中草药对小鼠试验性腹泻的控制作用以及对小肠运动的影响

韩梅红，胡倩

(长江大学动物科学学院，湖北 荆州 434025)

动物腹泻是目前国内外养殖业常见疾病之一，其病理基础为肠道炎症、水肿、肠道运动过度活跃等。我国治疗动物腹泻的传统方法是使用抗生素，但抗生素的长期不规范使用，极易产生耐药性，且毒副作用大，往往得不到理想的治疗效果。与西药抗生素相比，中草药具有来源广泛、治疗效果显著、毒副作用小、不易产生耐药性等优点。因此，选用中草药来防治动物腹泻已成为当前养殖业亟待研究的问题。

中草药白头翁具有抗菌抗病毒作用，其主要功效为祛火除湿、凉血止痢；黄柏性味苦寒，有清热解毒、治疗痢疾的功能，它一般与其他药物组成复方以更好地发挥综合功效；马齿苋有清热利湿、解毒消肿、消炎、利尿的作用，全草主治赤白痢疾、赤白带下、肠炎等；枸杞具有补肾益精、养肝明目、补血安神、生津止渴等作用。为此，本研究通过番泻叶致泻的机制建立小鼠腹泻模型，探讨了由白头翁、黄柏、枸杞和马齿觅组成的复方中药对腹泻模型的抑制效果及对小肠运动影响，以为开发复方中药制剂治疗动物腹泻提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1)供试中草药 番泻叶、白头翁、黄柏、枸杞、马齿苋，购自湖北省荆州市花台弘卫大药房。

2)供试动物 体重(20±2)g的清洁级KM实验小鼠共80只，雌雄各半，购自湖北省预防医学科学院实验动物中心。购回后按组分笼饲养，笼器具及饮水瓶用前彻底消毒，每日清洗1次。

3)其他试剂 羧甲基纤维素钠、奶粉、蔗糖、淀粉、活性炭末、印度墨汁等试剂由长江大学动物科学院动物医学实验室提供。

4)中药复方的制备 称取白头翁60g、黄柏20g、枸杞10g、马齿苋10g，将配好后的药材按1∶8加入清水，武火加热至沸腾后改文火煮30min后过滤，滤渣再按1∶6加入清水，煮沸30min后再过滤，将2次所得的滤液混合搅匀后浓缩至100mL，生药含量为1g/mL。将制备所得的药液置4℃冰箱保存备用。

5)番泻叶水煎液的制备 称取番泻叶30g，粉碎，加1000mL水煮沸约10min，将药液用双层纱布过滤，80℃水浴浓缩至0.3g/mL，滤液转移至干净灭菌的玻璃瓶中，置4℃冰箱保存备用。

6)营养性半固体糊的制备 取羧甲基纤维素钠10g，溶于250mL蒸馏水中，分别加入奶粉16g、蔗糖8g、淀粉8g和活性炭末2g，搅拌均匀，配制成300mL约300g的黑色半固体糊状物。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及处理

取供试小鼠80只，随机分为4组，分别作为空白对照组、模型对照组、中药低剂量组、中药高剂量组，每组20只。

1.2.2 试验性小鼠腹泻模型的建立

80只小鼠在建立腹泻模型前禁食12h，自由饮水。第1、2周空白对照组用生理盐水灌胃(0.4mL/只)，其余小鼠均用番泻叶灌胃(0.4mL/只)，2周后发现空白对照组小鼠粪便正常，肛周毛发干净尚未出现其他现象，其余小鼠粪便均为水样粪便，肛周毛发污染，出现腹泻现象，表明试验性腹泻小鼠模型造模成功。

1.2.3 复方中药对腹泻模型小鼠的治疗效果观察

造模成功后，复方中药低、高剂量组每只分别灌服药液0.4mL，生药含量分别为0.5g/mL和1.0g/mL，空白对照组和模型对照组灌服等量生理盐水，每天2次，连续给药7d。

将小鼠分别置于代谢笼中，将笼子下置吸收纸垫，观察小鼠的粪便状况总共6h，在此期间更换滤纸。小鼠大便分为:粪便正常、肛周毛发干净；而外形正常但水分较多、软便、黏液便及水样便属于腹泻的症状。根据滤纸上的腹泻便滩数计为稀便次数。并计算各组小鼠的腹泻率、稀便率和腹泻抑制率，计算公式如下：

腹泻率=(腹泻小鼠只数/小鼠总只数)×100%

稀便率=(稀便次数/总排便次数)×100%

腹泻抑制率=[(模型对照组腹泻次数-中药组腹泻次数)/模型对照组腹泻次数]×100%

每日观察记录小鼠消耗的食物量、消耗的水量、排便次数、稀便次数、粪便的量和特征、皮肤光泽和死亡情况等。

1.2.4 复方中药对腹泻小鼠胃内残留率的影响

每组各取10只小鼠用于胃内残留率的测定。末次给药后30min，给选取的小鼠灌胃营养性半固体糊0.04mL/g体重，灌胃后20min后将小鼠脱颈椎处死，打开其腹部，将胃贲门和幽门结扎。用滤纸将其擦拭干净后称取全胃的重量，然后沿胃大弯将胃剪开，将胃内的内容物洗去后再用滤纸将其擦拭干净，这时称取胃的净重，将上述称取的胃全重和胃净重进行比较，其差值为胃内残留物的重量，而胃内残留物的重量与所给半固体糊的重量之比为胃内残留率[1]。

1.2.5 复方中药对腹泻小鼠小肠运动的影响

每组剩下的10只小鼠用于碳墨推进率的测定。末次给药后30min各组小鼠给于印度墨汁灌胃，0.4mL/只。25min后，将小鼠脱颈椎处死，然后打开小鼠腹腔将其腹腔内肠系膜分离出来。从幽门的上端至回盲部的下端剪取，将此段剪取的肠管置于平台上，将其拉成直线，测量此时肠管的总长度，从幽门至墨汁前沿的距离作为“墨汁推进长度”。按下式计算碳墨推进率[2,3]：

碳墨推进率=(墨汁推进长度(cm)/小肠总长度(cm))×100%

2 结果与分析

2.1 一般情况观察

空白小鼠整个试验期间活泼好动，饮食、饮水等情况均正常，生长良好，粪便正常，肛周毛发干净，未出现腹泻现象。试验组小鼠在灌服番泻叶之后，出现了明显的腹泻现象，肛周毛发被稀便污染，精神萎靡，采食基本停止，饮水量也降低，活动量减少，大便由稀糊状到水样不等，肛周被毛被粪便污染。

灌服复方中药后，模型对照组小鼠腹泻症状继续加重，水样粪便，肛周被毛被稀便污染，但无死亡现象。中药低、高剂量组小鼠腹泻症状逐渐减轻，随着给药次数的增加，小鼠排粪次数逐渐减少，粪便逐渐变稠直至成形，肛周毛发干净，中药高剂量组治疗效果更好。表明该复方中草药对试验性小鼠腹泻有明显的抑制作用，对于减少小鼠排粪次数和粪便含水量有积极的控制作用。

2.2 复方中药对小鼠腹泻的影响

复方中药对小鼠腹泻的影响观测结果见表1。

表1 复方中草药对小鼠腹泻的影响

注：同列数据后不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。表2、表3同。

由表1可见，中草药高剂量组、中草药低剂量组、空白对照组的排便次数均显著低于模型对照组的25.60±2.70(P<0.05)；稀便率亦显著低于模型对照组的87.26±3.26(P<0.05)，表明小鼠腹泻模型建立成功。空白对照组、中草药低剂量组、中草药高剂量组的排便次数比模型对照组分别降低了28%、31%、34%。由此可以看出，复方中草药高剂量组对小鼠腹泻有明显的治疗作用。

2.3 复方中药对腹泻小鼠胃残留率的影响

采用营养性半固体糊法研究复方中药对腹泻小鼠胃残留率的影响，结果见表2。

表2 复方中药对腹泻小鼠胃残留率的影响

由表2可知，与模型对照组相比，中草药高、低剂量组胃残留率差异均极显著(P<0.01)，表明该中草药复方有抑制胃排空作用；而中草药低剂量组虽然较模型对照组胃残留率增高，但并没有达到正常水平，仍然比空白对照组胃残留率低4.93%，中药高剂量组胃残留率50.33±11.56达到并超过了空白对照组(50.13±2.50)，中药高剂量组明显比低剂量组的胃残留率高，差异具有统计学意义(P<0.01)，说明1.0g/mL剂量的中药复方才能更好地抑制腹泻小鼠的胃排空，增高其胃残留率。

2.4 复方中药对腹泻小鼠小肠运动的影响

采用碳墨法研究复方中药对腹泻小鼠小肠运动的影响，结果见表3。

表3 复方中药对腹泻小鼠小肠运动的影响

由表3可知，模型对照组与空白对照组相比有极显著性差异(P<0.01)，表明对番泻叶致小鼠小肠运动亢进模型小鼠建立成功；与模型对照组比较，中药高、低剂量组对小鼠的小肠蠕动均有显著性差异，高剂量组差异极显著(P<0.01)，低剂量组差异也极显著(P<0.01)。表明复方中草药对腹泻小鼠的小肠蠕动抑制作用明显，但高剂量组效果更好，已接近正常小鼠。

3 讨论与小结

1)本研究采用番泻叶灌胃复制模型，中草药高剂量组的排便次数和稀便率分别为9.23±1.44、26.37±2.11，均显著低于模型对照组的25.60±2.70(P<0.05)和87.25±3.26(P<0.05)，与低剂量组相比，中草药高剂量组的腹泻抑制率明显增加，差异极显著(P<0.01)，结果表明，中草药高剂量组对小鼠的腹泻有极显著的控制作用。

2)本研究采用营养性半固体法和碳墨推进法探索该中药复方对腹泻小鼠胃肠道运动的作用。结果显示，与模型对照组相比，中草药高剂量组提高胃残留率差异极显著(P<0.01)，表明中草药高剂量组有抑制胃排空作用，而中草药低剂量组虽然较空白组胃排空率增高，但并没有统计学意义。中草药低剂量组的碳墨推进率极显著低于模型对照组(P<0.01)，而中草药高剂量组差异极显著(P<0.01)。表明复方中草药对腹泻小鼠的小肠蠕动抑制作用明显，对小鼠的肠道有明显的保护作用。

3)本试验中所用药物白头翁具有抗菌抗病毒作用，其主要功效为祛火除湿、凉血止痢。黄柏性味苦寒，有清热解毒，治疗痢疾的功能，它一般与其他药物组成复方以更好地发挥综合功效。本研究采用的复方中草药由白头翁、黄柏、枸杞和马齿觅4味单味药物组成，通过建立小鼠腹泻模型、营养性半固体法和碳墨推进法试验结果表明，复方中草药高剂量组对小鼠腹泻起到了显著的抑制作用，能够有效调节动物胃肠道微生物菌群抑制病原微生物的生长、繁殖，改善消化系统机能、降低腹泻的发生及改善胃肠功能。该结果可为中草药抗腹泻机理和小肠运动的研究提供有效依据。

4)本研究首先给健康小鼠灌服番泻叶汤复制腹泻小鼠模型，然后用白头翁、黄柏、枸杞、马齿苋等制成中药复方制剂对小鼠进行灌药治疗，通过腹泻小鼠的湿便次数、胃内残留率以及对小肠推进率来探讨试验用中药复方对腹泻小鼠的控制作用及对小肠运动的影响。研究结果表明该中药复方对番泻叶所致小鼠腹泻有明显的抑制作用，可有效保护小鼠肠道粘膜，缩短首次排便时间，并能显著减少胃排空，增加胃残留率。该中药复方对腹泻小鼠小肠运动的亢奋有明显的抑制作用，且抑制的效果与用药剂量有关。