南 南阳 473000 3. 宜宾市第二人民医院小儿外科，四川 宜宾 644000 4. 深圳市罗湖区中医院，广东 深圳 518000 5. 深圳平乐骨伤科医院，广东 深圳 518000

绝经后骨质疏松症是绝经后女性较为常见的一种全身性骨疾病。绝经后女性由于雌激素分泌不足，导致骨吸收抑制能力衰退，使得骨量流失加快；此外，有关研究发现女性雌激素水平下降还会导致血脂代谢异常的发生发展[1]，成为影响绝经后女性身体健康和生活质量的社会卫生问题。西医中常用的补充雌激素疗法在治疗过程中会增加患者发生心血管疾病的风险[2]。中医学认为肾对骨骼的生长具有重要的作用。近年来有研究报道指出，采用中医补肾疗法可以改善绝经后女性的骨质疏松症状[3]。本研究在建立绝经后骨质疏松大鼠模型的基础上，研究温肾固疏方对大鼠模型骨代谢及脂代谢指标的影响，探讨其改善骨质疏松和脂代谢异常的的作用机制，以期进一步发掘中医药治疗绝经后骨质疏松症及脂代谢异常的临床价值。

1 材料和方法

1.1 实验动物

80只雌性未孕SPF大鼠(200±20)g由郑州大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(豫)K2016-0002。大鼠在12 h：12 h的循环照明时间环境中饲养，温度为22.0～24.0°C，湿度为50%～60%。所有实验均按照动物保护与利用准则(批准文号SCXK 2012-0012)进行。

1.2 试剂

温肾固疏方由本院药房提供。I型胶原氨基端延长肽(PING)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP5b)、骨保护素(OPG)、骨钙素(BGP)试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司。

1.3 模型建立与分组干预

80只雌性未孕SPF大鼠在喂养7 d后，随机分为假去势组20只和去势组60只。去势组大鼠麻醉后，取俯卧位于手术面板上，在左右两侧腹后壁肌肉层较薄弱处打开腹腔，找到卵巢后将其连带输卵管末端轻轻提出体外，结扎后用眼科剪将卵巢全部切除；假去势组保留卵巢，只切除周围少量脂肪，其余操作同去势组。术后30 d，将去势大鼠随机分为对照组(n=20)、雌激素组(n=20)和实验组(n=20)。雌激素组按照0.05 mg/(mL·100 g)戊酸雌二醇，实验组按照20 g/(kg·d)温肾固疏方药剂，对照组和假去势组大鼠按照0.5 mL/100 g生理盐水，每天灌胃给药1次，连续治疗8周。

1.4 指标检测

最后一次治疗后，大鼠心室抽血处死，搜集血液不抗凝，放置2 h后，分离血清，使用英诺华D280自动分析仪，测定血清血脂水平。取右侧股骨，使用法国medilink超声骨密度仪测量其骨密度(BMD)值。按照试剂盒说明书步骤要求，采用酶联免疫法测定PING、TRACP5b、OPG、BGP四项骨代谢指标。

1.5 统计学处理

2 结果

2.1 各组大鼠骨密度值比较

与假去势组相比，对照组大鼠的股骨和股骨近端的BMD显著降低(P<0.05)；雌激素组和实验组大鼠同样部位的BMD均较对照组显著增加(P<0.05)。详见表1。

表1 各组大鼠右侧股骨Table 1 BMD value of the femur in rats in each

注：与假去势组比较，△P<0.05；与对照组比较，*P<0.05。

2.2 各组大鼠血清骨代谢指标比较

与假去势组相比，对照组大鼠的PING、TRACP5b、BGP水平显著提高(均P<0.05)，OPG水平明显下降(P<0.05)；灌胃治疗后，雌激素组和实验组大鼠的PING、TRACP5b、BGP水平均较对照组显著提高(均P<0.05)，而OPG水平显著降低(P<0.05)。详见表2。

表2 各组血清PING、TRACP5b、BGP、OPG含量Table 2 The contents of serum PING, TRACP5b, BGP, and OPG in each group

注：与假去势组比较，△P<0.05；与对照组比较，*P<0.05。

2.3 各组大鼠血脂指标比较

与假去势组大鼠比较，对照组大鼠四项血脂指标水平均明显恶化(均P<0.05)；灌胃治疗后，雌激素组和实验组大鼠的4项血脂指标水平较对照组均发生显著改善(均P<0.05)。详见表3。

表3 各组大鼠血脂指标水平Table 3 The levels of serum lipids in each group

注：与假去势组比较，△P<0.05；与对照组比较，*P<0.05。

3 讨论

骨代谢是破骨细胞和成骨细胞共同作用的过程。正常水平的雌激素不仅可直接通过成骨细胞及破骨细胞表面的受体刺激成骨细胞形成、抑制破骨细胞；还能通过降低甲状旁腺素的骨骼刺激来抑制破骨细胞[4-5]。研究发现，绝经后女性的雌激素水平下降，导致骨单位的激活频率增加，骨转换和重建加快，促进了骨单位流失，使骨量下降[6]。骨钙素(BGP)是一种由49个氨基酸组成的蛋白质，在调节骨钙代谢中起重要作用，其水平变化能反应骨代谢程度。有关研究发现，绝经后雌激素下降，会导致机体血液含钙量降低，诱发甲亢发生，进而使得高代谢型骨质疏松骨钙素升高[7]。I型胶原氨基端延长肽(PINP)是骨形成的特异性指标，骨更新率越快，该值越高，反之越低，相关研究发现，绝经后骨质疏松女性血清PING值较正常女性明显下降[8]。抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP5b)是反映破骨细胞活动状态的重要标志物，破骨细胞在骨吸收过程中会产生大量的TRACP5b，有关研究提出绝经后骨质疏松症患者的TRACP5b水平明显高于骨密度正常的女性[9]。骨保护素(OPG)是雌激素影响骨代谢的重要路径，是骨质疏松发生的重要因素之一[10]。相关研究发现绝经女性的骨密度与OPG水平之间存在正相关关系[11]。本研究结果发现，与假去势组大鼠相比，去势组大鼠的股骨及其近端的骨密度值明显下降(P<0.05)，并且骨代谢指标水平明显恶化(均P<0.05)，与上述研究结果基本相符。

国内相关研究证实，绝经后女性雌激素分泌下降与血脂异常的发生发展密切相关[12]。本研究结果显示，去势组大鼠的血脂指标水平较假去势组明显恶化(均P<0.05)，与王景等[13]研究结果基本一致，表明绝经后血脂代谢异常与雌激素分泌下降有关，主要原因是雌激素分泌下降导致肝脏酶对胆固醇、甘油三酯合成的抑制作用降低。

温肾固疏方主要由骨碎补、淫羊藿、党参、补骨脂等药材组成，以益肾滋阴为主，辅以温阳补气。温肾固疏方一方面可以通过强肾温阳来加强对骨的营养，刺激骨形成，具有抗骨质疏松的功效。例如其中的重要成分骨碎补总黄酮能够抑制骨保护素的减少，进而减少骨量的吸收。另一方面，骨碎补、淫羊藿、补骨脂等中药成分中含有类似植物雌激素活性的异黄酮物质，可降低雌激素水平减少对骨代谢和脂代谢产生的不良作用。本研究结果发现，采用温肾固疏方治疗的实验组大鼠的股骨及其近端的骨密度值，骨代谢指标和血脂指标均较对照组明显改善(均P<0.05)，表明温肾固疏方通过发挥补肾壮骨及类雌激素的作用，有效提高绝经后骨质疏松大鼠的骨密度，调节骨代谢和脂代谢指标水平，达到改善骨质疏松和调节血脂代谢的效果。