3种饵料对中华绒螯蟹卵巢发育和育肥效果的影响

常国亮，葛永春，邓 登，向朝林，成永旭,4，吴旭干

( 1.淮阴师范学院，江苏省特色水产繁育工程实验室，江苏 淮安 223300； 2.上海海洋大学，农业部淡水种质资源重点实验室，上海 201306； 3.淮安市澳华农牧有限公司，江苏 淮安 223399；4.上海海洋大学，上海市教委水产动物遗传育种协同创新中心，上海 201306 )

中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)，是我国重要的养殖蟹类。目前，我国中华绒螯蟹养殖主要投喂冰鱼、玉米、小麦、黄豆及饼粕等传统饲料，随着养殖观念和水平的不断提高，已经逐渐发展为配合饲料为主的养殖模式，但中华绒螯蟹成蟹养殖生殖蜕壳后，仍有很多养殖户大量投喂冰鱼和螺蛳，期望促进中华绒螯蟹性腺发育[1]。冰鱼需要化冻、切鱼，人工劳动量大，且营养不均衡，饲料利用率低；投喂冰鱼易导致池塘水质恶化，造成中华绒螯蟹疾病和成蟹品质不稳定[2-4]，开发优质配合饲料来替代冰鱼进行后期育肥尤为重要[5]。

笔者在多年研究和实践的基础上，针对中华绒螯蟹性腺发育的营养需求和池塘养殖模式，开发了雌蟹专用膨化育肥饲料[6-7]。目前市场上中华绒螯蟹育肥饲料主要采用对设备要求不高、制造成本较低的硬颗粒饲料，这种饲料可以防止维生素和脂肪酸等氧化损失[8-9]，而投喂冰鱼可以加速中华绒螯蟹卵巢发育，提前上市，肝胰腺和卵巢色泽较好，因此，在养殖后期均投喂冰鱼进行中华绒螯蟹强化育肥[1]。笔者比较了研发的膨化育肥饲料、常规硬颗粒育肥饲料和冰鱼的主要营养成分，并分析这3种饵料对中华绒螯蟹育肥成活率、卵巢发育及色泽的影响，评价不同饲料的育肥效果，旨在为中华绒螯蟹配合饲料研发及推广中华绒螯蟹强化育肥途径提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

膨化饲料为澳华公司生产；硬颗粒饲料购自江苏兴化安丰饲料经销店；冰鱼购自江苏如东东凌渔港附近冷库，主要为凤鲚(Coiliamystus)和棘头梅童鱼(Collichthyslucidus)。3种饵料一次购足，冰箱中-20 ℃保存备用。试验蟹体质量65～90 g，取自上海海洋大学崇明中华绒螯蟹研究基地的成蟹养殖池塘，挑选规格整齐、体无外伤、肢体健全的生殖蜕壳后的雌蟹。试验蟹在循环水系统中暂养3 d后开始正式试验。试验前随机解剖5只，测定其卵巢指数和肝胰腺指数，分别为0.62%和9.73%。

1.2 方法

试验于2016年9—11月在上海海洋大学崇明基地的循环水养殖实验室进行(80 d)。试验分为膨化饲料、硬颗粒饲料和冰鱼3组，每组设3个重复。养殖容器为500 L的PE水槽(直径1.08 m，高1 m)，每个水槽中放入10只蟹，养殖水槽为循环水系统，24 h充气。试验期间，每日18:00投喂，配合饲料投喂量为总体质量的1%～3%，冰鱼为总体质量的4%～5%，平均水温高于20 ℃时，日投喂1次，平均水温低于20 ℃，每2 d投喂1次，具体投喂量根据水温和摄食等情况调整。投喂后于次日9:00时检查残饵和死亡情况，做好记录。每日上午用虹吸法去除桶底残饵和粪便1次，每7 d测定1次水质指标，根据水质指标少量换水。养殖期间，自然水温为16～26 ℃，pH 7.0～9.0，平均溶解氧>5 mg/L，氨氮<0.5 mg/L，亚硝酸盐<0.15 mg/L。

试验第40 d和第80 d，停食1 d，从每个水槽中随机取3只蟹，解剖观察卵巢发育。解剖前，用吸水纸擦干体表水分，用电子天平称量体质量(精确度0.01 g)，采用游标卡尺测量甲壳长和甲壳宽(精确至1 μm)，取出肝胰腺和性腺，准确称量质量后分别计算卵巢指数和肝胰腺指数，解剖后的蟹壳、肝胰腺和卵巢样品于-40 ℃冰箱中保存备用。试验结束后，统计各水槽中所有存活个体数量，计算成活率。卵巢指数和肝胰腺指数按下式计算：

肝胰腺指数/%=m1/m×100%

卵巢指数/%=m2/m×100%

式中，m为体质量，m1为肝胰腺质量，m2为卵巢质量。

1.3 生化分析和颜色测定

常规生化分析：取每种饵料1～2 g，粉碎过80目筛后在105 ℃下烘干测定水分含量；采用冻干机将冰鱼冷冻去除水分用于其他生化指标的测定。按AOAC[10]的标准方法测定蛋白质(凯氏定氮法)和灰分(550 ℃灼烧至恒定质量)含量；按Folch法[11]采用氯仿∶甲醇(2∶1，体积比)提取总脂，测定其含量。每种饵料均重复测定3个样品。

脂肪酸组成分析：根据文献[12]的方法分析脂肪酸含量，采用14%的三氟化硼—甲醇溶液对总脂进行甲酯化处理，旋转蒸发至所需含量进行脂肪酸分析，用高效气相色谱仪6890A (G1530A美国Agiltent 公司)测定。毛细管柱型号为Omegawax320(30.0 m×0.25 mm, USA)，进样口温度为200 ℃，FID检测器的温度为260 ℃，起始柱温为140 ℃，逐步升至240 ℃，使所有组分全部出峰。脂肪酸定量用面积百分比法，每种饵料重复测定3次。

氨基酸分析：按照文献[13]的方法进行常规氨基酸和色氨酸水解及测定, 酸性水解采用6.0 mol/L的盐酸溶液在110 ℃下水解样品24 h，碱性水解采用5 mol/L氢氧化钠溶液[含有5% SnCl2(m/V)]在110 ℃下水解 20 h，水解步骤和测定方法参考文献[13]。蛋氨酸和半胱氨酸测定采用过氧甲酸法进行水解[14]。所有氨基酸分离和定量均在氨基酸自动分析仪(S-433D德国赛卡姆公司)上进行。每种饵料重复测定2次，结果用平均值表示。

颜色测定：取育肥80 d试验蟹的蟹壳、肝胰腺和卵巢用于色泽测定。采用色差仪(CR-400，日本柯尼卡美能达公司)在D65光源下测定各组织的L*、a*、b*值[L*代表亮度值，0(黑)～100(白)；a*代表红绿轴的颜色饱和度，其中-a*为绿，+a*为红；b*代表蓝黄轴的颜色饱和度，其中-b*为蓝，+b*为黄]。蟹壳和卵巢组织采用烘干样品测定，测定前先将样品在60 ℃下烘24 h。蟹壳烘干样品直接用色差仪测定。头胸甲有些区域不平整，且不同位置的颜色有一定差别，因此测量每只中华绒螯蟹头胸甲上相对平整的6个测量点中的5个点，取其平均值作为该个体的测量值[15]。肝胰腺样品脂肪含量较多，烘干后会严重氧化发黑，故肝胰腺样品解冻后放入培养皿中，在其表面盖一层保鲜膜后用色差仪测定。

1.4 数据处理

所有数据均采用平均值±标准差表示，采用SPSS 17.0软件进行统计分析。用 Levene法进行方差齐性检验，当数据不满足齐性方差时，对百分比数据进行反正弦或者平方根处理。用单因子方差分析对试验结果进行分析， Tukey s-b(K)法进行多重比较；当数据转换后仍不满足齐性方差时，采用Games-Howell非参数检验进行多重比较；以P<0.05为差异显著。

2 结果与分析

2.1 不同饵料的生化组成

3种育肥饵料的常规生化组成见表1。冰鱼的水分含量高达76.14%，硬颗粒饲料的水分含量最低，仅为9.31%；冰鱼的粗蛋白含量最高，尽管硬颗粒饲料的粗蛋白含量显著高于膨化饲料，但是两种饲料的粗蛋白均在41%～44%之间。冰鱼中粗脂肪和灰分含量最高，膨化饲料中灰分含量最低，硬颗粒饲料中粗脂肪含量最低。冰鱼的总氨基酸含量、必需氨基酸和非必需氨基酸均明显高于其他两种饲料；硬颗粒饲料和膨化饲料的氨基酸组成接近，其中硬颗粒饲料中的半胱氨酸和甘氨酸明显高于膨化饲料，其他氨基酸含量比较接近(表2)。3种饵料的饱和脂肪酸中以C16:0和C18:0为主，硬颗粒饲料中的总饱和脂肪酸含量最高，膨化饲料中总饱和脂肪酸的含量最低；单不饱和脂肪酸中以C16:1 、C18:1n9和C18:1n7为主，其中C18:1n9占了单不饱和脂肪酸总量的42%～70%，硬颗粒饲料中C18:1n9 、C18:1n7和C20:1n9均显著高于膨化饲料，冰鱼中C16:1含量显著高于两种饲料；多不饱和脂肪酸中以C18:2n6、C18:3n3、C20:5n3和C22:6n3为主，膨化饲料中C18:2n6含量最高，冰鱼中C20:4n6、C20:5n3和C22:6n3含量最高，C18:2n6含量和C22：6n3/C20：5n3比值最低(表3)。冰鱼中高不饱和脂肪酸总量最高，膨化饲料中高不饱和脂肪酸总量最低。

表1 不同饵料的常规生化组成 %

注：同列数据上标不同字母的平均值间差异显著(P<0.05)；水分数据为湿质量，其他为干质量.

表2 3种饵料的氨基酸组成和含量(干质量) %

2.2 成活率和性腺发育

硬颗粒组雌蟹育肥成活率最低，冰鱼组和膨化饲料组无显著差异(P>0.05)(图1)，均超过93%。育肥40 d后，3个饵料组雌蟹的卵巢指数和肝胰腺指数均无显著差异(P>0.05)，膨化饲料组的卵巢指数比另外两组高出约1%，但是由于个体间误差较大，3组间差异不显著(P>0.05)；育肥80 d后，膨化饲料组和冰鱼组的卵巢指数显著高于硬颗粒组(P<0.05)，肝胰腺指数仍无显著差异；育肥80 d的肝胰腺指数略低于育肥40 d(表4)。

图1 摄食不同饵料的雌蟹的成活率柱状图上方不同字母表示平均值差异显著(P<0.05).

2.3 色泽

不同饵料育肥80 d后雌体蟹壳、肝胰腺和卵巢的色泽指标见表5。膨化饲料组蟹壳的红度显著高于硬颗粒饲料组(P<0.05)，冰鱼组介于两者之间，3组蟹壳的亮度和黄度均无显著差异(P>0.05)。膨化饲料组的蟹壳红度明显高于硬颗粒饲料组(图2a)。冰鱼红度显著低于另外两组(P<0.05)，膨化饲料组和冰鱼组的黄度值显著高于硬颗粒饲料组。膨化饲料组的卵巢最红，冰鱼组次之，硬颗粒饲料组红度最差，这与色差仪测定结果呈现高度一致性。膨化饲料组卵巢红度显著高于另外两组(P<0.05)，而硬颗粒饲料卵巢黄度最高，膨化饲料组黄度最低。

表3 3种饵料的脂肪酸组成 %

注：相对百分含量小于0.4%的脂肪酸表中未列出；n-3/n-6为n-3与n-6系列多不饱和脂肪酸含量的比值；同一行

数据上标不同字母的平均值间差异显著(P<0.05).

表4 雌中华绒螯蟹摄食不同饵料时的卵巢指数和肝胰腺指数 %

注：同列数据上标不同字母的平均值间差异显著(P<0.05).下同.

图2 不同饵料对雌体蟹壳、肝胰腺和卵巢色泽的影响a.蟹壳，b.肝胰腺，c.卵巢；每张小图中上行为硬颗粒饲料组，中行为膨化饲料组，下行为冰鱼组.

3 讨 论

3.1 不同饵料的生化组成

3种饵料中，冰鱼的粗蛋白、粗脂肪、灰分及水分含量皆最高。冰鱼灰分含量高与其骨骼及体内磷含量直接相关，而水分远远高于两种配合饲料，表明以同样质量的冰鱼作为育肥饵料真正提供的干物质最少，不到冰鱼质量的25%。而配合饲料受饲料质量和制粒工艺要求，其水分含量均低于冰鱼。目前市场上冰鱼价格约为3.5 元/kg，而粗蛋白含量约42%的中华绒螯蟹硬颗料饲料、膨化料价格分别约为6元/kg、9元/kg，看似以冰鱼作为中华绒螯蟹育肥料比配合饲料价格便宜，但换算为干物质后，其价格要高于配合饲料。冰鱼的总氨基酸含量、必需氨基酸和非必需氨基酸均明显高于两种饲料，硬颗粒饲料和膨化饲料的氨基酸组成比较接近，表明同样干物质的冰鱼可比两种配合饲料提供更多的氨基酸，但投喂量不当，冰鱼投喂过多时，于养殖水体中加入过多的氨氮，使中华绒螯蟹养殖池塘水质恶化[2-3]。

3.2 不同饵料对雌蟹成活率和卵巢发育的影响

3种饵料中，硬颗粒饲料组育肥的中华绒螯蟹成活率最低，不到70%，而冰鱼组和膨化饲料组中华绒螯蟹成活率均超过93%；生殖蜕壳后的中华绒螯蟹经育肥后即可上市，如果育肥阶段成活率较低，造成的损失更大，由此看来，硬颗粒饲料作为雌蟹育肥饲料并无优势。硬颗粒饲料组育肥中华绒螯蟹成活率低，可能与硬颗粒饲料的水稳定性、诱食性和消化吸收率不如膨化饲料和冰鱼有关。

蟹黄(肝胰腺及卵巢)和蟹膏(精巢)是中华绒螯蟹的主要可食用部分，含有丰富的营养成分[16]，肝胰腺指数和卵巢指数是评价蟹类食用价值的重要指标[17-18]。本试验中，育肥80 d时，3种饵料组蟹的卵巢指数均显著高于育肥40 d，表明育肥40 d时尚不能达到理想的育肥效果；育肥40 d时，肝胰腺指数较高，因为肝胰腺是中华绒螯蟹的营养贮存器官和脂类代谢中心[19-20]，此时，营养还未向卵巢充分转移。此时食用，肝胰腺往往具有苦味。因而育肥时间对蟹类育肥过程中肝胰腺指数、卵巢指数和蟹的营养成分具有显著影响[12]。要达到蟹黄与蟹膏丰满的理想育肥效果，中华绒螯蟹育肥时间要超过40 d。育肥80 d时，硬颗粒饲料组中华绒螯蟹卵巢指数显著低于膨化饲料组与冰鱼组，推测与硬颗粒饲料粗脂肪含量低，且多不饱和脂肪酸低于膨化饲料，而高度不饱和脂肪酸低于冰鱼有关[21]。同时也表明，选择硬颗粒饲料作为育肥饲料很难实现蟹黄与蟹膏丰满的育肥效果，而膨化饲料可替代冰鱼实现蟹黄与蟹膏丰满的理想育肥效果。

3.3 不同饵料对雌蟹色泽的影响

在消费市场中，中华绒螯蟹整体呈红色，雌蟹卵巢也呈红色(红膏)、肝胰腺呈橘黄色被认为是优质蟹[22]，价格也高。中华绒螯蟹体色取决于其体内的类胡萝卜素含量[23-24], 但中华绒螯蟹自身不能合成类胡萝卜素，能将食物中的类胡萝卜素直接沉积或转化为自身所需的类胡萝卜素[25-26]。研究表明，在中华绒螯蟹饵料中添加类胡萝卜素源可显著改善中华绒螯蟹体色[15,27]。本研究中，膨化饲料组蟹壳和卵巢红度优于另外两组，且肝胰腺黄度与冰鱼组一致，优于硬颗料饲料组，表明用膨化饲料养成的雌蟹具有更好的品相。同样条件下，相对硬颗粒饲料与冰鱼，用膨化饲料养成的中华绒螯蟹收益更高，表明在饲料中添加天然类胡萝卜素源优化配方，研发的膨化饲料具有显著改善中华绒螯蟹体色的效果。

全程投喂配合饲料可保证池塘养殖中华绒螯蟹的正常生长和性腺发育[28]，综合本试验膨化饲料对中华绒螯蟹成活率、育肥速度、卵巢指数(膏丰满度)和蟹体颜色的育肥效果来看，用膨化饲料替代冰鱼和硬颗粒饲料在池塘养殖条件下进行雌蟹育肥是可行的，相对于冰鱼，还可减少投饵劳动强度、降低管理难度。因不同批次的冰鱼种类和新鲜度有一定差异，所以用冰鱼进行育肥很难保持育肥蟹品质的稳定性，而膨化饲料的原料、加工工艺均可控，其饲料品质稳定，育肥的中华绒螯蟹品质也具有稳定性。另外，不同家系中华绒螯蟹的生长性能不同，对养殖环境的适应力也不相同[29]，硬颗粒饲料、膨化饲料和冰鱼对不同家系中华绒螯蟹生长、卵巢发育和育肥效果的影响有待进一步研究。