microRNA—26a和microRNA—199a在胃癌患者血清中的表达检测及其临床意义

周轶冰

[摘要] 目的 探讨胃癌患者血清中microRNA-26a和microRNA-199a表达检测及其临床意义。 方法 收集佳木斯市中心医院2015年1月～2017年12月期间确诊且行根治术的胃癌患者20例作为实验组，健康人群20例作为对照组，使用qRT-PCR方法对实验组和对照组血清中microRNA-26a和microRNA-199a的表达水平进行定量检测，分析检测结果的临床意义。 结果 microRNA-26a在实验组术前血清样本中的表达水平（1.76±0.54）明显低于对照组（5.33±1.12）（t=4.55，P=0.002），也明显低于术后血清样本中的表达水平（3.89±0.87）（t=5.11，P=0.001）；microRNA-199a在实验组术前血清样本中的表达水平（29.54±3.12）明显高于对照组（6.07±1.34）（t=6.19，P=0.001），也明显高于术后血清样本中的表达水平（15.87±2.64）（t=5.76，P=0.001）。 结论 microRNA-26a和microRNA-199a有可能成为胃癌早期诊断的血清标记物。

[关键词] 胃癌；血清样本；microRNA-26a；microRNA-199a

[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）23-0022-03

Detection and clinical significance of microRNA-26a and microRNA-199a in serum of patients with gastric cancer

ZHOU Yibing

Department of Second General Surgery， Jiamusi Central Hospital in Heilongjiang Province， Jiamusi 154002， China

[Abstract] Objective To investigate the detection and clinical significance of microRNA-26a and microRNA-199a in serum of patients with gastric cancer. Methods A total of 20 patients who were diagnosed with gastric cancer and underwent radical resection in Jiamusi Central Hospital from January 2015 to December 2017 were selected as the experimental group. 20 healthy people were selected as the control group. The expression levels of microRNA-26a and microRNA-199a in two groups were detected quantitatively by qRT-PCR. The clinical significance of the detection results was analyzed. Results The expression level of microRNA-26a in the preoperative serum samples of the experimental group （1.76±0.54） was significantly lower than that in the control group （5.33±1.12） （t=4.55， P=0.002）， which was also significantly lower than that of the control group after surgery（3.89±0.87） （t=5.11， P=0.001）. The expression level of microRNA-199a in the preoperative serum samples of the experimental group（29.54±3.12） was significantly higher than that in the control group（6.07±1.34） （t=6.19， P=0.001）， and the former was also significantly higher than that in postoperative serum samples（15.87±2.64）（t=5.76， P=0.001）. Conclusion microRNA-26a and microRNA-199a may become serum markers for the early diagnosis of gastric cancer.

[Key words] Gastric cancer； Serum samples； microRNA-26a； microRNA-199a

胃癌是一種死亡率极高的恶性肿瘤，在我国早期诊断率较低，患者确诊时已经进入中晚期，导致手术治疗的效果并不理想。胃癌的发生是多因素共同作用的结果，分为多个阶段，由多种基因共同参与，通常是由于癌基因和抑癌基因表达失调所引起的。microRNA长度约为21个核苷酸，广泛存在于各种真核生物中，是一种非蛋白质编码RNA。近年来，国内外许多学者均致力于microRNA在肿瘤组织和血清中异常表达的研究工作，已经证实，microRNA参与很多癌基因和抑癌基因的调控，对癌细胞的增殖、分化和凋亡均起着关键作用[1-3]。

本研究选取佳木斯市中心医院2015年1月～2017年12月期间确诊且行根治术的胃癌患者20例作为实验组，在我院进行健康体检的健康人群20例作为对照组，使用qRT-PCR方法对实验组和对照组血清中microRNA-26a和microRNA-199a的表达水平进行定量检测，分析检测结果的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集佳木斯市中心医院2015年1月～2017年12月期间确诊且行根治术的胃癌患者20例作为实验组，入组标准[4，5]：①经我院胃镜检查，取病理诊断为胃癌且行手术切除治疗，术后由病理学确诊；②患者手术过程中未出现大出血；③血清标本采集前未进行放化疗；④患者均为初发肿瘤，并无其他任何恶性病史。实验组中男12例，女8例，患者平均年龄（55.6±4.2）岁，根据肿瘤的TNM分期法对实验组中的样本进行分期。随机选取在我院进行健康体检的健康人群20例作为对照组，其中男10例，女10例，平均年龄（58.5±6.2）岁，两组一般资料情况见表1。

1.2 方法

1.2.1 收集血清样本 采用真空采血管装入促凝剂作为促凝管，抽取实验组中患者术前以及术后7 d外周血5 mL，同时抽取对照组外周血5 mL，将收集的血清样本置入促凝管中，放入离心机，3000转速离心10 min，取管内上清液置于2 mL离心管内，放入冰箱保存，温度-80℃[6-8]。

1.2.2 提取血清中总RNA 取血清样本20 μL，加入裂解液，置入振荡器混匀，再加检测外参CR100，继续振荡混匀；将样本放置5 min，分离核酸蛋白复合物，加入同体积氯仿，继续振荡混匀，再将样本放置5 min；将样本放入离心机内离心，取无色水相置入新的离心管；将1 μL无水乙醇加入500 μL转移液，转入吸附柱，放置2 min后离心机离心；向吸附柱加入去蛋白液和漂洗液，反复离心弃废液，将吸附柱放置在超净工作台上晾干后转入新的离心管，加入DEPC处理水20 μL，放置2 min后离心机离心，收集总RNA，放入冰箱备用，温度-80℃[9-11]。

1.3 統计学方法

所有数据均采用SPSS20.0统计学软件进行统计分析，其中年龄、肿瘤大小等患者的计量资料的组间差异使用非配对t检验，具体数据采用（x±s）表示，而各组间microRNA-26a和microRNA-199a表达水平的差异则采用U检验，P<0.05为差异有统计学意义，所有P均为双侧。

2结果

采用qRT-PCR法对实验组术前、术后和对照组中血清样本的microRNA-26a和microRNA-199a表达水平进行定量检测，结果发现microRNA-26a在实验组术前血清样本中的表达水平（1.76±0.54）明显低于对照组（5.33±1.12）（t=4.55，P=0.002），也明显低于术后血清样本中的表达水平（3.89±0.87）（t=5.11，P=0.001）；microRNA-199a在实验组术前血清样本中的表达水平（29.54±3.12）明显高于对照组（6.07±1.34）（t=6.19，P=0.001），也明显高于术后血清样本中的表达水平（15.87±2.64）（t=5.76，P=0.001），见表2。

3讨论

胃癌具有早期诊断率低、死亡率高等特点，是多因素共同作用的结果，分为多个阶段，由多种基因共同参与，通常是由于癌基因与抑癌基因表达失调所引起的。近年来，国内外许多学者均致力于microRNA在肿瘤组织和血清中异常表达的研究工作，已经证实，microRNA参与很多癌基因和抑癌基因的调控，对癌细胞的增殖、分化和凋亡均起着关键作用。

近年来，很多学者均把研究焦点集中在了恶性肿瘤的早期诊断上，尤其是肿瘤的血清标记物以其无创、易取材、检测方便等特点得到了广泛的重视。胃癌是一种死亡率极高的恶性肿瘤，在我国早期诊断率较低，患者确诊时已经进入到中晚期，导致手术治疗的效果并不理想，并且临床上常用的一些肿瘤标记物对于胃癌缺乏敏感性，因此寻找胃癌早期诊断的血清标物就尤为重要。microRNA长度约为21个核苷酸，广泛存在于各种真核生物中，是一种非蛋白质编码RNA，通过对癌基因和抑癌基因的调控参与肿瘤细胞增殖、分化的整个过程[12]。

本研究初步探讨了胃癌患者血清中microRNA-26a和microRNA-199a表达检测及其临床意义，我们对20例胃癌患者实验组术前、术后和对照组的血清样本中microRNA-26a和microRNA-199a的表达水平进行了定量检测，结果发现胃癌患者术前血清样本中microRNA-26a的表达水平显著低于术后，而胃癌患者术后血清样本中microRNA-26a的表达水平又显著低于对照组；胃癌患者术前血清样本中microRNA-199a的表达水平显著高于术后，而胃癌患者术后血清样本中microRNA-199a的表达水平又显著高于对照组，因此microRNA-26a和microRNA-199a有可能成为胃癌早期诊断的血清标记物[13，14]。

microRNA-26a是一种能够抑制多种促癌基因微小RNA，通过调控下游靶基因，抑制肿瘤细胞的增殖和分化，从而抑制肿瘤的形成，有研究已经证实，microRNA-26a在胃癌组织中的表达水平也显著降低，这与本研究结果一致，通过对患者病理特征的研究，发现microRNA-26a的表达水平与TNM分期存在一定的相关性，胃癌患者TNM分期越晚，microRNA-26a的表达水平越低，因此microRNA-26a不仅可以作为胃癌早期诊断的血清标记物，还有可能成为判断胃癌患者TNM分期以及预后情况的标记物[15]。

很多研究显示microRNA-199a和多种肿瘤均存在着表达的差异，本研究发现microRNA-199a在胃癌患者血清样本中的表达显著升高，并且在病理分级、TNM分期不同的样本中，microRNA-199a的表达水平也具有一定的差异性，是否与其他的临床指标有关还有待证实。

综上所述，胃癌患者术前血清样本中microRNA-26a和microRNA-199a的表达水平有显著变化，术前、术后血清样本中的表达也有显著差异，这些均提示microRNA-26a和microRNA-199a有可能成为胃癌早期诊断的血清标记物，但由于本研究的实验样本数量有限，对microRNA-26a和microRNA-199a与胃癌的分期、分型以及浸润程度的相关性还有待更进一步的研究。

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（收稿日期：2018-05-21）